伊乐藻对铜绿微囊藻的化感作用研究

发布时间：2020-05-28 06:42

【摘要】： 化感作用是水生植物与藻类竞争的重要手段。化学生态学的观点认为,化感作用仅存在于外来植物与本地物种之间。本论文以水鳖科的外来植物伊乐藻对本地分离的铜绿微囊藻的化感作用为研究对象,同时以苦草对铜绿微囊藻的化感作用为参照,采用在不同规模下共培养和植物种植水培养铜绿微囊藻的方法实验证明了伊乐藻对本地分离的铜绿微囊藻株系(FACHB905)有明显的抑制作用,而苦草则不具有明显的抑藻作用,并成功地从伊乐藻中分离得到几种甾酮类化感物质。对伊乐藻中化感物质分泌的量与其所处生长环境之间的关系作了定性说明,且对如何利用伊乐藻的化感现象应用于富营养化湖泊的治理与生态修复提出了建议。具体结论如下: 1.伊乐藻与铜绿微囊藻(FACHB905)的共培养实验表明,伊乐藻对铜绿微囊藻存在明显的抑制作用,对于8 L铜绿微囊藻溶液当起始浓度为105个/mL时,在10天的实验周期内对藻的抑制达到半数致死量时所需的伊乐藻为3g(鲜重);对于400 mL铜绿微囊藻溶液当起始浓度为105个/mL时,在10天的实验周期内对藻的抑制达到半数致死量时所需的伊乐藻为0.2g(鲜重),即伊乐藻对铜绿微囊藻的化感抑制作用在一定范围内可获得良好的重现; 2.不同营养和光强下培养的苦草其种植水对铜绿微囊藻的抑制实验表明:苦草与铜绿微囊藻(FACHB905)之间不存在明显的化感作用,这也符合Alastair(2003)关于化感作用仅存在于外来植物与本地物种之间的观点; 3.伊乐藻中的化感物质不是以挥发态的形式释放到环境中去的; 4.以柱层析、薄层层析、气相色谱质谱联用、液相色谱质谱联用、核磁共振等手段首次从伊乐藻体内成功分离并鉴定出化感物质豆甾-4-烯-3,6-二酮(分子式为C29H46O2、分子量为426)及其同系物(分子式为C29H46O2、分子量为412)和豆甾-4,22-二烯-3-酮,4-甲基-(分子式为C30H49O、分子量为424)。其中豆甾-4-烯-3,6-二酮为伊乐藻中主要的化感物质,在干粉中的含量约为4 ppm,以96孔板法作为活性检测方法时其活性效应在6.5mg/L时达到48%。 5.不同环境下培养的伊乐藻其种植水对铜绿微囊藻的抑制情况表明,伊乐藻分泌化感物质的量与其所处的生境有关,当其处于逆境中时,如受到光限制或者营养限制时分泌化感物质的量会增多。因而利用植物化感控制富营养化湖泊中藻类过渡繁殖时,要遵循先降低营养盐水平后利用植物化感的原则,即利用植物化感控藻是一个长期、缓慢的过程。
【图文】：

吸收谱,紫外,甲醇,乙酸

乙酸四丁铵及乙酸铵等通常被用来作为离子抑制剂/离子对使用，联系到方法要能适用 LC-MS 分析检测及控制 pH 在酸性条件下，，选用乙酸。又因为酸的存在对叶绿素-a 和 β-carotene 的分离影响较大（拖尾且保留时间差别小），所以，经过实验确定水的 pH=3.75（用乙酸调节）。如果仅用甲醇/水作为流动相则chl-a 和 b-carotene 不能洗出，考虑到乙酸乙酯/二氯甲烷同水不互溶易堵塞而选用丙酮和甲醇以一定比例混合，可以较好地将三者区分开。确定流动相为：A：甲醇/水(pH=3.75)=8/2；B：甲醇/丙酮=7/3。梯度洗脱为：0min：A％=100％、B％=0；5min: A%=0、B％=100％；25min：A％=100％、B％=0；postime= 5min。c.紫外吸收波长的确定：根据三种物质的紫外吸收等吸收图（图 2-18）可知，脱镁叶氯酸-a的最大吸收在 410nm。叶绿素-a在 434nm，β-胡萝卜素的最大吸收波长在 480nm处。本实验分别采用三个通道对三种物质定量。这与文献（ Luis, 2000; 刘红, 2003; Louda, 1998; Tadashi, 2005; Wang, 2006）的介绍吸收波长还是稍有出入的。

参考文献,伊乐藻,荧光检测器,化感作用

博士学位论文Doctoral Dissertation 伊乐藻对铜绿微囊藻的化感作用研究实验中对于荧光检测器进行分段设定，即在 0～8.5min参照Peophorbide-a的荧光特性设定，而在 8.5min后按照Chl-a的特性设定。这与文献[1]中介绍差别很大若按照文献中的设定，则理论上是得不到荧光谱图的，本实验也证实这点。
【学位授予单位】：中国科学院研究生院（水生生物研究所）
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：X173;X52

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