微生物来源的氯代邻苯二酚1,2-双加氧酶基因在拟南芥中降解芳香族化合物的机理研究
【学位授予单位】:复旦大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:X172
【图文】:
邻苯二酚的平板上,一些野生型种子己经不能萌发或者萌发后即死亡。在 0.5mM邻苯二酚的平板上,所有野生型种子都不能萌发。而在含有 0.5mM顺,顺一己二烯二酸的平板上,野生型种子依然能发育出完整的植株(图1.3)。这就说明邻苯二酚和其代谢产物顺,顺一己二烯二酸具有明显的毒性差别,邻苯二酚对植物的毒性远远高于顺,顺一己二烯二酸。这种毒性的差别使我们可以用邻苯二酚作为衡量转基因拟南芥中侨尤基因是否具有功能的指示。同时,我们也注意到,高于 0.4mM的顺,顺一己二烯二酸对于植株的发育也有一定抑制作用,具体表现在对植株的根发育有抑制作用(图 1.3)。这说明高浓度的顺,顺一己二烯二酸对植株还是具有一定的毒性。
图1.3邻苯二酚和顺,顺一己二烯二酸的植物毒性。Figure1.3Relativetoxieitiesofeateeholandeis,eis一mueonieacidtoArabidoPsis.野生型植株在含有0.1(左),0.2(中)和0.5mM(右)邻苯二酚或顺,顺一己二烯二酸的1/2MS培养基平板1生长两周后的形态观察同时,我们考察了27个T:代CT植系在含有0.1或02mM邻苯二酚的平板上的表型。研究结果显示,尽管几代植株还存在着遗传分离,几乎所有的CT植株还是展现比野生型更高的邻苯二酚耐受性。根据以上结果,我们选择了CTI一2,CTI一5,CTI一16和CTI一19四个CT株系用于进一步的研究。3.啊C基因在cT植株中的表达使用Rl’-pCR的方法,验证侨九)基因在T4代纯合转基因株系中的表达。内源的ACTjl基因作为内参。在所分析的四个CT株系中,都鉴定出一条大小800bP左右的对应于老斌了编码序列的条带,而在vT植株中则没有发现相应的信号。
图1.6在土壤中CT植株具有显著提高的邻苯二酚耐受性。Figure1.6EnhaneedeateeholtoleraneesofCTPlantsinsoil·A和B,杭株在含有1mM的PNS润湿的土壤中生长两周.随后撼三一天用、mM的邻笨二酚处理三周。C,以上处理「{,植株鲜重。数据通过t检验。**代表尸、0.01。D,E和F,植株在PNS润湿的土壤中生长两周戈D),随后i味三天”〕3mM的邻苯二酚处理止周(E),川水恢复三周(F)。这体现了CT植株对邻苯二酚较高的耐受性,这也有利于CT植株在植物降解邻苯二酚中的应用(图1.SA,B)。6.CT植株在土壤中的邻苯二酚抗性观察我们选取野生型和CTI一2株系在土壤中研究了邻苯二酚对于种子萌发和植株生长的影响。种子被播种在事先用0,l,2,或3mM邻苯一酚的州S培养基润湿过的土壤上,放置在培养室中培养。同野生型相比,CTI一2株系的萌发率更高。在植株萌发后,用含有O,1,2,或3mM的邻苯二酚的水进行喷洒处理。在一周过后,更多的CT植株存活下来。喷洒处理三周后,CTI一2植株展现
【共引文献】
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本文编号:2802317
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