多菌灵降解菌的降解特性及GFP标记
发布时间：2021-01-13 04:06
多菌灵（carbendazim，MBC），化学名称为N-（2-苯并咪唑基）氨基甲酸甲酯，是一种高效广谱低毒的内吸性杀菌剂，属于苯胺类苯并咪唑衍生物，其使用范围较广，既可作为工业杀菌剂，又可作为一种有内吸活性的植物杀菌剂，用于水果保鲜、蔬菜、果树和谷类作物的病害防治。多菌灵化学性质稳定，在土壤中降解半衰期较长，能持久地残留在使用部位，易致累积效应，其在水体和土壤中的累积会对生态环境和人类健康造成威胁。有研究表明，微生物降解是沉积环境中多菌灵去除的主要途径。因此寻找并研究多菌灵降解菌是十分必要的。山西省农药重点实验室已分离筛选出一株细菌NY97-1，经试验证明该菌具有降解多菌灵的特性，若能进一步研究其降解能力、降解条件，为其在生物修复中的应用提供依据和实验材料，无疑具有重要的理论和现实意义。绿色荧光蛋白（GFP）基因作为标记基因，被广泛应用于环境微生物学方面，由于其表达稳定，容易观测，因此，可以以GFP作为报告基因，对菌株NY97-1进行GFP标记，为今后研究多菌灵降解菌在自然环境中的定殖、分布及动态变化打下基础。本文的主要研究内容有如下几个方面：1．该菌株NY97-1的16S rDNA经...
【文章来源】：山西大学山西省
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
第一章 前言
1. 生物降解
1.1 微生物在生物圈进化中的作用
1.2 生物降解及生物降解能力
1.3 生物降解与微生物生理活性物质
1.4 检测生物降解能力的原则
1.5 利用环境样品和纯培养菌进行生物降解实验
2. 绿色荧光蛋白在环境微生物中的应用
2.1 绿色荧光蛋白简介
2.2 绿色荧光蛋白分子的结构及特性
2.3 绿色荧光蛋白的性质
2.4 绿色荧光蛋白的检测方法
2.5 绿色荧光蛋白在微生物降解污染物研究中的应用
3. 杀菌剂多菌灵研究进展
3.1 理化性质
3.2 生态毒理
3.3 多菌灵的残留检测方法
3.4 多菌灵的生物修复技术
3.5 多菌灵的降解机制
4. 本论文的研究目的重点及意义
第二章 多菌灵降解菌NY97-1分类学地位的确定
1. 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 形态特征及生理生化反应
1.3 以染色体DNA为模板PCR扩增16S rDNA
1.4 以单菌落为模板PCR扩增16S rDNA
2. 结果
2.1 生理生化特性
2.2 16S rDNA序列的NCBI在线BLAST比对结果
3. 讨论
第三章 NY97-1的绿色荧光蛋白标记
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂与仪器
1.3 NY97-1基因组DNA启动子基因文库的构建
1.4 强启动子片断的序列测定及分析
1.5 NY97-1组成型启动子活性片段的亚克隆及GFP基因穿梭表达载体的构建
1.6 重组DNA的电转化重组DNA的电转化
1.7 转化子的荧光检测
1.8 转化子的稳定性检测
2. 结果
2.1 启动子基因文库的构建
2.2 强启动子片断的测序分析
2.3 穿梭表达载体的构建
2.4 转化子的荧光检测与稳定性检测
3. 讨论
第四章 NY97-1降解多菌灵的研究
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.2 多菌灵降解率的检测
1.3 菌悬液的制备
1.4 多菌灵浓度对菌株降解多菌灵的影响
1.5 氮源对菌株降解多菌灵的影响
1.6 pH值对菌株降解多菌灵的影响
1.7 培养温度对菌株降解多菌灵的影响
2. 结果
2.1 多菌灵标准曲线的绘制
2.2 多菌灵浓度对菌株降解多菌灵的影响
2.3 氮源对菌株降解多菌灵的影响
2.4 pH值对菌株降解多菌灵的影响
2.5 培养温度对菌株降解多菌灵的影响
3. 讨论
4. 结论
第五章 NY97-1对多菌灵毒力的影响
1. 试验材料与方法
1.1 实验材料
1.2 菌株NY97-1对六种病原真菌的拮抗性能测定
1.3 多菌灵对六种病原真菌的毒力测定
1.4 低浓度多菌灵与NY97-1菌液混配对六种病原真菌的共同作用
2. 结果
2.1 NY97-1对六种枯萎病原菌的拮抗效果
2.2 多菌灵单剂对六种枯萎病原菌的毒力测定结果
2.3 多菌灵与NY97-1菌液对六种枯萎病原菌的共同作用
3. 小节与讨论
第六章 多菌灵对黄瓜抗氧化酶及ATP酶的影响
1. 材料与方法
1.1 仪器与试剂
1.2 试验设计
1.3 样品预处理及酶活性测定
2. 结果与分析
2.1 不同浓度多菌灵对黄瓜SOD活性的影响
2.2 不同浓度多菌灵对黄瓜CAT活性的影响
X活性的影响"> 2.3 不同浓度多菌灵对黄瓜GPX活性的影响
+-ATP活性的影响"> 2.4 不同浓度多菌灵对黄瓜Na+-ATP活性的影响
2+-ATP活性的影响"> 2.5 不同浓度多菌灵对黄瓜Mg2+-ATP活性的影响
3. 讨论
第七章 多菌灵降解菌的使用对多菌灵胁迫下黄瓜抗氧化酶及ATP酶的影响
1. 材料方法
1.1 供试土壤
1.2 供试菌株
1.3 杀菌剂多菌灵及其降解菌的使用
1.4 测定方法
1.5 数据处理
2. 结果与分析
2.1 降解菌的使用对黄瓜细菌蛋白的含量的影响
2.2 降解菌的使用对黄瓜SOD酶的影响
2.3 降解菌的使用对黄瓜CAT酶的影响
2.4 降解菌的使用对黄瓜ATP酶的影响
3. 讨论
第八章 本文主要研究结论及展望
1. 本文主要研究结论
1.1 关于PCR扩增16S rDNA基因序列时模板的选择
1.2 GFP标记的思路
1.3 菌株的多重功能——降解多菌灵与拮抗六种枯萎病原菌
1.4 多菌灵单剂及其与NY97-1活体菌液混合使用对六种枯萎病原菌的毒力
1.5 菌株NY97-1降解多菌灵的能力
1.6 多菌灵对黄瓜抗氧化酶的影响
2. 论文创新之处
3. 本文工作的重点及对今后工作的展望
参考文献
攻读博士期间发表的论文
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]多菌灵降解菌NY97-1的鉴定及降解条件[J]. 张丽珍,乔雄梧,马利平,秦曙,郝变青. 环境科学学报. 2006(09)
[2]油菜植株及其土壤中多菌灵残留检测及动态[J]. 游子涵,陈智东,柳训才,薛爱芳,李胜清,陈浩. 农药. 2006(08)
[3]萘降解细菌的分离及其降解基因的分子检测[J]. 李永君,赵化冰,任河山,梁靖,蔡宝立. 生态学杂志. 2006(07)
[4]高效液相色谱测定甘蓝中多菌灵残留分析方法[J]. 刘丽英,李桂荣,刘丽华. 农药科学与管理. 2006(07)
[5]有机污染物生物降解模拟试验[J]. 张乐,蔡磊明,王捷. 农药. 2006(07)
[6]多菌灵降解菌株djl-6-2的分离、鉴定及降解特性[J]. 许敬亮,王志春,王堃,李顺鹏. 中国环境科学. 2006(03)
[7]筛选菌种酶催化降解微囊藻毒素的特点[J]. 何宏胜,闫海,周洁,葛世友,肖宝清,吕乐. 环境科学. 2006(06)
[8]多菌灵和五氯酚钠的光降解和光催化降解初探[J]. 陈建秋,王铎,娄红瑞. 现代农药. 2006(02)
[9]固相微萃取-高效液相色谱-荧光检测法测定番茄中的多菌灵和噻菌灵[J]. 胡彦学,杨秀敏,王志,王春,赵锦. 色谱. 2005(06)
[10]转座元件介导的苯胺代谢基因簇的筛选和鉴定[J]. 梁泉峰,陈明,徐玉泉,张维,平淑珍,陆伟,宋先龙,王薇薇,耿立召,Masahiro Takeo,林敏. 科学通报. 2005(16)
本文编号：2974183
【文章来源】：山西大学山西省
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
第一章 前言
1. 生物降解
1.1 微生物在生物圈进化中的作用
1.2 生物降解及生物降解能力
1.3 生物降解与微生物生理活性物质
1.4 检测生物降解能力的原则
1.5 利用环境样品和纯培养菌进行生物降解实验
2. 绿色荧光蛋白在环境微生物中的应用
2.1 绿色荧光蛋白简介
2.2 绿色荧光蛋白分子的结构及特性
2.3 绿色荧光蛋白的性质
2.4 绿色荧光蛋白的检测方法
2.5 绿色荧光蛋白在微生物降解污染物研究中的应用
3. 杀菌剂多菌灵研究进展
3.1 理化性质
3.2 生态毒理
3.3 多菌灵的残留检测方法
3.4 多菌灵的生物修复技术
3.5 多菌灵的降解机制
4. 本论文的研究目的重点及意义
第二章 多菌灵降解菌NY97-1分类学地位的确定
1. 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 形态特征及生理生化反应
1.3 以染色体DNA为模板PCR扩增16S rDNA
1.4 以单菌落为模板PCR扩增16S rDNA
2. 结果
2.1 生理生化特性
2.2 16S rDNA序列的NCBI在线BLAST比对结果
3. 讨论
第三章 NY97-1的绿色荧光蛋白标记
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 主要试剂与仪器
1.3 NY97-1基因组DNA启动子基因文库的构建
1.4 强启动子片断的序列测定及分析
1.5 NY97-1组成型启动子活性片段的亚克隆及GFP基因穿梭表达载体的构建
1.6 重组DNA的电转化重组DNA的电转化
1.7 转化子的荧光检测
1.8 转化子的稳定性检测
2. 结果
2.1 启动子基因文库的构建
2.2 强启动子片断的测序分析
2.3 穿梭表达载体的构建
2.4 转化子的荧光检测与稳定性检测
3. 讨论
第四章 NY97-1降解多菌灵的研究
1. 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.2 多菌灵降解率的检测
1.3 菌悬液的制备
1.4 多菌灵浓度对菌株降解多菌灵的影响
1.5 氮源对菌株降解多菌灵的影响
1.6 pH值对菌株降解多菌灵的影响
1.7 培养温度对菌株降解多菌灵的影响
2. 结果
2.1 多菌灵标准曲线的绘制
2.2 多菌灵浓度对菌株降解多菌灵的影响
2.3 氮源对菌株降解多菌灵的影响
2.4 pH值对菌株降解多菌灵的影响
2.5 培养温度对菌株降解多菌灵的影响
3. 讨论
4. 结论
第五章 NY97-1对多菌灵毒力的影响
1. 试验材料与方法
1.1 实验材料
1.2 菌株NY97-1对六种病原真菌的拮抗性能测定
1.3 多菌灵对六种病原真菌的毒力测定
1.4 低浓度多菌灵与NY97-1菌液混配对六种病原真菌的共同作用
2. 结果
2.1 NY97-1对六种枯萎病原菌的拮抗效果
2.2 多菌灵单剂对六种枯萎病原菌的毒力测定结果
2.3 多菌灵与NY97-1菌液对六种枯萎病原菌的共同作用
3. 小节与讨论
第六章 多菌灵对黄瓜抗氧化酶及ATP酶的影响
1. 材料与方法
1.1 仪器与试剂
1.2 试验设计
1.3 样品预处理及酶活性测定
2. 结果与分析
2.1 不同浓度多菌灵对黄瓜SOD活性的影响
2.2 不同浓度多菌灵对黄瓜CAT活性的影响
X活性的影响"> 2.3 不同浓度多菌灵对黄瓜GPX活性的影响
+-ATP活性的影响"> 2.4 不同浓度多菌灵对黄瓜Na+-ATP活性的影响
2+-ATP活性的影响"> 2.5 不同浓度多菌灵对黄瓜Mg2+-ATP活性的影响
3. 讨论
第七章 多菌灵降解菌的使用对多菌灵胁迫下黄瓜抗氧化酶及ATP酶的影响
1. 材料方法
1.1 供试土壤
1.2 供试菌株
1.3 杀菌剂多菌灵及其降解菌的使用
1.4 测定方法
1.5 数据处理
2. 结果与分析
2.1 降解菌的使用对黄瓜细菌蛋白的含量的影响
2.2 降解菌的使用对黄瓜SOD酶的影响
2.3 降解菌的使用对黄瓜CAT酶的影响
2.4 降解菌的使用对黄瓜ATP酶的影响
3. 讨论
第八章 本文主要研究结论及展望
1. 本文主要研究结论
1.1 关于PCR扩增16S rDNA基因序列时模板的选择
1.2 GFP标记的思路
1.3 菌株的多重功能——降解多菌灵与拮抗六种枯萎病原菌
1.4 多菌灵单剂及其与NY97-1活体菌液混合使用对六种枯萎病原菌的毒力
1.5 菌株NY97-1降解多菌灵的能力
1.6 多菌灵对黄瓜抗氧化酶的影响
2. 论文创新之处
3. 本文工作的重点及对今后工作的展望
参考文献
攻读博士期间发表的论文
致谢
个人简历
【参考文献】：
期刊论文
[1]多菌灵降解菌NY97-1的鉴定及降解条件[J]. 张丽珍,乔雄梧,马利平,秦曙,郝变青. 环境科学学报. 2006(09)
[2]油菜植株及其土壤中多菌灵残留检测及动态[J]. 游子涵,陈智东,柳训才,薛爱芳,李胜清,陈浩. 农药. 2006(08)
[3]萘降解细菌的分离及其降解基因的分子检测[J]. 李永君,赵化冰,任河山,梁靖,蔡宝立. 生态学杂志. 2006(07)
[4]高效液相色谱测定甘蓝中多菌灵残留分析方法[J]. 刘丽英,李桂荣,刘丽华. 农药科学与管理. 2006(07)
[5]有机污染物生物降解模拟试验[J]. 张乐,蔡磊明,王捷. 农药. 2006(07)
[6]多菌灵降解菌株djl-6-2的分离、鉴定及降解特性[J]. 许敬亮,王志春,王堃,李顺鹏. 中国环境科学. 2006(03)
[7]筛选菌种酶催化降解微囊藻毒素的特点[J]. 何宏胜,闫海,周洁,葛世友,肖宝清,吕乐. 环境科学. 2006(06)
[8]多菌灵和五氯酚钠的光降解和光催化降解初探[J]. 陈建秋,王铎,娄红瑞. 现代农药. 2006(02)
[9]固相微萃取-高效液相色谱-荧光检测法测定番茄中的多菌灵和噻菌灵[J]. 胡彦学,杨秀敏,王志,王春,赵锦. 色谱. 2005(06)
[10]转座元件介导的苯胺代谢基因簇的筛选和鉴定[J]. 梁泉峰,陈明,徐玉泉,张维,平淑珍,陆伟,宋先龙,王薇薇,耿立召,Masahiro Takeo,林敏. 科学通报. 2005(16)
本文编号：2974183
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