菲律宾蛤仔（Venerupis philippinarum）在苯并（a）芘胁迫下差异基因的筛选与分子生物标志物的研究
发布时间：2021-03-11 07:21
本文根据目前我国近海多环芳烃污染现状，以近海养殖重要经济贝类菲律宾蛤仔（Venerupis philippinarum）为研究对象，克隆了菲律宾蛤仔芳烃受体介导的解毒代谢途径几种关键基因，包括芳烃受体蛋白（AhR）、芳烃受体核转位因子（ARNT）、热休克蛋白90（HSP90）。研究了毒性最强的多环芳烃（PAHs）——苯并（a）芘（BaP）对菲律宾蛤仔组织解毒代谢相关基因的表达调控规律，通过对在BaP胁迫下菲律宾蛤仔解毒代谢相关基因的克隆及基因表达分析，探究双壳贝类PAHs解毒代谢机制；构建了菲律宾蛤仔PAHs消减cDNA文库，筛选、鉴定了差异表达基因，结合室内实验和海区现场验证，初步建立了基于菲律宾蛤仔的PAHs分子生物标志物监测技术，为海洋环境污染监测和水产品安全评价提供基础数据和技术支持。1菲律宾蛤仔芳烃受体（AhR）介导的关键基因克隆与表达分析菲律宾蛤仔芳烃受体蛋白（VpAhR）的cDNA全序列长2870bp，开放阅读框（ORF）长为2391bp，共编码796个氨基酸残基，不具备信号肽，属于胞内蛋白，含有2个核定位序列（NLS）：K45RRRR49和P67SKRHRE73。BLA...
【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：161 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
接触标志物、效应标志物、易感性标志物的相互关系
.2 抑制性消减杂交原理及主要技术流程.2.1 抑制性消减杂交原理SSH 技术的原理可概括为―消同富异‖，即消减同源序列，富集差异序列（庆和景志忠, 2009）。抑制性 PCR 是通过利用含引物序列的双链接头（Adap 和 Adaptor 2R）充当引物模板，使两端接上同一接头的非目的双链片段（具向末端重复序列），在退火时产生―锅-柄‖结构（pan-like structure，见图 1-2法与引物配对，从而选择性抑制非目的序列的扩增，以达到抑制非目的片段择性扩增目标片段的目的（百度百科, 2010）。该方法运用杂交二级动力学原理丰度高的单链 cDNA 在退火时产生同源杂交的速度要快于丰度低的单DNA，使原来在丰度上有差别的单链 cDNA 相对含量达到均等化，即低丰度表达的基因不会被丢失，而高丰度差异表达的基因又不会被过量的分离。消交过程扣除了不同处理组基因群（Tester 和 Driver）间的同源序列（岳桂008）。
为 21 世纪影响人类生存与健康的三大环境问题。多环芳烃（Polynumatic hydrocarbons, PAHs）是被联合国列为 27 种重要的 PTS 之一（江桂05）的污染物，相当部分 PAHs 具有致癌、致畸和致突变性，其中苯并（（BaP）的致癌性最强（岳敏等, 2003），因此常作为 PAHs 的典型代表用中 PAHs 污染状况评估。近年来，PAHs 在脊椎动物体内的解毒代谢途径及相关机制的研究已取要进展（刘移民, 2001; 安社娟, 2005）。研究表明，PAHs 进入细胞后先与体（AhR）及 HSP 90 复合体结合，进入细胞核后结合了配体（如 PAHsR 再与核内芳烃受体核转位因子（ARNT）结合，HSP 90 复合体随即解R/ARNT 复合体识别并结合在位于 CYP1A1 等基因的 5’上游区域的外来反应元件（XREs）上，从而增强了 CYP1A1、GST 等基因的转录，同时 AhR 自身的转录（刘移民, 2001; 安社娟, 2005）（见图 2-1）。然而，目前有关双壳贝类 AhR 介导的 PAHs 解毒代谢途径方面的研究尚属空白。
【参考文献】：
期刊论文
[1]栉孔扇贝在B[a]P胁迫下生物标志物筛选的研究[J]. 潘鲁青,刘娜,王静. 水生生物学报. 2012(02)
[2]中国海典型生境双壳类软体动物多样性特点[J]. 徐凤山,张均龙. 生物多样性. 2011(06)
[3]胶州湾浮游纤毛虫丰度和生物量的周年变化[J]. 于莹,张武昌,赵楠,孙晓霞,张翠霞,丰美萍,肖天. 海洋与湖沼. 2011(05)
[4]菲和苯并（b）荧蒽曝露对翡翠贻贝外套膜的氧化胁迫及损伤[J]. 杨涛,陈海刚,蔡文贵,秦洁芳,贾晓平. 南方水产科学. 2011(04)
[5]苯并[a]芘对马氏珠母贝血淋巴细胞DNA损伤的研究[J]. 张先勇,刁晓平,杨宝,周海龙,曹佳. 生态环境学报. 2011(Z1)
[6]抑制性消减杂交技术（SSH）及其在烟草生物学研究中的应用[J]. 李立芹,鲁黎明. 中国烟草科学. 2011(03)
[7]打顶烟草根尖组织抑制性消减cDNA文库的构建及其序列分析[J]. 戚元成,马雷,王菲菲,刘卫群. 中国农业科学. 2011(07)
[8]刺参（Apostichopus japonicus）高温胁迫消减cDNA文库的构建与分析[J]. 吉成龙,孙国华,杨建敏,宋志乐,刘相全,王卫军. 海洋与湖沼. 2011(01)
[9]抑制性消减杂交技术及其在水生动物基因克隆中的应用[J]. 单晓枫,孙佳敏,张洪波,王俊义,钱爱东. 黑龙江畜牧兽医. 2010(23)
[10]翡翠贻贝CYP4基因克隆及其表达水平分析[J]. 周驰,李纯厚,张为民,贾晓平. 热带海洋学报. 2010(04)
博士论文
[1]苯并（α）芘对栉孔扇贝血细胞免疫毒性机制的研究[D]. 刘静.中国海洋大学 2009
[2]黄河及河口烃类有机物的分布特征及源解析[D]. 张娇.中国海洋大学 2008
[3]玉米干旱胁迫相关基因的克隆与分析[D]. 岳桂东.山东大学 2008
[4]草鱼肠道组织消减cDNA文库的构建及免疫相关基因的克隆与表达分析[D]. 苏建明.湖南农业大学 2007
硕士论文
[1]沙田柚花柱自交不亲和相关基因的克隆与鉴定[D]. 阳晶.广西师范大学 2008
[2]近海环境中有机污染物对底栖鱼体内EROD活性的诱导作用研究[D]. 霍传林.大连理工大学 2003
本文编号：3076091
【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：161 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
接触标志物、效应标志物、易感性标志物的相互关系
.2 抑制性消减杂交原理及主要技术流程.2.1 抑制性消减杂交原理SSH 技术的原理可概括为―消同富异‖，即消减同源序列，富集差异序列（庆和景志忠, 2009）。抑制性 PCR 是通过利用含引物序列的双链接头（Adap 和 Adaptor 2R）充当引物模板，使两端接上同一接头的非目的双链片段（具向末端重复序列），在退火时产生―锅-柄‖结构（pan-like structure，见图 1-2法与引物配对，从而选择性抑制非目的序列的扩增，以达到抑制非目的片段择性扩增目标片段的目的（百度百科, 2010）。该方法运用杂交二级动力学原理丰度高的单链 cDNA 在退火时产生同源杂交的速度要快于丰度低的单DNA，使原来在丰度上有差别的单链 cDNA 相对含量达到均等化，即低丰度表达的基因不会被丢失，而高丰度差异表达的基因又不会被过量的分离。消交过程扣除了不同处理组基因群（Tester 和 Driver）间的同源序列（岳桂008）。
为 21 世纪影响人类生存与健康的三大环境问题。多环芳烃（Polynumatic hydrocarbons, PAHs）是被联合国列为 27 种重要的 PTS 之一（江桂05）的污染物，相当部分 PAHs 具有致癌、致畸和致突变性，其中苯并（（BaP）的致癌性最强（岳敏等, 2003），因此常作为 PAHs 的典型代表用中 PAHs 污染状况评估。近年来，PAHs 在脊椎动物体内的解毒代谢途径及相关机制的研究已取要进展（刘移民, 2001; 安社娟, 2005）。研究表明，PAHs 进入细胞后先与体（AhR）及 HSP 90 复合体结合，进入细胞核后结合了配体（如 PAHsR 再与核内芳烃受体核转位因子（ARNT）结合，HSP 90 复合体随即解R/ARNT 复合体识别并结合在位于 CYP1A1 等基因的 5’上游区域的外来反应元件（XREs）上，从而增强了 CYP1A1、GST 等基因的转录，同时 AhR 自身的转录（刘移民, 2001; 安社娟, 2005）（见图 2-1）。然而，目前有关双壳贝类 AhR 介导的 PAHs 解毒代谢途径方面的研究尚属空白。
【参考文献】：
期刊论文
[1]栉孔扇贝在B[a]P胁迫下生物标志物筛选的研究[J]. 潘鲁青,刘娜,王静. 水生生物学报. 2012(02)
[2]中国海典型生境双壳类软体动物多样性特点[J]. 徐凤山,张均龙. 生物多样性. 2011(06)
[3]胶州湾浮游纤毛虫丰度和生物量的周年变化[J]. 于莹,张武昌,赵楠,孙晓霞,张翠霞,丰美萍,肖天. 海洋与湖沼. 2011(05)
[4]菲和苯并（b）荧蒽曝露对翡翠贻贝外套膜的氧化胁迫及损伤[J]. 杨涛,陈海刚,蔡文贵,秦洁芳,贾晓平. 南方水产科学. 2011(04)
[5]苯并[a]芘对马氏珠母贝血淋巴细胞DNA损伤的研究[J]. 张先勇,刁晓平,杨宝,周海龙,曹佳. 生态环境学报. 2011(Z1)
[6]抑制性消减杂交技术（SSH）及其在烟草生物学研究中的应用[J]. 李立芹,鲁黎明. 中国烟草科学. 2011(03)
[7]打顶烟草根尖组织抑制性消减cDNA文库的构建及其序列分析[J]. 戚元成,马雷,王菲菲,刘卫群. 中国农业科学. 2011(07)
[8]刺参（Apostichopus japonicus）高温胁迫消减cDNA文库的构建与分析[J]. 吉成龙,孙国华,杨建敏,宋志乐,刘相全,王卫军. 海洋与湖沼. 2011(01)
[9]抑制性消减杂交技术及其在水生动物基因克隆中的应用[J]. 单晓枫,孙佳敏,张洪波,王俊义,钱爱东. 黑龙江畜牧兽医. 2010(23)
[10]翡翠贻贝CYP4基因克隆及其表达水平分析[J]. 周驰,李纯厚,张为民,贾晓平. 热带海洋学报. 2010(04)
博士论文
[1]苯并（α）芘对栉孔扇贝血细胞免疫毒性机制的研究[D]. 刘静.中国海洋大学 2009
[2]黄河及河口烃类有机物的分布特征及源解析[D]. 张娇.中国海洋大学 2008
[3]玉米干旱胁迫相关基因的克隆与分析[D]. 岳桂东.山东大学 2008
[4]草鱼肠道组织消减cDNA文库的构建及免疫相关基因的克隆与表达分析[D]. 苏建明.湖南农业大学 2007
硕士论文
[1]沙田柚花柱自交不亲和相关基因的克隆与鉴定[D]. 阳晶.广西师范大学 2008
[2]近海环境中有机污染物对底栖鱼体内EROD活性的诱导作用研究[D]. 霍传林.大连理工大学 2003
本文编号：3076091
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