金鱼卵黄原蛋白多克隆抗血清制备及在内分泌扰乱化学物质检测中的应用

发布时间：2021-04-20 13:32

　　自1990年代以来,世界各国开始重视内分泌扰乱化学物质的研究,并建立了多种以鱼类（如Medaka、Fatheadminnow和Zebrafish等）为模式生物的活体（invivo）筛选技术,而我国目前还没有建立以本土鱼类为模式生物的活体筛选系统。因而,本文选择以在我国广泛分布的观赏性鱼类――金鱼作为模式生物,在制备兔抗金鱼卵黄原蛋白多克隆抗血清的基础上,开发了定性检测金鱼卵黄原蛋白的western-blot技术;并首次建立了以雄性金鱼卵黄原蛋白诱导产生为主要指标,以γ-谷胺酰转移酶和乳酸脱氢酶为辅助指标的环境雌激素筛选的指标体系,并成功地应用在多种农药的环境雌激素活性的检测中。采用凝胶过滤和离子交换两种层析技术,从E₂诱导的雄性金鱼血浆中分离、纯化了金鱼卵黄原蛋白,采用糖、磷、脂蛋白染色技术证明分离、纯化的蛋白为卵黄原蛋白,该卵黄原蛋白在非变性条件下分子量约为440kDa,在SDS变性条件下分子量约为84和60kDa。并利用分离、纯化的金鱼卵黄原蛋白,制备了兔抗金鱼卵黄原蛋白多克隆抗血清,开发了检测金鱼卵黄原蛋白的western-blot技术,1:2000倍稀释的... 

【文章来源】：中国海洋大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：122 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
0 前言
1 鱼类卵黄原蛋白分离纯化、检测技术及环境雌激素作用途径研究进展
    1.1 鱼类卵黄原蛋白分离纯化、检测技术
    1.2 环境雌激素类化合物作用途径研究
    1.3 研究展望
2 金鱼卵黄原蛋白的分离纯化及性质鉴定
    2.1 材料与方法
    2.2 结果与分析
    2.3 讨论
3 金鱼卵黄原蛋白多克隆抗血清的制备及鉴定
    3.1 材料与方法
    3.2 结果与分析
    3.3 讨论
4 E2诱导雄性金鱼卵黄原蛋白的分泌
    4.1 材料与方法
    4.2 结果与分析
    4.3 讨论
5 久效磷诱导雄性金鱼分泌卵黄原蛋白的研究
    5.1 材料与方法
    5.2 结果与分析
    5.3 讨论
6 多种农药的环境雌激素活性的筛选
    6.1 材料与方法
    6.2 结果与分析
    6.3 讨论
7 鲫鱼和鲤鱼卵黄原蛋白的分离纯化及与兔抗金鱼卵黄原蛋白多克隆抗血清的交叉反应
    7.1 材料与方法
    7.2 结果与分析
    7.3 讨论
结论
参考文献
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]烟台市市售蔬菜有机磷农药残留检测分析[J]. 陈伟,郝玉锋.  食品与药品. 2005(06)
[2]蔬菜中拟除虫菊酯类农药残留情况调查[J]. 王冬群,沈群超.  浙江农业科学. 2004(06)
[3]有机磷农药环境雌激素样的作用[J]. 卢锋,乔玲.  解放军预防医学杂志. 2004(05)
[4]用MCF-7细胞检测有机磷农药拟雌激素样活性[J]. 郑光,周志俊,戴旭峰,孙运光,顾锡安.  中国工业医学杂志. 2004(05)
[5]17β-雌二醇对雄性金鱼卵黄原蛋白的诱导作用[J]. 邴欣,汝少国,Isoda Hiroko,姜明,王蔚,王诗红.  水产学报. 2004(03)
[6]久效磷对雄性金鱼的生殖毒性研究[J]. 邴欣,汝少国,姜明,王晓宇.  中国海洋大学学报(自然科学版). 2004(01)
[7]鲫鱼（Carassius auratus）卵黄蛋白原的ELISA检测[J]. 李康,周忠良,于静,王明山,余晓君.  中国环境科学. 2003(03)
[8]氰戊菊酯对雄性大鼠生殖内分泌系统的影响[J]. 胡静熠,王守林,赵人,杨俊,陈景衡,宋玲,王心如.  中华男科学. 2002(01)
[9]有机磷与拟除虫菊酯农药的拟雌激素活性研究[J]. 陈海燕,王心如,肖继皋,胡刚,宋玲,王守林,何凤生.  中华劳动卫生职业病杂志. 2001(04)
[10]固相萃取法测定水源水中的有机磷农药[J]. 康跃惠,张干,盛国英,傅家谟.  中国环境科学. 2000(01)

硕士论文
[1]久效磷对雄性金鱼环境雌激素效应研究[D]. 邴欣.中国海洋大学 2003



本文编号：3149776