卵黄蛋白原的纯化与检测及其在己烯雌酚和炔雌醇联合毒性研究中的应用
发布时间：2021-04-29 17:26
卵黄蛋白原（Vitellogenin,Vtg）是卵生动物中卵黄蛋白的前体,通常只存在于性成熟的雌性个体中。但是如果雄性或幼体暴露于环境雌激素环境,其体内也能产生Vtg。因此,Vtg被认为是一种理想的环境雌激素蛋白质生物标志物,在研究各种化合物的雌激素效应中被广泛应用。Vtg的纯化多采用离子交换与凝胶渗透两步骤法,耗时长,回收率低、Vtg容易降解。因此,有必要开发一种简单、快速、回收率高的Vtg纯化方法。目前Vtg的检测主要采用特异性的免疫分析方法,方法灵敏,选择性强;但耗时长,操作繁琐。建立快速、简便、可靠的Vtg检测方法成为深入开展Vtg作为环境雌激素标志物研究的关键前提。在环境雌激素毒性研究方面,大多数研究仅针对单一环境雌激素的毒性效应展开,而对多种雌激素的复合污染和联合效应的研究较少。随着我国沿海地区经济的不断发展,大量污染物被排入大海,沿海及河口地区的污染日益加剧,开展持久性强、毒性大的环境雌激素对近海海洋生物联合效应的研究,因而具有重要意义。本研究将离子交换色谱和超滤离心技术相结合,建立了两级纯化Vtg的新方法;将内源荧光法与紫外分光法相结合,建立了灵敏度高、线性范围广、操作...
【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表(Abbreviations)
第一章 前言
1.1 环境雌激素概述
1.1.1 环境雌激素的种类和来源
1.1.1.1 天然雌激素
1.1.1.2 人工合成雌激素
1.1.1.3 环境化学污染物
1.1.1.4 重金属类
1.1.2 环境雌激素的危害
1.1.2.1 环境雌激素对脊椎动物的危害
1.1.2.2 环境雌激素对无脊椎动物的危害
1.1.3 环境雌激素的筛选方法
1.1.3.1 在体生物测试
1.1.3.2 离体生物测试
1.2 卵黄蛋白原研究概述
1.2.1 卵黄蛋白原的生物特性
1.2.2 卵黄蛋白原的分离纯化
1.2.2.1 超级离心法
1.2.2.2 超滤法
1.2.2.3 沉淀法
1.2.2.4 液相色谱法
1.2.3 卵黄蛋白原的分析方法
1.2.3.1 特异性分析方法
1.2.3.2 非特异性分析方法
1.3 环境雌激素的联合毒性作用研究概述
1.3.1 环境雌激素联合效应的试验方法
1.3.2 联合作用的评价方法
1.3.2.1 联合作用的预测结果与实验结果比较法
1.3.2.2 混合物的联合效应与单个最有效成分效应比较法
1.3.2.3 等效线法
1.3.2.4 比值法
1.3.3 雌激素的联合效应
1.3.3.1 环境雌激素物质之间的联合效应
1.3.3.2 外源性雌激素与内源性雌激素的联合效应
1.3.3.3 环境雌激素与非雌激素物质的联合效应
1.4 本课题的提出及研究内容
1.4.1 立题背景
1.4.2 研究目的
1.4.3 研究内容与技术路线
第一章参考文献
第二章 卵黄蛋白原的两级纯化与初步鉴定
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 仪器和试剂
2.2.2 实验动物
2.2.3 卵黄蛋白原的诱导
2.2.4 卵黄蛋白原的分离纯化
2.2.4.1 卵黄蛋白原的初步纯化—弱阴离子交换色谱法
2.2.4.2 卵黄蛋白原粗组分的再纯化—超滤纯化浓缩
2.2.5 二级纯化效果的验证
2.2.5.1 高分辨强阴离子交换高效液相色谱分析
2.2.5.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析
2.3 结果与讨论
2.3.1 血清蛋白的分离纯化
2.3.1.1 血清蛋白的初级纯化—弱阴离子交换色谱分离
2.3.1.2 血清蛋白的第二级纯化浓缩—超滤法
2.3.2 血清蛋白的电泳分析
2.3.2.1 Native-PAGE电泳分析
2.3.2.2 SDS-PAGE电泳分析
2.4 本章小结
第二章参考文献
第三章 内源荧光法与紫外分光法串联测定鱼血清中的Vtg
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 仪器和试剂
3.2.2 实验动物
3.2.3 卵黄蛋白原的诱导
3.2.4 卵黄蛋白原实验室标样的获得
3.2.5 卵黄蛋白原紫外光谱的测定
3.2.6 卵黄蛋白原荧光光谱的测定
3.2.7 强阴离子交换高效液相色谱分析参数
3.3 结果与讨论
3.3.1 卵黄蛋白原的紫外光谱
3.3.2 卵黄蛋白原的荧光光谱
3.3.3 卵黄蛋白原的色谱分离
3.3.4 方法的线性范围、检出限和重现性
3.3.5 方法的应用
3.4 本章小结
第三章参考文献
第四章 Vtg作为生物标志物在DES和EE_2对美国红鱼联合毒性研究中的应用
4.1 引言
4.2 实验部分
4.2.1 仪器和试剂
4.2.2 实验动物
4.2.3 染毒实验
4.2.3.1 浓度梯度组
4.2.3.2 时间序列组
4.2.4 样品预处理
4.2.5 血清中卵黄蛋白原的测定
4.2.6 强阴离子交换高校液相色谱分析参数
4.2.7 血清蛋白总量的测定
4.2.8 生理学指标的计算
4.2.9 数据处理
4.2.10 剂量—效应关系的拟合
4.2.11 联合效应的预测方法
4.3 结果与讨论
4.3.1 DES和EE_2对美国红鱼死亡率的影响
4.3.2 DES和EE_2对美国红鱼肥满度的影响
4.3.3 DES和EE_2对肝胰脏指数的影响
4.3.4 DES和EE_2对肾脏指数的影响
4.3.5 DES和EE_2对血清总蛋白的影响
4.3.6 DES和EE_2对Vtg含量的影响
4.3.7 Vtg与各主要指标的关系
4.3.8 DES和EE_2的联合效应
4.3.8.1 浓度—效应关系
4.3.8.2 联合效应
4.4 本章小结
第四章参考文献
第五章 结语和展望
5.1 本研究的贡献
5.2 本研究的不足之处
5.3 研究展望
攻读博士学位期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]奥尼罗非鱼壬基酚慢性中毒的病理学研究[J]. 马茹飞,黄长江. 南方水产. 2007(06)
[2]镉所致肾毒性及氧化性损害机制的研究[J]. 杨光,王少鹏,李振雪,仲来福. 毒理学杂志. 2007(05)
[3]气相色谱-质谱法测定动物组织中三种1,2-二苯乙烯类药物的残留量[J]. 吴银良,刘素英,侯东军,沈建忠,王海,单吉浩. 色谱. 2006(05)
[4]三参数增长模型拟合：以季风常绿阔叶林中两个优势乔木种群为例[J]. 殷祚云,任海,曾令海,郭勤峰. 生物数学学报. 2006(03)
[5]己烯雌酚残留的三种检测方法比较研究[J]. 陈眷华,王文博,徐在品,毛以智,卢占军. 食品科学. 2006(09)
[6]鸡肉中己烯雌酚的调查[J]. 高舒榭,陈庆勋,李凯. 中国动物检疫. 2006(07)
[7]Combined effect of tributyltin and benzo[a] pyrene on the levels of sex hormone and vitellogenin in female Sebastiscus marmoratu[J]. ZHENG Rong-hui1, WANG Chong-gang1,2,*, ZUO Zheng-hong1,2, CHEN Yi-xin1, ZHAO Yan g1 (1. School of Life Sciences, Xiamen University, Xiamen 361005, China. 2. State Key Laboratory of Marine Environmental Science, Xiamen University, Xiamen 361005, China). Journal of Environmental Sciences. 2006(02)
[8]牛奶中雌性激素的高效液相色谱分析[J]. 周建科,岳强,宿书芳,李路华,韩康. 中国乳品工业. 2005(11)
[9]真鲷卵黄蛋白原的诱导、纯化及初步鉴定[J]. 吴翠琴,袁东星,林庆梅. 厦门大学学报(自然科学版). 2005(05)
[10]EE2对稀有鮈鲫和斑马鱼幼鱼体内卵黄蛋白原诱导的比较[J]. 廖涛,徐盈,钟雪萍,梁勇,王剑伟. 水生生物学报. 2005(05)
博士论文
[1]真鲷血浆中卵黄蛋白原的柱后荧光衍生检测及其在环境雌激素生物标志物中的应用[D]. 吴翠琴.厦门大学 2006
本文编号：3167871
【文章来源】：厦门大学福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：128 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表(Abbreviations)
第一章 前言
1.1 环境雌激素概述
1.1.1 环境雌激素的种类和来源
1.1.1.1 天然雌激素
1.1.1.2 人工合成雌激素
1.1.1.3 环境化学污染物
1.1.1.4 重金属类
1.1.2 环境雌激素的危害
1.1.2.1 环境雌激素对脊椎动物的危害
1.1.2.2 环境雌激素对无脊椎动物的危害
1.1.3 环境雌激素的筛选方法
1.1.3.1 在体生物测试
1.1.3.2 离体生物测试
1.2 卵黄蛋白原研究概述
1.2.1 卵黄蛋白原的生物特性
1.2.2 卵黄蛋白原的分离纯化
1.2.2.1 超级离心法
1.2.2.2 超滤法
1.2.2.3 沉淀法
1.2.2.4 液相色谱法
1.2.3 卵黄蛋白原的分析方法
1.2.3.1 特异性分析方法
1.2.3.2 非特异性分析方法
1.3 环境雌激素的联合毒性作用研究概述
1.3.1 环境雌激素联合效应的试验方法
1.3.2 联合作用的评价方法
1.3.2.1 联合作用的预测结果与实验结果比较法
1.3.2.2 混合物的联合效应与单个最有效成分效应比较法
1.3.2.3 等效线法
1.3.2.4 比值法
1.3.3 雌激素的联合效应
1.3.3.1 环境雌激素物质之间的联合效应
1.3.3.2 外源性雌激素与内源性雌激素的联合效应
1.3.3.3 环境雌激素与非雌激素物质的联合效应
1.4 本课题的提出及研究内容
1.4.1 立题背景
1.4.2 研究目的
1.4.3 研究内容与技术路线
第一章参考文献
第二章 卵黄蛋白原的两级纯化与初步鉴定
2.1 引言
2.2 实验部分
2.2.1 仪器和试剂
2.2.2 实验动物
2.2.3 卵黄蛋白原的诱导
2.2.4 卵黄蛋白原的分离纯化
2.2.4.1 卵黄蛋白原的初步纯化—弱阴离子交换色谱法
2.2.4.2 卵黄蛋白原粗组分的再纯化—超滤纯化浓缩
2.2.5 二级纯化效果的验证
2.2.5.1 高分辨强阴离子交换高效液相色谱分析
2.2.5.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析
2.3 结果与讨论
2.3.1 血清蛋白的分离纯化
2.3.1.1 血清蛋白的初级纯化—弱阴离子交换色谱分离
2.3.1.2 血清蛋白的第二级纯化浓缩—超滤法
2.3.2 血清蛋白的电泳分析
2.3.2.1 Native-PAGE电泳分析
2.3.2.2 SDS-PAGE电泳分析
2.4 本章小结
第二章参考文献
第三章 内源荧光法与紫外分光法串联测定鱼血清中的Vtg
3.1 引言
3.2 实验部分
3.2.1 仪器和试剂
3.2.2 实验动物
3.2.3 卵黄蛋白原的诱导
3.2.4 卵黄蛋白原实验室标样的获得
3.2.5 卵黄蛋白原紫外光谱的测定
3.2.6 卵黄蛋白原荧光光谱的测定
3.2.7 强阴离子交换高效液相色谱分析参数
3.3 结果与讨论
3.3.1 卵黄蛋白原的紫外光谱
3.3.2 卵黄蛋白原的荧光光谱
3.3.3 卵黄蛋白原的色谱分离
3.3.4 方法的线性范围、检出限和重现性
3.3.5 方法的应用
3.4 本章小结
第三章参考文献
第四章 Vtg作为生物标志物在DES和EE_2对美国红鱼联合毒性研究中的应用
4.1 引言
4.2 实验部分
4.2.1 仪器和试剂
4.2.2 实验动物
4.2.3 染毒实验
4.2.3.1 浓度梯度组
4.2.3.2 时间序列组
4.2.4 样品预处理
4.2.5 血清中卵黄蛋白原的测定
4.2.6 强阴离子交换高校液相色谱分析参数
4.2.7 血清蛋白总量的测定
4.2.8 生理学指标的计算
4.2.9 数据处理
4.2.10 剂量—效应关系的拟合
4.2.11 联合效应的预测方法
4.3 结果与讨论
4.3.1 DES和EE_2对美国红鱼死亡率的影响
4.3.2 DES和EE_2对美国红鱼肥满度的影响
4.3.3 DES和EE_2对肝胰脏指数的影响
4.3.4 DES和EE_2对肾脏指数的影响
4.3.5 DES和EE_2对血清总蛋白的影响
4.3.6 DES和EE_2对Vtg含量的影响
4.3.7 Vtg与各主要指标的关系
4.3.8 DES和EE_2的联合效应
4.3.8.1 浓度—效应关系
4.3.8.2 联合效应
4.4 本章小结
第四章参考文献
第五章 结语和展望
5.1 本研究的贡献
5.2 本研究的不足之处
5.3 研究展望
攻读博士学位期间发表的论文
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]奥尼罗非鱼壬基酚慢性中毒的病理学研究[J]. 马茹飞,黄长江. 南方水产. 2007(06)
[2]镉所致肾毒性及氧化性损害机制的研究[J]. 杨光,王少鹏,李振雪,仲来福. 毒理学杂志. 2007(05)
[3]气相色谱-质谱法测定动物组织中三种1,2-二苯乙烯类药物的残留量[J]. 吴银良,刘素英,侯东军,沈建忠,王海,单吉浩. 色谱. 2006(05)
[4]三参数增长模型拟合：以季风常绿阔叶林中两个优势乔木种群为例[J]. 殷祚云,任海,曾令海,郭勤峰. 生物数学学报. 2006(03)
[5]己烯雌酚残留的三种检测方法比较研究[J]. 陈眷华,王文博,徐在品,毛以智,卢占军. 食品科学. 2006(09)
[6]鸡肉中己烯雌酚的调查[J]. 高舒榭,陈庆勋,李凯. 中国动物检疫. 2006(07)
[7]Combined effect of tributyltin and benzo[a] pyrene on the levels of sex hormone and vitellogenin in female Sebastiscus marmoratu[J]. ZHENG Rong-hui1, WANG Chong-gang1,2,*, ZUO Zheng-hong1,2, CHEN Yi-xin1, ZHAO Yan g1 (1. School of Life Sciences, Xiamen University, Xiamen 361005, China. 2. State Key Laboratory of Marine Environmental Science, Xiamen University, Xiamen 361005, China). Journal of Environmental Sciences. 2006(02)
[8]牛奶中雌性激素的高效液相色谱分析[J]. 周建科,岳强,宿书芳,李路华,韩康. 中国乳品工业. 2005(11)
[9]真鲷卵黄蛋白原的诱导、纯化及初步鉴定[J]. 吴翠琴,袁东星,林庆梅. 厦门大学学报(自然科学版). 2005(05)
[10]EE2对稀有鮈鲫和斑马鱼幼鱼体内卵黄蛋白原诱导的比较[J]. 廖涛,徐盈,钟雪萍,梁勇,王剑伟. 水生生物学报. 2005(05)
博士论文
[1]真鲷血浆中卵黄蛋白原的柱后荧光衍生检测及其在环境雌激素生物标志物中的应用[D]. 吴翠琴.厦门大学 2006
本文编号：3167871
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