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环境中雌二醇等微量荷尔蒙物质的免疫分析、化学发光分析研究

发布时间:2021-07-22 03:59
  环境荷尔蒙的污染问题已成为全球环境问题之一,已引起世界各国极大地关注。近年来环境荷尔蒙的分析监测方法研究主要有气相色谱-质谱(GC-MS)、液相色谱-质谱(LC-MS)、免疫分析。尽管色谱分析提供了高灵敏的检测手段,然而色谱分析方法,不但仪器昂贵,而且须进行繁杂的前处理,如加标、萃取、净化、浓缩等,一般分析一组试样要花费较长的时间,且分析的费用也较大,不便于推广应用。由于免疫分析的高特异性和操作简便、方便、经济,近年来在环境荷尔蒙分析检测中的研究成为了研究的热点。同时流动注射化学发光分析方法具有灵敏、准确、重现性好和便于自动化等优点,已在药物、环境分析中得到高度重视。本文从半抗原的改造、修饰到完全抗原的制备,免疫动物产生抗体,建立免疫分析方法为主展开工作,对雌二醇、雌三醇、己烯雌酚、双酚A等环境荷尔蒙进行了分析方法研究,以便为环境荷尔蒙的研究提供更加灵敏、简便、快速的检测手段。主要内容如下:1.对雌二醇进行了修饰,引入了连接臂,并与牛血清蛋白结合,合成了完全抗原,测定了抗原中雌二醇与蛋白质的结合比为25:1。利用制备的完全抗原免疫大耳白家兔,制备了抗雌二醇多克隆抗体,ELISA测得抗血... 

【文章来源】:东华大学上海市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】:191 页

【学位级别】:博士

【文章目录】:
中文摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 环境荷尔蒙概述
        1.1.1 环境荷尔蒙概念的产生
        1.1.2 环境荷尔蒙问题大事年表
        1.1.3 环境荷尔蒙的危害
        1.1.4 环境荷尔蒙的作用机制
        1.1.5 环境荷尔蒙的种类
        1.1.6 我国对环境荷尔蒙问题研究的重视
    1.2 目前环境荷尔蒙分析研究的现状及分析检测的发展方向
        1.2.1 环境荷尔蒙的分析检测现状
        1.2.2 环境荷尔蒙监测分析的发展方向
    1.3 免疫分析基础
        1.3.1 免疫分析概述
            1.3.1.1 抗体抗原反应特性
            1.3.1.2 抗体作为分析试剂
            1.3.1.3 常用的标记免疫分析原理
        1.3.2 免疫分析检测方法
        1.3.3 展望
    1.4 本课题的主要研究内容
    1.5 参考文献
第二章 雌二醇完全抗原的合成、抗体的制备
    2.1 引言
    2.2 实验部分
        2.2.1 仪器与试剂
        2.2.2 雌二醇半抗原的修饰及完全抗原的制备
        2.2.3 雌二醇半抗原衍生物的鉴定
        2.2.4 雌二醇半抗原与蛋白质偶联结合物的鉴定
        2.2.5 免疫动物实验
        2.2.6 抗血清效价的测定
        2.2.7 抗血清的特异性测定
        2.2.8 抗血清的纯化
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 雌二醇-3-羧甲基醚的制备
        2.3.2 雌二醇-3-羧甲基醚的鉴定
        2.3.3 雌二醇-3-羧甲基醚-BSA的制备
        2.3.4 雌二醇-3-羧甲基醚-BSA结合物的结合比测定
        2.3.5 免疫动物及抗血清效价的测定
        2.3.6 抗血清的特异性
        2.3.7 抗体的纯化与保存
    2.4 小结
    2.5 参考文献
第三章 利用生物素-亲合素放大系统电化学酶联免疫分析测定水中雌二醇
    3.1 引言
    3.2 实验部分
        3.2.1 仪器与试剂
        3.2.2 缓冲溶液
        3.2.3 抗体的制备
        3.2.4 包被原的制备
        3.2.5 生物素化抗体的制备
        3.2.6 邻苯二胺(OPD)-H_2O_2-HRP伏安分析方法
        3.2.7 ECIA测量步骤
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 邻苯二胺的电化学特性
        3.3.2 酶催化反应条件及伏安测量条件
        3.3.3 免疫反应条件
        3.3.4 免疫测量模式及工作曲线
        3.3.5 样品分析
    3.4 小结
    3.5 参考文献
第四章 利用免疫反应柱流动注射化学发光免疫分析法测定雌二醇
    4.1 引言
    4.2 实验部分
        4.2.1 试剂
        4.2.2 缓冲溶液
        4.2.3 抗体的制备
        4.2.4 辣根过氧化物酶标记抗体
        4.2.5 免疫柱的制备
        4.2.6 仪器与操作步骤
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 免疫反应模式
        4.3.2 流动注射化学发光测量条件
        4.3.3 免疫反应条件
        4.3.4 免疫柱的稳定性
        4.3.5 测定雌二醇的工作曲线
        4.3.6 应用
    4.4 小结
    4.5 参考文献
第五章 雌三醇人工抗原的合成、抗体的制备
    5.1 引言
    5.2 实验部分
        5.2.1 仪器与试剂
        5.2.2 雌三醇半抗原的修饰及完全抗原的制备
        5.2.3 雌三醇半抗原衍生物的鉴定
        5.2.4 雌三醇半抗原与蛋白质偶联结合物的鉴定
        5.2.5 免疫动物实验
        5.2.6 抗血清效价的测定
        5.2.7 抗血清的特异性测定
        5.2.8 抗血清的纯化
    5.3 结果与讨论
        5.3.1 雌三醇-3-羧甲基醚的制备
        5.3.2 雌三醇-3-羧甲基醚的鉴定
        5.3.3 雌三醇-3-羧甲基醚-BSA的制备
        5.3.4 雌三醇-3-羧甲基醚-BSA结合物的结合比测定
        5.3.5 免疫动物及抗血清效价的测定
        5.3.6 抗血清的特异性
        5.3.7 抗体的纯化与保存
    5.4 小结
    5.5 参考文献
第六章 甲基红-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析法测定雌三醇
    6.1 引言
    6.2 实验部分
        6.2.1 仪器与试剂
        6.2.2 抗体的制备
        6.2.3 甲基红(MR)-H_2O_2-HRP伏安分析体系的建立
        6.2.4 雌三醇的电化学免疫分析测定
    6.3 结果与讨论
        6.3.1 甲基红的电化学特性
        6.3.2 辣根过氧化物酶催化反应条件
        6.3.3 HRP的测定
        6.3.4 伏安酶联免疫分析测定雌三醇的条件
        6.3.5 测定雌三醇的工作曲线
        6.3.6 回收率实验
        6.3.7 样品测定
    6.4 小结
    6.5 参考文献
第七章 流动注射化学发光免疫分析法测定雌三醇
    7.1 引言
    7.2 实验部分
        7.2.1 试剂
        7.2.2 缓冲溶液
        7.2.3 抗体的制备
        7.2.4 包被原的制备
        7.2.5 辣根过氧化物酶标抗体的制备
        7.2.6 免疫柱的制备
        7.2.7 仪器与操作步骤
    7.3 结果与讨论
        7.3.1 免疫反应模式
        7.3.2 流动注射化学发光测量条件的选择
        7.3.3 免疫反应条件的选择
        7.3.4 免疫反应柱的稳定性
        7.3.5 工作曲线与检出限
        7.3.6 方法应用
    7.4 小结
    7.5 参考文献
第八章 己烯雌酚人工抗原的合成、抗体的制备
    8.1 引言
    8.2 实验部分
        8.2.1 主要仪器
        8.2.2 主要试剂
        8.2.3 己烯雌酚单羧甲基醚的合成
        8.2.4 己烯雌酚单羧甲基醚与载体蛋白的偶联
        8.2.5 己烯雌酚抗体的制备
            8.2.5.1 多克隆抗体的制备
            8.2.5.2 兔血清抗体效价测定
            8.2.5.3 兔血清抗体的特异性
    8.3 结果与讨论
        8.3.1 己烯雌酚单羧甲基醚半抗原的合成及鉴定
        8.3.2 己烯雌酚单羧甲基醚与载体蛋白结合及鉴定
            8.3.2.1 己烯雌酚单羧甲基醚与载体蛋白结合反应
            8.3.2.2 偶联验证
            8.3.2.3 结合比测定
        8.3.3 抗血清效价的鉴定
        8.3.4 抗体的特异性
        8.3.5 抗体的纯化与保存
    8.4 小结
    8.5 参考文献
第九章 电化学免疫分析方法测定己烯雌酚
    9.1 引言
    9.2 实验部分
        9.2.1 主要仪器
        9.2.2 主要试剂
        9.2.3 缓冲溶液
        9.2.4 抗体的制备
        9.2.5 包被原的制备
        9.2.6 测定方法
    9.3 结果与讨论
        9.3.1 免疫反应模式
        9.3.2 底物的选择及测量条件
        9.3.3 免疫反应条件
        9.3.4 工作曲线
        9.3.5 样品分析
    9.4 小结
    9.5 参考文献
第十章 流动注射阻抑化学发光法测定己烯雌酚
    10.1 引言
    10.2 实验部分
        10.2.1 仪器与试剂
        10.2.2 实验方法
    10.3 结果与讨论
        10.3.1 化学发光反应动力学曲线
        10.3.2 反应介质的选择
        10.3.3 鲁米诺溶液用量的影响
        10.3.4 N-溴代丁二酰亚胺用量的影响
        10.3.5 工作曲线与检出限
        10.3.6 共存物质的影响
        10.3.7 样品分析
    10.4 小结
    10.5 参考文献
第十一章 双酚A的流动注射化学发光法测定
    11.1 引言
    11.2 实验部分
        11.2.1 仪器与试剂
        11.2.2 实验方法
    11.3 结果与讨论
        11.3.1 化学发光信号曲线
        11.3.2 反应介质的选择
        11.3.3 鲁米诺溶液浓度的影响
        11.3.4 K_3Fe(CN)_6溶液浓度的影响
        11.3.5 工作曲线与检出限
        11.3.6 干扰实验
        11.3.7 样品分析
        11.3.8 化学发光反应机理初探
    11.4 小结
    11.5 参考文献
第十二章 双酚A完全抗原、抗体的制备及ECIA方法的建立
    12.1 引言
    12.2 实验部分
        12.2.1 主要仪器
        12.2.2 主要试剂
        12.2.3 完全抗原的制备及鉴定
        12.2.4 双酚A抗体的制备
            12.2.4.1 多克隆抗体的制备
            12.2.4.2 抗血清效价的测定
        12.2.5 BPA的免疫分析
    12.3 结果与讨论
        12.3.1 4,4-二苯基羟基戊酸与载体蛋白结合反应
        12.3.2 偶联验证
        12.3.3 结合比测定
        12.3.3 抗血清的效价鉴定
        12.3.4 抗血清的特异性
        12.3.5抗血清的免疫分析法应用
            12.3.5.1 免疫反应条件
            12.3.5.2 工作曲线
            12.3.5.3 血清及桶装纯净水中BPA的测定
    12.4 小结
    12.5 参考文献
第十三章 增强化学发光酶免疫分析法测定双酚A
    13.1 引言
    13.2 实验部分
        13.2.1 仪器与试剂
        13.2.2 实验方法
            13.2.2.1 包被原的制备
            13.2.2.2 抗双酚A抗体的制备
            13.2.2.3 化学发光测定方法的建立
            13.2.2.4 双酚A的测定
    13.3 结果与讨论
        13.3.1 化学发光反应条件的选择
        13.3.2 抗BPA抗血清浓度的选择
        13.3.3 IgG-HRP稀释比的选择
        13.3.4 BPA测定的工作曲线及检出限
        13.3.5 水样中BPA的测定
    13.4 小结
    13.5 参考文献
总结
攻读博士学位期间已发表或待发表的学术论文
致谢


【参考文献】:
期刊论文
[1]生物素-亲和素放大酶联免疫吸附法测定双酚A[J]. 魏孔吉,赵美萍,李元宗,常文保.  分析化学. 2005(08)
[2]高效液相色谱法测定饮料类食品中的类雌激素[J]. 韩灏,邵兵,马亚鲁,吴国华,薛颖.  色谱. 2005(02)
[3]柱前荧光衍生-高效液相色谱法测定尿和血清中的环境雌激素[J]. 毛丽莎,孙成均,李永新,吴德生,赵剑虹.  分析化学. 2005(01)
[4]水中雌激素的毛细管气相色谱分析[J]. 李敬霞,周建科,李路华,岳强.  化学研究. 2005(01)
[5]测定双酚A的流动注射化学发光法研究[J]. 庄惠生,李金花,王琼娥.  中国环境监测. 2004(04)
[6]Different Biotinylation Strategies for Competitive Immunoassay of Estradiol[J]. 赵金富,王永成,李元宗,常文保.  Chinese Journal of Chemistry. 2004(07)
[7]酶联免疫分析结合生物素-亲合素放大体系测定血清中的雌三醇[J]. 赵金富,王永成,米健秋,常文保.  高等学校化学学报. 2004(06)
[8]胶束电动色谱法分离与测定己烯雌酚片剂中的有效成分[J]. 贾丽,邵海丽,高文华.  分析试验室. 2004(02)
[9]己烯雌酚单克隆抗体细胞株的筛选及间接ELISA法的建立[J]. 单国强,刘雅红,康彦龙.  中国兽医科技. 2003(11)
[10]动物组织中己烯雌酚残留的基体固相扩散-气相色谱-质谱分析方法研究[J]. 丁雅韵,徐晓云,谢孟峡,杨清峰,刘素英.  分析化学. 2003(11)



本文编号:3296389

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