同时检测多种环境激素污染物的液相免疫芯片技术研究
发布时间：2021-08-26 08:45
近些年来,研究发现一些存在于环境中的化学物质具有类似内分泌激素的作用,可以导致生物体内分泌系统紊乱,因此将这类物质统称为环境激素（Environmental Endocrine, EE）。EE在环境中分布广泛且多为脂溶性的有机小分子,化学性质特别稳定,在体内和体外都不易分解,通过食物链进入生物体内后,可蓄积于脂肪组织内,从而对人和其他生物体的生殖与发育系统、免疫系统及神经系统等造成伤害。目前,EE已威胁到人和动物的生殖健康甚至物种的繁衍。为了保护生态环境,预防环境激素污染物（Environmental Endocrine Pollutants, EEP）通过食物链进入人体,发展灵敏、快速及成本低的分析检测技术是非常必要的。目前,EEP主要使用GC-MS、HPLC及LC-MS来进行分析与确证,但是存在样品前处理过程复杂、操作繁琐、仪器昂贵、检测成本偏高等缺点,不能很好地满足日常分析及现场检测的需求。而免疫学方法由于具有灵敏度高、特异性强、操作方便和成本低等优点,已被应用于EEP的日常分析检测,特别适用于对大量样品进行分析筛选。然而目前多数免疫分析方法通常一次实验仅能分析一种EEP,而样品...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：146 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
部分英文缩略词
第一章 文献综述
1 环境激素污染物
1.1 引言
1.2 环境激素污染物的来源
1.3 环境激素污染物的种类
1.4 环境激素污染物的危害
1.4.1 对生殖和发育系统的影响
1.4.2 对神经系统的影响
1.4.3 对免疫系统的影响
1.4.4 对肿瘤发生的影响
1.5 环境激素污染物的分析方法
1.5.1 环境激素污染物的GC-MS分析
1.5.2 环境激素污染物的HPLC及LC-MS分析
1.5.3 环境激素污染物的免疫分析技术
2 液相悬浮芯片免疫分析的研究进展
2.1 液相悬浮芯片免疫分析的发展历史
2.2 液相悬浮芯片免疫分析原理
2.3 液相悬浮芯片免疫分析的优点及面临的问题
2.4 液相悬浮芯片技术的发展方向
2.4.1 样品中检测目标分子的数量将会有所突破
2.4.2 各检测评价指标仍有很大提升空间
2.4.3 微球性能的提升
2.4.4 微球的回收和再利用
2.4.5 检测仪器的小型化
2.5 液相悬浮芯片技术的应用
2.5.1 生物医学领域的应用
2.5.2 环境监测及食品检测领域的应用
2.6 结论
3 本研究的目的意义与内容
3.1 研究目的和意义
3.2 研究内容
第二章 完全抗原与抗体的制备
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 主要仪器
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要溶液的配制
1.2 方法
1.2.1 BPA完全抗原的制备
1.2.2 2,4-D完全抗原的制备
1.2.3 CHI完全抗原的制备
1.2.4 完全抗原的表征
1.2.5 抗BPA抗体的制备与鉴定
2 结果与分析
2.1 BPA完全抗原的制备与鉴定
2.1.1 BVA-BSA的制备与鉴定
2.1.2 cBSA的制备与鉴定
2.1.3 BPA-cBSA的制备与鉴定
2.2 2,4-D蛋白偶联物的制备与鉴定
2.3 CHI蛋白偶联物的制备与鉴定
2.4 抗体的鉴定
2.4.1 抗体产生进程
2.4.2 抗血清的灵敏度分析
2.4.3 抗血清的特异性分析
3 讨论
3.1 关于阳离子载体蛋白的作用
3.2 小分子蛋白偶联物的制备与鉴定
3.2.1 载体蛋白的选择
3.2.2 生物偶联方法的选择
3.3 抗体的特异性研究
第三章 ELISA研究
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 主要仪器与器材
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要溶液的配制
1.2 方法
1.2.1 常规间接竞争ELISA研究
1.2.2 半抗原直接偶联ELISA研究
2 结果和分析
2.1 常规ELISA研究
2.1.1 封闭液的选择
2.1.2 包被原与抗体浓度的确定
2.1.3 常规ELISA标准曲线的绘制
2.1.4 抗体交叉反应性的测定
2.1.5 常规ELISA添加回收率的测定
2.1.6 总结
2.2 半抗原直接偶联ELISA研究
2.2.1 封闭方式的选择
2.2.2 包被原与抗体浓度的确定
2.2.3 标准曲线的绘制
2.2.4 添加回收率的测定
2.3 两种ELISA的比较研究
3 小节与讨论
3.1 影响ELISA参数的因素
3.1.1 包被原与抗体浓度因素
3.1.2 物化因素
3.2 半抗原直接偶联ELISA
第四章 液相芯片检测方法的研究
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 主要仪器与器材
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要溶液的配制
1.2 方法
1.2.1 生物素化抗体的制备
1.2.2 包被原与羧基荧光微球的偶联
1.2.3 荧光微球光镜及扫描电镜观察
1.2.4 蛋白质偶联微球的确证
1.2.5 检测条件的优化
1.2.6 环境激素污染物Luminex标准曲线的绘制
1.2.7 检测的特异性实验
1.2.8 有机溶剂对微球的荧光漂白实验
1.2.9 悬浮芯片多通道检测
1.2.10 加标回收实验
2 结果与分析
2.1 荧光微球的形态观察
2.2 包被原与羧基荧光微球的偶联确证
2.3 液相芯片检测条件的优化
2.3.1 激活缓冲液的选择
2.3.2 液相芯片检测模式的选择
2.3.3 生物素化二抗加样方式的选择
2.3.4 生物素化二抗加入量的选择
2.3.5 SA-PE加入量的选择
2.3.6 SA-PE作用时间的选择
2.3.7 最佳抗体加入量的优化
2.3.8 最佳抗原抗体反应时间的选择
2.3.9 最佳抗原抗体反应容积的选择
2.3.10 抗原抗体反应缓冲液离子强度的选择
2.3.11 抗原抗体反应缓冲液类型的选择
2.3.12 孵育时间的选择
2.3.13 小结
2.4 环境激素污染物检测的悬浮芯片标准曲线
2.5 特异性实验
2.6 有机溶剂对微球的荧光漂白实验
2.7 多通道检测实验
2.8 加标回收实验
3 讨论
3.1 抗体及SA-PE的浓度
3.1.1 一抗浓度因素
3.1.2 生物素化二抗及SA-PE浓度因素
3.2 检测模式
3.3 理化因素对IC50值的影响
3.3.1 离子强度因素
3.3.2 抗原抗体反应缓冲液类型
3.3.3 时间因素
3.3.4 反应容积因素
第五章 方法比对研究
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 主要仪器与器材
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要溶液的配制
1.2 方法
1.2.1 HPLC检测标准曲线绘制
1.2.2 加标回收率的测定
2 结果和分析
2.1 环境激素污染物HPLC检测
2.2 加标回收率
2.3 环境激素污染物高通量悬浮芯片检测法与其它方法的比较
3 小结和讨论
第六章 结论与展望
1 主要结论
1.1 制备了BPA的抗体,建立了检测环境中BPA残留的ELISA
1.2 建立了检测环境中BPA残留的半抗原直接偶联ELISA
1.3 制备了2,4-D的包被原,建立了检测环境中2,4-D残留的ELISA
1.4 制备了CHI的包被原,建立了检测环境中CHI残留的ELISA
1.5 制备了BPA包被原与荧光微球的偶联物,建立了检测环境中BPA残留的Luminex方法
1.6 制备了2,4-D包被原与荧光微球的偶联物,建立了检测环境中2,4-D残留的Luminex方法
1.7 制备了CHI包被原与荧光微球的偶联物,建立了检测环境中CHI残留的Luminex方法
1.8 建立了同时检测环境中BPA、2,4-D及CHI残留的Luminex方法
1.9 方法比对研究
2 展望
2.1 在抗体制备方面
2.2 在ELISA研究方面
2.3 在Luminex免疫分析研究方面
3 创新点
参考文献
致谢
附 攻读博士学位期间发表的论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]气相色谱-质谱法分析食品包装材料中双酚A[J]. 卫碧文,缪俊文,于文佳. 分析试验室. 2009(01)
[2]双酚A人工抗原的光谱表征及免疫鉴定研究[J]. 郑劼,张焜,赵肃清. 光谱学与光谱分析. 2008(07)
[3]无处不在的环境激素[J]. 顾娟红. 中国检验检疫. 2008(06)
[4]2007年全国农药生产回顾及2008年展望[J]. 王律先. 中国农药. 2008(02)
[5]半抗原免疫分析研究进展[J]. 吴瑜,胡昌勤,金少鸿. 药物分析杂志. 2007(05)
[6]环境内分泌干扰物对机体的影响[J]. 范琰妍,张炜. 江苏医药. 2007(05)
[7]环境内分泌干扰物研究的进展[J]. 曹巧玲,张俊明,高志贤,杨林,左小霞. 中华预防医学杂志. 2007(03)
[8]环境内分泌干扰物的安全性评价研究进展[J]. 姜成哲,张乾坤,许正斗,哈鹏程. 中国比较医学杂志. 2006(07)
[9]毒死蜱多克隆抗体的制备[J]. 桂文君,金仁耀,黄雅丽,朱国念. 农药学学报. 2006(02)
[10]环境内分泌干扰物分析方法的研究与进展[J]. 赵利霞,林金明. 分析试验室. 2006(02)
博士论文
[1]金黄色葡萄球菌B型肠毒素的溶液构象及菌体生长环境效应[D]. 王小红.华中农业大学 2005
本文编号：3363930
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：146 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
部分英文缩略词
第一章 文献综述
1 环境激素污染物
1.1 引言
1.2 环境激素污染物的来源
1.3 环境激素污染物的种类
1.4 环境激素污染物的危害
1.4.1 对生殖和发育系统的影响
1.4.2 对神经系统的影响
1.4.3 对免疫系统的影响
1.4.4 对肿瘤发生的影响
1.5 环境激素污染物的分析方法
1.5.1 环境激素污染物的GC-MS分析
1.5.2 环境激素污染物的HPLC及LC-MS分析
1.5.3 环境激素污染物的免疫分析技术
2 液相悬浮芯片免疫分析的研究进展
2.1 液相悬浮芯片免疫分析的发展历史
2.2 液相悬浮芯片免疫分析原理
2.3 液相悬浮芯片免疫分析的优点及面临的问题
2.4 液相悬浮芯片技术的发展方向
2.4.1 样品中检测目标分子的数量将会有所突破
2.4.2 各检测评价指标仍有很大提升空间
2.4.3 微球性能的提升
2.4.4 微球的回收和再利用
2.4.5 检测仪器的小型化
2.5 液相悬浮芯片技术的应用
2.5.1 生物医学领域的应用
2.5.2 环境监测及食品检测领域的应用
2.6 结论
3 本研究的目的意义与内容
3.1 研究目的和意义
3.2 研究内容
第二章 完全抗原与抗体的制备
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 主要仪器
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要溶液的配制
1.2 方法
1.2.1 BPA完全抗原的制备
1.2.2 2,4-D完全抗原的制备
1.2.3 CHI完全抗原的制备
1.2.4 完全抗原的表征
1.2.5 抗BPA抗体的制备与鉴定
2 结果与分析
2.1 BPA完全抗原的制备与鉴定
2.1.1 BVA-BSA的制备与鉴定
2.1.2 cBSA的制备与鉴定
2.1.3 BPA-cBSA的制备与鉴定
2.2 2,4-D蛋白偶联物的制备与鉴定
2.3 CHI蛋白偶联物的制备与鉴定
2.4 抗体的鉴定
2.4.1 抗体产生进程
2.4.2 抗血清的灵敏度分析
2.4.3 抗血清的特异性分析
3 讨论
3.1 关于阳离子载体蛋白的作用
3.2 小分子蛋白偶联物的制备与鉴定
3.2.1 载体蛋白的选择
3.2.2 生物偶联方法的选择
3.3 抗体的特异性研究
第三章 ELISA研究
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 主要仪器与器材
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要溶液的配制
1.2 方法
1.2.1 常规间接竞争ELISA研究
1.2.2 半抗原直接偶联ELISA研究
2 结果和分析
2.1 常规ELISA研究
2.1.1 封闭液的选择
2.1.2 包被原与抗体浓度的确定
2.1.3 常规ELISA标准曲线的绘制
2.1.4 抗体交叉反应性的测定
2.1.5 常规ELISA添加回收率的测定
2.1.6 总结
2.2 半抗原直接偶联ELISA研究
2.2.1 封闭方式的选择
2.2.2 包被原与抗体浓度的确定
2.2.3 标准曲线的绘制
2.2.4 添加回收率的测定
2.3 两种ELISA的比较研究
3 小节与讨论
3.1 影响ELISA参数的因素
3.1.1 包被原与抗体浓度因素
3.1.2 物化因素
3.2 半抗原直接偶联ELISA
第四章 液相芯片检测方法的研究
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 主要仪器与器材
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要溶液的配制
1.2 方法
1.2.1 生物素化抗体的制备
1.2.2 包被原与羧基荧光微球的偶联
1.2.3 荧光微球光镜及扫描电镜观察
1.2.4 蛋白质偶联微球的确证
1.2.5 检测条件的优化
1.2.6 环境激素污染物Luminex标准曲线的绘制
1.2.7 检测的特异性实验
1.2.8 有机溶剂对微球的荧光漂白实验
1.2.9 悬浮芯片多通道检测
1.2.10 加标回收实验
2 结果与分析
2.1 荧光微球的形态观察
2.2 包被原与羧基荧光微球的偶联确证
2.3 液相芯片检测条件的优化
2.3.1 激活缓冲液的选择
2.3.2 液相芯片检测模式的选择
2.3.3 生物素化二抗加样方式的选择
2.3.4 生物素化二抗加入量的选择
2.3.5 SA-PE加入量的选择
2.3.6 SA-PE作用时间的选择
2.3.7 最佳抗体加入量的优化
2.3.8 最佳抗原抗体反应时间的选择
2.3.9 最佳抗原抗体反应容积的选择
2.3.10 抗原抗体反应缓冲液离子强度的选择
2.3.11 抗原抗体反应缓冲液类型的选择
2.3.12 孵育时间的选择
2.3.13 小结
2.4 环境激素污染物检测的悬浮芯片标准曲线
2.5 特异性实验
2.6 有机溶剂对微球的荧光漂白实验
2.7 多通道检测实验
2.8 加标回收实验
3 讨论
3.1 抗体及SA-PE的浓度
3.1.1 一抗浓度因素
3.1.2 生物素化二抗及SA-PE浓度因素
3.2 检测模式
3.3 理化因素对IC50值的影响
3.3.1 离子强度因素
3.3.2 抗原抗体反应缓冲液类型
3.3.3 时间因素
3.3.4 反应容积因素
第五章 方法比对研究
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 主要仪器与器材
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要溶液的配制
1.2 方法
1.2.1 HPLC检测标准曲线绘制
1.2.2 加标回收率的测定
2 结果和分析
2.1 环境激素污染物HPLC检测
2.2 加标回收率
2.3 环境激素污染物高通量悬浮芯片检测法与其它方法的比较
3 小结和讨论
第六章 结论与展望
1 主要结论
1.1 制备了BPA的抗体,建立了检测环境中BPA残留的ELISA
1.2 建立了检测环境中BPA残留的半抗原直接偶联ELISA
1.3 制备了2,4-D的包被原,建立了检测环境中2,4-D残留的ELISA
1.4 制备了CHI的包被原,建立了检测环境中CHI残留的ELISA
1.5 制备了BPA包被原与荧光微球的偶联物,建立了检测环境中BPA残留的Luminex方法
1.6 制备了2,4-D包被原与荧光微球的偶联物,建立了检测环境中2,4-D残留的Luminex方法
1.7 制备了CHI包被原与荧光微球的偶联物,建立了检测环境中CHI残留的Luminex方法
1.8 建立了同时检测环境中BPA、2,4-D及CHI残留的Luminex方法
1.9 方法比对研究
2 展望
2.1 在抗体制备方面
2.2 在ELISA研究方面
2.3 在Luminex免疫分析研究方面
3 创新点
参考文献
致谢
附 攻读博士学位期间发表的论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]气相色谱-质谱法分析食品包装材料中双酚A[J]. 卫碧文,缪俊文,于文佳. 分析试验室. 2009(01)
[2]双酚A人工抗原的光谱表征及免疫鉴定研究[J]. 郑劼,张焜,赵肃清. 光谱学与光谱分析. 2008(07)
[3]无处不在的环境激素[J]. 顾娟红. 中国检验检疫. 2008(06)
[4]2007年全国农药生产回顾及2008年展望[J]. 王律先. 中国农药. 2008(02)
[5]半抗原免疫分析研究进展[J]. 吴瑜,胡昌勤,金少鸿. 药物分析杂志. 2007(05)
[6]环境内分泌干扰物对机体的影响[J]. 范琰妍,张炜. 江苏医药. 2007(05)
[7]环境内分泌干扰物研究的进展[J]. 曹巧玲,张俊明,高志贤,杨林,左小霞. 中华预防医学杂志. 2007(03)
[8]环境内分泌干扰物的安全性评价研究进展[J]. 姜成哲,张乾坤,许正斗,哈鹏程. 中国比较医学杂志. 2006(07)
[9]毒死蜱多克隆抗体的制备[J]. 桂文君,金仁耀,黄雅丽,朱国念. 农药学学报. 2006(02)
[10]环境内分泌干扰物分析方法的研究与进展[J]. 赵利霞,林金明. 分析试验室. 2006(02)
博士论文
[1]金黄色葡萄球菌B型肠毒素的溶液构象及菌体生长环境效应[D]. 王小红.华中农业大学 2005
本文编号：3363930
本文链接：https://www.wllwen.com/shengtaihuanjingbaohulunwen/3363930.html
