典型氯酚类化合物对稀有鮈鲫肝脏的毒性效应和机理研究

发布时间：2022-12-18 07:53

　　氯酚类化合物（Chlorophenols, CPs）,尤其是五氯酚（Pentachlorophenol, PCP）和三氯酚（Trichlorophenol, TCP）作为廉价、高效的农药主要成分之一,在我国曾被广泛地用于木材防腐、杀菌、灭螺等农业生产。由于CPs残留可以稳定存在于环境中,且可通过呼吸道黏膜,或者皮肤接触等直接或间接方式,进入生物体的血液循环,最后大量蓄积在肝和肾脏当中,造成肝脏、肾脏、免疫及生殖系统的严重损伤,对人类的健康产生严重威胁。但其相关毒性作用及其分子机制尚未阐明。 随着现代分子生物学和环境毒理学技术的发展与应用,污染环境与蛋白质组之间相互作用规律的研究,已成为环境蛋白质组学研究领域备受关注的热点问题之一,然而氯酚类化合物对肝脏毒性作用研究,目前还仅限于一些常规毒理学单一指标的分析。 本研究以PCP和TCP两种典型氯酚类化合物为研究对象,采用我国特有实验用鱼—稀有鮈鲫（Gobiocypris rarus）为受试动物,以其肝脏蛋白表达谱的变化特征以及肝脏差异表达蛋白的基因转录水平等为切入点,利用比较蛋白质组学方法结合荧光定量PCR等分子生物技术... 

【文章页数】：119 页

【学位级别】：博士

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略词表
摘要
ABSTRACT
引言
第一章 TCP和PCP对稀有鮈鲫肝细胞毒性效应
    1 材料与方法
        1.1 试剂与仪器
        1.2 原代肝细胞培养体系的建立
        1.3 肝细胞暴露实验
        1.4 细胞相对存活率的检测（MTT assay）
        1.5 单细胞凝胶电泳（SCGE）
        1.6 镜检
        1.7 数据分析
    2 结果
        2.1 原代培养肝细胞暴露实验
        2.2 MTT实验
        2.3 单细胞凝胶电泳实验
    3 讨论
        3.1 原代培养细胞暴露实验
        3.2 TCP和PCP暴露对肝细胞DNA损伤的影响
    4 小结
第二章 TCP和PCP对稀有鮈鲫肝脏毒性
    1 材料与方法
        1.1 试剂与仪器
        1.2 实验动物
        1.3 组织病理学观察
        1.4 脏器指数
        1.5 样品的制备
        1.6 肝脏组织酶活性和蛋白质含量的测定
        1.7 流水暴露系统实际暴露浓度的测定
        1.8 统计分析
    2 结果
        2.1 暴露体系TCP和PCP浓度控制及流水暴露体系评价
        2.2 肝脏病理学改变
        2.3 PCP和TCP暴露对稀有鮈鲫体长、体重的影响
        2.4 稀有鮈鲫脏器系数的变化
        2.5 PCP对稀有鮈鲫肝脏SOD、MDA、LDH、GST活性的影响
    3 讨论
        3.1 TCP和PCP暴露对稀有鮈鲫脏细胞组织结构变化的分析
        3.2 CPs对稀有鮈鲫肝脏SOD、MDA、LDH、GST活性影响的分析
    4 小结
第三章 TCP和PCP对稀有鮈鲫肝脏毒性效应比较蛋白质组学研究
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 流水暴露实验
        1.3 蛋白样品制备
        1.4 二维凝胶电泳（2-DE）
        1.5 胶的染色
        1.6 2-DE图像扫描及分析
        1.7 质谱分析
    2 结果
        2.1 2-DE图像扫描与分析
        2.2 质谱鉴定
        2.3 差异蛋白的功能分类
    3 讨论
    4 小结
第四章 氯酚类化合物对稀有鮈鲫肝脏毒性效应分析
    1. 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 二维凝胶电泳（2-DE）
        1.3 与损伤相关基因的荧光定量PCR检测
    2. 结果
        2.1 稀有鮈鲫肝脏细胞总RNA
        2.2 稀有鮈鲫肝脏细胞目的基因PCR产物
        2.3 稀有鮈鲫肝脏损伤相关基因定量PCR产物
        2.4 mRNA 表达水平的分析
        2.5 CPs暴露组致肝脏损伤的 2-DE图
        2.6 mRNA 和蛋白表达水平的比较
    3. 讨论
        3.1 与肝脏转运功能相关的蛋白
        3.2 和代谢相关功能相关的蛋白
        3.3 和氧化应激功能有关的蛋白
        3.4 和其他功能相关的蛋白
全文结论
参考文献
综述
代表性论文
个人简介、在学期间发表论文情况与研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]三氯酚暴露致稀有鮈鲫肝脏损伤的比较蛋白质组研究[J]. 房彦军,高先军,査金苗,宁保安,李晓丽,马新华,高志贤,晁福寰.  生态毒理学报. 2009(06)
[2]三种氯代酚的水生态毒理和水质基准[J]. 罗茜,查金苗,雷炳莉,许宜平,王子健.  环境科学学报. 2009(11)
[3]两种典型氯酚类化合物暴露致稀有鮈鲫肝细胞的损伤效应[J]. 高先军,房彦军,王彩红,高志贤,俞诗源,欧国荣.  生态毒理学报. 2009(05)
[4]珠江口地区表层水中氯酚化合物污染研究[J]. 董军,孙丽娜,陈若虹,梁锐杰.  环境科学与技术. 2009(07)
[5]Vero细胞对2,4,6-三氯苯酚的毒性响应特征和敏感性分析[J]. 石艳玲,王磊,周琪.  生态毒理学报. 2008(05)
[6]五氯酚和八氯代二苯并二噁英复合暴露对斑马鱼胚胎发育的毒性效应[J]. 蒋琳,周珍,胡俊,吴艳娣,张捷,梁勇,郑明辉.  生态毒理学报. 2008(04)
[7]五氯酚暴露与肿瘤风险关系的Meta分析[J]. 郑唯韡,周颖,屈卫东,张皓,赵耐青,蒋颂辉,陈丽.  卫生研究. 2008(02)
[8]五氯酚钠致突变性研究[J]. 宋瑞霞,阮鸿洁,刘征涛.  中国公共卫生. 2008(03)
[9]水体硝基苯对日本青鳉和稀有鮈鲫的亚急性毒理学效应[J]. 周群芳,傅建捷,孟海珍,朱学艳,江桂斌,张建斌,刘杰民,时国庆.  中国科学（B辑:化学）. 2007(02)
[10]甲基苯丙胺对大鼠脑组织中NO,SOD和MDA的影响[J]. 陈汉,王慧君,李学锋,邱平明.  中国药物依赖性杂志. 2007(02)



本文编号：3721669