三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）在氨氮胁迫下解毒代谢机制的研究

发布时间：2023-03-18 22:00

　　氨氮是养殖水体中常见的重要污染胁迫因子。本文通过对三疣梭子蟹解毒代谢关键酶基因的克隆与表达分析，测定解毒代谢关键酶活力和相关产物含量的变化，研究了氨氮胁迫对三疣梭子蟹氨氮转运和代谢途径相关指标的影响，初步探讨了三疣梭子蟹在氨氮胁迫下的解毒代谢机制。本论文主要包括以下三方面内容：（1）三疣梭子蟹解毒代谢关键基因的克隆与序列分析；（2）氨氮胁迫对三疣梭子蟹转运途径的影响；（3）氨氮胁迫对三疣梭子蟹代谢途径的影响。主要结果如下： 1三疣梭子蟹解毒代谢关键基因的克隆与序列分析 通过设计兼并引物，利用RT-PCR方法从三疣梭子蟹鳃丝和肝胰脏分别克隆得到Rh蛋白和谷氨酸脱氢酶（GDH）部分基因序列。本实验克隆Rh蛋白基因所用的上、下游引物分别是5’-TGGGCCATCCTGGTGaayggnttytt-3’和5’-GGCGGCGccccanggrtg-3’，克隆得到的Rh蛋白cDNA片段长612bp，编码204个氨基酸序列，Rh蛋白氨基酸序列与其它蟹类相似性为86%-91%；克隆GDH所使用的上游引物序列是5’-ATGATCGGCATCACCccnggntgggg-3’，下游引物序列是5’-TGG...

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1 氨氮来源与危害
        1.1 养殖水体中氨氮的来源
        1.2 氨氮对水产动物的危害
    2 水产动物在氨氮胁迫下解毒代谢机制的研究进展
        2.1 鱼类在氨氮胁迫下解毒代谢代谢机制的研究进展
        2.2 甲壳动物在氨氮胁迫下解毒代谢代谢机制的研究进展
        2.3 Rh 蛋白介导水产动物氨氮转运的研究进展
            2.3.1 Rh 蛋白基因家族简介
            2.3.2 Rh 蛋白介导鱼类氨氮转运的研究进展
            2.3.3 Rh 蛋白介导甲壳动物氨氮转运的研究进展
            2.3.4 Rh 蛋白其它功能
第二章 三疣梭子蟹解毒代谢关键基因的克隆与序列分析
    第一节 三疣梭子蟹 Rh 蛋白基因的克隆与序列分析
        1 材料与方法
            1.1 实验动物
            1.2 实验方法
                1.2.1 总 RNA 提取
                1.2.2 cDNA 模板的合成
                1.2.3 PCR 扩增反应
                1.2.4 目的片段回收
                1.2.5 T 载体的连接
                1.2.6 目的片段的转化与测序
        2 结果与讨论
            2.1 Rh 蛋白基因 cDNA 片段的克隆分析
            2.2 Rh 蛋白基因的序列与同源性分析
            2.3 Rh 蛋白分子进化树的构建
    第二节 三疣梭子蟹谷氨酸脱氢酶基因的克隆与序列分析
        1 材料与方法
            1.1 实验动物
            1.2 实验方法
        2 结果与讨论
            2.1 GDH 基因 cDNA 片段的克隆分析
            2.2 GDH 基因的序列与同源性分析
            2.3 GDH 基因分子进化树的构建
第三章 氨氮胁迫对三疣梭子蟹转运途径的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 氨氮浓度设置
        1.3 样品制备
        1.4 实验指标的测定方法
            1.4.1 含氮化合物含量的测定
            1.4.2 谷氨酰胺合成途径关键酶活力的测定
            1.4.3 谷氨酰胺合成途径关键酶 mRNA 表达分析测定
                1.4.3.1 总 RNA 提取
                1.4.3.2 去除基因组 DNA
        1.5 数据处理与分析
    2 结果
        2.1 氨氮对三疣梭子蟹血淋巴氨氮含量的影响
        2.2 氨氮胁迫对三疣梭子蟹鳃转运途径的影响
        2.3 氨氮胁迫对三疣梭子蟹肝胰脏转运途径的影响
        2.4 氨氮胁迫对三疣梭子蟹肌肉转运途径的影响
        2.5 氨氮胁迫对三疣梭子蟹血淋巴转运途径的影响
    3 讨论
        3.1 氨氮胁迫对三疣梭子蟹组织 Rh 蛋白基因表达影响的研究
        3.2 氨氮胁迫对三疣梭子蟹组织谷氨酰胺合成途径影响的研究
    4 总结
第四章 氨氮胁迫对三疣梭子蟹代谢途径的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
        1.2 氨氮浓度设置
        1.3 样品制备
        1.4 实验指标的测定方法
            1.4.1 含氮化合物含量的测定
            1.4.2 黄嘌呤氧化还原酶与精氨酸酶活力的测定
                1.4.2.1 黄嘌呤氧化还原酶活力的测定
                1.4.2.2 精氨酸酶活力的测定
            1.4.3 黄嘌呤脱氢酶与精氨酸酶 mRNA 表达量的分析测定
        1.5 数据处理与分析
    2 结果
        2.1 氨氮胁迫对三疣梭子蟹鳃丝代谢途径的影响
        2.2 氨氮胁迫对三疣梭子蟹肝胰脏代谢途径的影响
        2.3 氨氮胁迫对三疣梭子蟹肌肉代谢途径的影响
        2.4 氨氮胁迫对三疣梭子蟹血淋巴代谢途径的影响
    3 讨论
        3.1 氨氮胁迫对三疣梭子蟹组织尿酸合成途径影响的研究
        3.2 氨氮胁迫对三疣梭子蟹组织尿素合成途径影响的研究
    4 总结
结论
参考文献
致谢
个人简历
发表的学术论文



本文编号：3763952