虾加工废弃物的食药用真菌转化及产物ACE抑制活性
发布时间：2023-06-02 20:49
随着全球虾产量的增加,虾加工业迅速发展,虾加工废弃物的产量亦逐年增加,进行合理回收利用,减轻、防止沿海近岸环境污染成为亟待解决问题。应用生物技术实现虾加工废弃物的高附加值、综合回收利用成为今后发展的方向。本研究用食药用真菌以液体发酵的方式转化虾加工废弃物,并用血管紧张素I转换酶(ACE)酶活模型检测了转化产物的抗高血压活性;依次用Plackett-Burman(PB)设计、最陡爬坡实验和响应面设计对转化条件进行了优化;而后用醇沉、大孔树脂吸附、萃取、凝胶柱层析、硅胶薄层层析等方法对有效成分进行了分离纯化;用液质联用法(LC-MS/MS)、气质联用法(GC/MS)对有效成分进行结构鉴定,并以化学合成的方法获得转化产物中丰度较高的两种二肽化合物(Cys-Cys和Cys-Arg)。最后以固相合成法获得了纯化的Cys-Cys和Cys-Arg、验证了二者具有较高ACE抑制活性,并用分子模拟对接的方法探讨了所得ACE抑制二肽抑制的作用机制。主要结果如下:建立了RP-HPLC法检测马尿酸(Hip)产量的色谱条件:流动相乙腈水溶液(30:70,含0.2%的冰醋酸),流速1.0 mL/min的恒度洗脱,...
【文章页数】：153 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
1.1 研究背景、目的和意义
1.1.1 研究背景
1.1.2 研究目的和意义
1.2 虾副产品及其回收再利用现状
1.2.1 制成肥料、生物农药和饲料
1.2.2 提取活性物质与营养成分
1.2.3 发酵处理
1.3 ACE与ACEI及其作用机理
1.3.1 ACE的生理功能及结构特征
1.3.2 ACEI及其作用机制
1.3.3 ACEI的活性检测方法
1.4 食药用真菌与废弃物处理及其ACEI
1.4.1 食药用真菌与固体废弃物处理
1.4.2 食药用真菌的ACE抑制活性
1.5 本文的研究内容
1.5.1 主要研究内容
1.5.2 本课题的技术路线
第2章 材料与方法
2.1 实验材料及主要仪器设备
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验仪器
2.2 主要试剂及溶液
2.2.1 主要试剂
2.2.2 主要溶液的配制
2.3 培养基及配制
2.3.1 种子及菌种初步筛选培养基
2.3.2 转化液体培养基
2.4 实验方法
2.4.1 虾加工废弃物的成分分析
2.4.2 发酵条件
2.4.3 ACEI的提取与分离
2.4.4 ACE抑制活性的测定方法
2.4.5 ACEI的分离纯化
2.4.6 ACEI的分子结构鉴定
2.4.7 ACEI的合成与活性验证
2.4.8 ACE与ACE抑制二肽模拟对接
2.4.9 数据整理与分析
第3章 ACE抑制活性测定方法的建立
3.1 引言
3.2 色谱条件的选择
3.2.1 确定Hip的特征吸收峰
3.2.2 流动相的选择
3.2.3 检测方法的检测效能分析
3.3 ACE抑制试验体系的确定
3.3.1 Hip萃取与未萃取检测对比分析
3.3.2 ACE和抑制剂作用时间的确定
3.3.3 ACE抑制试验反应体系的确定
3.4 ACE抑制活性的测定方法的验证
3.5 本章小结
第4章 转化菌株的筛选
4.1 引言
4.2 虾加工废弃物基本成分分析
4.3 转化菌株的初步筛选
4.3.1 菌丝体及水提物产量
4.3.2 发酵产物水提物ACE抑制活性
4.4 转化菌种的优选
4.4.1 各菌种在转化培养基中的生长
4.4.2 各菌种的菌丝产量
4.4.3 转化产物产量及其ACE抑制活性
4.5 本章小结
第5章 食药用真菌转化条件优化
5.1 引言
5.2 褐绒盖牛肝菌转化条件优化
5.2.1 显著影响因素的筛选
5.2.2 最大响应区域的确定
5.2.3 最优转化条件的确定
5.2.4 最优转化条件的验证
5.3 鸡油菌转化条件优化
5.3.1 PB设计筛选显著影响因素
5.3.2 最陡爬坡实验确定响应区域
5.3.3 响应面设计确定最优转化条件
5.3.4 转化条件模型的验证试验
5.4 本章小结
第6章 ACEI的结构鉴定及活性验证
6.1 引言
6.2 ACEI的提取分离
6.2.1 醇沉法富集ACEI
6.2.2 超滤法富集ACEI
6.2.3 大孔树脂吸附法富集ACEI
6.2.4 氯仿萃取法富集ACEI
6.2.5 组分A凝胶柱层析分离
6.2.6 组分B的硅胶层析分离
6.3 ACEI的结构鉴定
6.3.1 组分B1的GC/MS分析
6.3.2 组分A1的HPLC-MS/MS分析
6.4 ACEI的活性验证
6.4.1 Cys-Cys，Cys-Arg和Cys-Phe的化学合成
6.4.2 Cys-Cys、Cys-Arg和Cys-Phe的ACE抑制活性
6.5 ACE抑制二肽的作用机制
6.6 本章小结
结论
参考文献
攻读博士学位期间发表的论文及其它成果
致谢
个人简历
本文编号：3828016
【文章页数】：153 页
【学位级别】：博士
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摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
1.1 研究背景、目的和意义
1.1.1 研究背景
1.1.2 研究目的和意义
1.2 虾副产品及其回收再利用现状
1.2.1 制成肥料、生物农药和饲料
1.2.2 提取活性物质与营养成分
1.2.3 发酵处理
1.3 ACE与ACEI及其作用机理
1.3.1 ACE的生理功能及结构特征
1.3.2 ACEI及其作用机制
1.3.3 ACEI的活性检测方法
1.4 食药用真菌与废弃物处理及其ACEI
1.4.1 食药用真菌与固体废弃物处理
1.4.2 食药用真菌的ACE抑制活性
1.5 本文的研究内容
1.5.1 主要研究内容
1.5.2 本课题的技术路线
第2章 材料与方法
2.1 实验材料及主要仪器设备
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验仪器
2.2 主要试剂及溶液
2.2.1 主要试剂
2.2.2 主要溶液的配制
2.3 培养基及配制
2.3.1 种子及菌种初步筛选培养基
2.3.2 转化液体培养基
2.4 实验方法
2.4.1 虾加工废弃物的成分分析
2.4.2 发酵条件
2.4.3 ACEI的提取与分离
2.4.4 ACE抑制活性的测定方法
2.4.5 ACEI的分离纯化
2.4.6 ACEI的分子结构鉴定
2.4.7 ACEI的合成与活性验证
2.4.8 ACE与ACE抑制二肽模拟对接
2.4.9 数据整理与分析
第3章 ACE抑制活性测定方法的建立
3.1 引言
3.2 色谱条件的选择
3.2.1 确定Hip的特征吸收峰
3.2.2 流动相的选择
3.2.3 检测方法的检测效能分析
3.3 ACE抑制试验体系的确定
3.3.1 Hip萃取与未萃取检测对比分析
3.3.2 ACE和抑制剂作用时间的确定
3.3.3 ACE抑制试验反应体系的确定
3.4 ACE抑制活性的测定方法的验证
3.5 本章小结
第4章 转化菌株的筛选
4.1 引言
4.2 虾加工废弃物基本成分分析
4.3 转化菌株的初步筛选
4.3.1 菌丝体及水提物产量
4.3.2 发酵产物水提物ACE抑制活性
4.4 转化菌种的优选
4.4.1 各菌种在转化培养基中的生长
4.4.2 各菌种的菌丝产量
4.4.3 转化产物产量及其ACE抑制活性
4.5 本章小结
第5章 食药用真菌转化条件优化
5.1 引言
5.2 褐绒盖牛肝菌转化条件优化
5.2.1 显著影响因素的筛选
5.2.2 最大响应区域的确定
5.2.3 最优转化条件的确定
5.2.4 最优转化条件的验证
5.3 鸡油菌转化条件优化
5.3.1 PB设计筛选显著影响因素
5.3.2 最陡爬坡实验确定响应区域
5.3.3 响应面设计确定最优转化条件
5.3.4 转化条件模型的验证试验
5.4 本章小结
第6章 ACEI的结构鉴定及活性验证
6.1 引言
6.2 ACEI的提取分离
6.2.1 醇沉法富集ACEI
6.2.2 超滤法富集ACEI
6.2.3 大孔树脂吸附法富集ACEI
6.2.4 氯仿萃取法富集ACEI
6.2.5 组分A凝胶柱层析分离
6.2.6 组分B的硅胶层析分离
6.3 ACEI的结构鉴定
6.3.1 组分B1的GC/MS分析
6.3.2 组分A1的HPLC-MS/MS分析
6.4 ACEI的活性验证
6.4.1 Cys-Cys，Cys-Arg和Cys-Phe的化学合成
6.4.2 Cys-Cys、Cys-Arg和Cys-Phe的ACE抑制活性
6.5 ACE抑制二肽的作用机制
6.6 本章小结
结论
参考文献
攻读博士学位期间发表的论文及其它成果
致谢
个人简历
本文编号：3828016
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