EE2与DBP对斑马鱼生长发育的联合毒性研究

发布时间：2023-08-20 10:56

　　随着内分泌干扰物在环境中引起的问题越来越严重，其对生物体的生长发育的影响也逐渐成为人们关注的焦点。乙炔基雌二醇(EE2)与邻苯二甲酸二丁酯(DBP)作为两种重要的内分泌干扰物，已受到了很多学者的关注。通过研究邻苯二甲酸酯和雌激素对斑马鱼生长发育的毒性，可以了解环境中主要内分泌干扰物对鱼类的干扰效应的基本模式，并为这两类物质在环境中的潜在风险评价提供依据。 本文首先研究了EE2和DBP对斑马鱼胚胎发育的单一及联合毒性，观察斑马鱼胚胎发育的变化，统计各暴露组斑马鱼胚胎死亡率和孵化率，并对联合作用类型进行了探讨。结果表明，斑马鱼的胚胎发育对EE2和DBP的毒性作用较为敏感，均表现出显著的浓度依赖性和时间的累加效应，可以造成胚胎发育畸形（尾畸、水肿、脊柱弯曲、孵化延迟等）甚至死亡；DBP的毒性作用高于EE2，DBP和EE2的96h-LC50分别为2.219mg/L，3.975mg/L；EE2和DBP组合在不同时间和浓度有不同的效应类型，在80h时二者之间表现出拮抗作用，96h时则表现出协同作用。 为了了解二者对斑马鱼的复合内分泌干扰效应，本文分别研究了EE2与DBP对斑马鱼幼鱼及成年雄鱼卵黄蛋...

【文章页数】：98 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 环境内分泌干扰物概述
        1.1.1 分类及理化性质
        1.1.2 来源及危害
        1.1.3 作用机制
        1.1.4 雌激素类概述
        1.1.5 邻苯二甲酸酯类概述
    1.2 斑马鱼及其在环境内分泌干扰物研究中的应用
        1.2.1 斑马鱼的生物学特性及优势
        1.2.2 在环境内分泌干扰物研究中的应用
    1.3 环境内分泌干扰物复合效应研究进展
        1.3.1 环境污染物复合作用理论
        1.3.2 同类内分泌干扰物的联合效应
        1.3.3 不同种类内分泌干扰物的复合效应
        1.3.4 内分泌干扰物复合效应研究中的生物标志物
    1.4 研究意义和内容
        1.4.1 研究意义
        1.4.2 研究内容
        1.4.3 创新点
        1.4.4 技术路线
第二章 EE2 与 DBP 对斑马鱼胚胎发育的联合毒性
    2.1 材料与方法
        2.1.1 试验用斑马鱼
        2.1.2 试剂及仪器
        2.1.3 试验方法
        2.1.4 观察指标
        2.1.5 数据分析
    2.2 结果与分析
        2.2.1 DBP、EE2 单一或联合暴露对斑马鱼胚胎死亡率的影响
        2.2.2 DBP、EE2 单一或联合暴露对斑马鱼胚胎孵化率的影响
        2.2.3 DBP、EE2 单一或联合暴露对斑马鱼胚胎发育的影响
        2.2.4 DBP、EE2 等毒性效应联合作用
    2.3 讨论
        2.3.1 DBP、EE2 对斑马鱼胚胎的单一毒性
        2.3.2 DBP、EE2 对斑马鱼胚胎的联合毒性
    2.4 本章小结
第三章 EE2 与 DBP 对斑马鱼卵黄蛋白原的联合效应
    3.1 材料与方法
        3.1.1 试验用斑马鱼
        3.1.2 试剂及仪器
    3.2 试验方法
        3.2.1 毒性试验
        3.2.2 全组织匀浆液的制备
        3.2.3 BCA 法测蛋白含量
        3.2.4 VTG 的 ELISA 检测
        3.2.5 SDS-PAGE 蛋白电泳及 Western Blotting 免疫印迹检测
        3.2.6 析因设计
        3.2.7 数据分析
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 DBP、EE2 联合暴露对幼鱼 VTG 含量的影响
        3.3.2 DBP、EE2 联合暴露对成年雄鱼 VTG 含量的影响
        3.3.3 不同生长阶段对 VTG 的不同响应
    3.4 本章小结
第四章 EE2 和 DBP 长期暴露对斑马鱼生长发育和性别分化的联合效应
    4.1 材料与方法
        4.1.1 试验用斑马鱼
        4.1.2 试剂及仪器
    4.2 试验方法
        4.2.1 毒性试验
        4.2.2 实际暴露浓度的测定
        4.2.3 数据分析
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 EE2 与 DBP 实际暴露浓度
        4.3.2 存活率、体长、体重及肥满度变化
        4.3.3 DBP、EE2 联合暴露对斑马鱼组织结构的影响
        4.3.4 DBP、EE2 联合暴露对斑马鱼性别比例的影响
    4.4 本章小结
第五章 EE2 和 DBP 对成年雄性斑马鱼生长发育和生殖功能的联合毒性
    5.1 材料与方法
        5.1.1 试验用斑马鱼
        5.1.2 试剂及仪器
    5.2 试验方法
        5.2.1 毒性试验
        5.2.2 AOX 的 ELISA 检测
        5.2.3 实际暴露浓度的测定
        5.2.4 数据分析
    5.3 结果与讨论
        5.3.1 EE2 与 DBP 实际暴露浓度
        5.3.2 DBP、EE2 联合暴露对成年雄鱼存活率、体长、体重及肥满度指数的影响
        5.3.3 DBP、EE2 联合暴露对斑马鱼 AOX 蛋白含量的影响
        5.3.4 DBP、EE2 联合暴露对斑马鱼组织结构的影响
        5.3.5 DBP、EE2 联合暴露对雄性斑马鱼生殖功能的影响
    5.4 本章小结
第六章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
参考文献
攻读硕士学位期间发表的论文
致谢



本文编号：3843079