环境中微量氯苯酚类环境激素的免疫分析方法研究
发布时间：2023-10-28 15:50
近几十年来，随着环境激素类人工合成化学品和药品使用的日益增多，对人和动物体的生理活性造成了很大的影响。环境激素是环境中的激素类似物，它能通过与激素受体结合，干扰生物体正常的生理代谢、内分泌和生殖机能，直接影响生物多样性，危及生物安全，对人类未来构成潜在威胁。环境激素污染问题已成为继臭氧层、地球气候变暖之后全球的第三大环境问题，成为环境科学研究领域中的热门课题。 本课题利用免疫分析方法具有快速灵敏、操作简便、经济适用等方面的特点，将其运用于环境中微量的环境激素的检测中，填补了传统色谱分析中的分析时间长、前处理繁琐及仪器昂贵的不足。当前，免疫分析技术应用于小分子物质的检测日益受到重视，已经成为监测分析环境中痕量污染物研究的热点，若将其与传统分析技术联用，相互借鉴相互补充，必然会有一个更为广阔的应用前景。 本课题为探讨有关环境激素的免疫化学特性，选择具有代表性的酚类环境激素中的三种氯苯酚：2,4-二氯苯酚(DCP)、2,4,6-三氯苯酚(TCP)和五氯苯酚(PCP)作为研究对象。将不具免疫原性小分子氯苯酚进行修饰改造合成半抗原，并与蛋白质偶联合成具有免疫原性的人工抗原，免疫动物产生抗体，根据...
【文章页数】：190 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 环境激素的概述
1.2 酚类环境激素的研究现状
1.3 酚类环境激素监测概况
1.4 酚类环境激素免疫分析技术
1.5 本课题的研究对象、内容和技术路线
第二章 三种氯苯酚类环境激素半抗原和人工抗原的合成
2.1 引言
2.2 材料与仪器
2.2.1 实验材料
2.2.2 仪器设备
2.3 实验部分
2.3.1 半抗原的合成与鉴定
2.3.2 人工抗原的合成与鉴定
2.4 结果与讨论
2.4.1 半抗原的鉴定
2.4.2 人工抗原的鉴定
2.5 本章小结
第三章 三种氯苯酚抗体的制备
3.1 引言
3.2 材料与仪器
3.2.1 实验材料
3.2.2 仪器设备
3.3 实验部分
3.3.1 动物免疫过程
3.3.2 抗体的纯化
3.3.3 抗体的鉴定
3.4 结果与讨论
3.4.1 2,4-二氯苯酚多克隆抗体的鉴定
3.4.2 2,4,6-三氯苯酚多克隆抗体的鉴定
3.4.3 五氯苯酚多克隆抗体的鉴定
3.5 本章小结
第四章 2,4-二氯苯酚间接竞争酶联免疫分析方法的研究
4.1 引言
4.2 材料与仪器
4.2.1 实验材料
4.2.2 仪器设备
4.3 实验部分
4.3.1 抗原抗体工作浓度的选择
4.3.2 ELISA法条件优化
4.3.3 间接竞争ELISA标准曲线的建立
4.3.4 抗原抗体的亲合性考察
4.3.5 抗体的特异性考察
4.3.6 灵敏度、精密度和准确度实验
4.4 结果与讨论
4.4.1 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
4.4.2 ELISA条件优化
4.4.3 抗原抗体的亲合性
4.4.4 抗体的特异性考察
4.4.5 标准曲线
4.4.6 精密度实验
4.4.7 样品测定
4.5 本章小结
第五章 2,4-二氯苯酚间接竞争荧光免疫分析方法的研究
5.1 引言
5.2 材料与仪器
5.2.1 实验试剂
5.2.2 仪器设备
5.3 实验部分
5.3.1 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
5.3.2 间接竞争FIA条件的优化
5.3.3 间接竞争FIA标准曲线的建立
5.3.4 抗体的特异性考察
5.3.5 精密度实验
5.3.6 样品测定
5.4 结果与讨论
5.4.1 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
5.4.2 FIA条件的优化
5.4.3 抗体的特异性考察
5.4.4 标准曲线
5.4.5 精密度实验
5.4.6 样品测定
5.5 本章小结
第六章 2,4-二氯苯酚直接竞争荧光免疫分析方法的研究
6.1 引言
6.2 材料与仪器
6.2.1 实验试剂
6.2.2 仪器设备
6.3 实验部分
6.3.1 FITC荧光标记抗体的制备
6.3.2 FITC-DCP-IgG标记抗体效价的测定
6.3.3 FITC-DCP-IgG标记抗体稳定性试验
6.3.4 直接竞争FIA标准曲线的建立
6.3.5 抗体的特异性考察
6.3.6 样品测定
6.4 结果与讨论
6.4.1 FITC-DCP-IgG抗体结合比率的测定
6.4.2 FITC-DCP-IgG抗体的效价鉴定
6.4.3 FITC标记抗体稳定性试验
6.4.4 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
6.4.5 FIA条件的优化
6.4.6 抗体的特异性考察
6.4.7 标准曲线
6.4.8 样品测定
6.5 本章小结
第七章 2,4,6-三氯苯酚间接竞争荧光免疫分析方法的研究
7.1 引言
7.2 材料与仪器
7.2.1 实验材料
7.2.2 仪器设备
7.3 实验部分
7.3.1 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
7.3.2 间接竞争FIA条件的优化
7.3.3 间接竞争FIA标准曲线的建立
7.3.4 抗体特异性的考察
7.3.5 灵敏度和精密度实验
7.3.6 样品测定
7.4 结果与讨论
7.4.1 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
7.4.2 FIA条件的优化
7.4.3 标准曲线
7.4.4 抗体的特异性考察
7.4.5 精密度实验
7.4.6 样品测定
7.5 本章小结
第八章 2,4,6-三氯苯酚直接竞争荧光免疫分析方法的研究
8.1 引言
8.2 材料与仪器
8.2.1 实验材料
8.2.2 仪器设备
8.3 实验部分
8.3.1 搅拌法制备FITC荧光标记抗体
8.3.2 FITC-TCP-IgG标记抗体效价的测定
8.3.3 直接竞争FIA标准曲线的建立
8.3.4 抗体特异性的考察
8.3.5 样品测定
8.4 结果与讨论
8.4.1 FITC-TCP-IgG抗体结合比率的测定
8.4.2 FITC-TCP-IgG抗体的效价鉴定
8.4.3 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
8.4.4 FIA条件的优化
8.4.5 标准曲线
8.4.6 抗体的特异性考察
8.4.7 样品测定
8.5 本章小结
第九章 五氯苯酚间接竞争荧光免疫分析方法的研究
9.1 引言
9.2 材料与仪器
9.2.1 实验材料
9.2.2 仪器设备
9.3 实验部分
9.3.1 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
9.3.2 间接竞争FIA条件的优化
9.3.3 间接竞争FIA标准曲线的建立
9.3.4 抗体特异性的考察
9.3.5 灵敏度和精密度实验
9.3.6 试剂盒的初步研制
9.3.7 样品测定
9.4 结果与讨论
9.4.1 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
9.4.2 FIA条件的优化
9.4.3 抗体的特异性考察
9.4.4 标准曲线
9.4.5 精密度实验
9.4.6 试剂盒的初步研究
9.4.7 样品测定
9.5 本章小结
第十章 总结与展望
参考文献
附录
攻读博士期间发表和待发表学术论文及申请专利
致谢
本文编号：3857300
【文章页数】：190 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
第一章 前言
1.1 环境激素的概述
1.2 酚类环境激素的研究现状
1.3 酚类环境激素监测概况
1.4 酚类环境激素免疫分析技术
1.5 本课题的研究对象、内容和技术路线
第二章 三种氯苯酚类环境激素半抗原和人工抗原的合成
2.1 引言
2.2 材料与仪器
2.2.1 实验材料
2.2.2 仪器设备
2.3 实验部分
2.3.1 半抗原的合成与鉴定
2.3.2 人工抗原的合成与鉴定
2.4 结果与讨论
2.4.1 半抗原的鉴定
2.4.2 人工抗原的鉴定
2.5 本章小结
第三章 三种氯苯酚抗体的制备
3.1 引言
3.2 材料与仪器
3.2.1 实验材料
3.2.2 仪器设备
3.3 实验部分
3.3.1 动物免疫过程
3.3.2 抗体的纯化
3.3.3 抗体的鉴定
3.4 结果与讨论
3.4.1 2,4-二氯苯酚多克隆抗体的鉴定
3.4.2 2,4,6-三氯苯酚多克隆抗体的鉴定
3.4.3 五氯苯酚多克隆抗体的鉴定
3.5 本章小结
第四章 2,4-二氯苯酚间接竞争酶联免疫分析方法的研究
4.1 引言
4.2 材料与仪器
4.2.1 实验材料
4.2.2 仪器设备
4.3 实验部分
4.3.1 抗原抗体工作浓度的选择
4.3.2 ELISA法条件优化
4.3.3 间接竞争ELISA标准曲线的建立
4.3.4 抗原抗体的亲合性考察
4.3.5 抗体的特异性考察
4.3.6 灵敏度、精密度和准确度实验
4.4 结果与讨论
4.4.1 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
4.4.2 ELISA条件优化
4.4.3 抗原抗体的亲合性
4.4.4 抗体的特异性考察
4.4.5 标准曲线
4.4.6 精密度实验
4.4.7 样品测定
4.5 本章小结
第五章 2,4-二氯苯酚间接竞争荧光免疫分析方法的研究
5.1 引言
5.2 材料与仪器
5.2.1 实验试剂
5.2.2 仪器设备
5.3 实验部分
5.3.1 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
5.3.2 间接竞争FIA条件的优化
5.3.3 间接竞争FIA标准曲线的建立
5.3.4 抗体的特异性考察
5.3.5 精密度实验
5.3.6 样品测定
5.4 结果与讨论
5.4.1 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
5.4.2 FIA条件的优化
5.4.3 抗体的特异性考察
5.4.4 标准曲线
5.4.5 精密度实验
5.4.6 样品测定
5.5 本章小结
第六章 2,4-二氯苯酚直接竞争荧光免疫分析方法的研究
6.1 引言
6.2 材料与仪器
6.2.1 实验试剂
6.2.2 仪器设备
6.3 实验部分
6.3.1 FITC荧光标记抗体的制备
6.3.2 FITC-DCP-IgG标记抗体效价的测定
6.3.3 FITC-DCP-IgG标记抗体稳定性试验
6.3.4 直接竞争FIA标准曲线的建立
6.3.5 抗体的特异性考察
6.3.6 样品测定
6.4 结果与讨论
6.4.1 FITC-DCP-IgG抗体结合比率的测定
6.4.2 FITC-DCP-IgG抗体的效价鉴定
6.4.3 FITC标记抗体稳定性试验
6.4.4 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
6.4.5 FIA条件的优化
6.4.6 抗体的特异性考察
6.4.7 标准曲线
6.4.8 样品测定
6.5 本章小结
第七章 2,4,6-三氯苯酚间接竞争荧光免疫分析方法的研究
7.1 引言
7.2 材料与仪器
7.2.1 实验材料
7.2.2 仪器设备
7.3 实验部分
7.3.1 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
7.3.2 间接竞争FIA条件的优化
7.3.3 间接竞争FIA标准曲线的建立
7.3.4 抗体特异性的考察
7.3.5 灵敏度和精密度实验
7.3.6 样品测定
7.4 结果与讨论
7.4.1 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
7.4.2 FIA条件的优化
7.4.3 标准曲线
7.4.4 抗体的特异性考察
7.4.5 精密度实验
7.4.6 样品测定
7.5 本章小结
第八章 2,4,6-三氯苯酚直接竞争荧光免疫分析方法的研究
8.1 引言
8.2 材料与仪器
8.2.1 实验材料
8.2.2 仪器设备
8.3 实验部分
8.3.1 搅拌法制备FITC荧光标记抗体
8.3.2 FITC-TCP-IgG标记抗体效价的测定
8.3.3 直接竞争FIA标准曲线的建立
8.3.4 抗体特异性的考察
8.3.5 样品测定
8.4 结果与讨论
8.4.1 FITC-TCP-IgG抗体结合比率的测定
8.4.2 FITC-TCP-IgG抗体的效价鉴定
8.4.3 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
8.4.4 FIA条件的优化
8.4.5 标准曲线
8.4.6 抗体的特异性考察
8.4.7 样品测定
8.5 本章小结
第九章 五氯苯酚间接竞争荧光免疫分析方法的研究
9.1 引言
9.2 材料与仪器
9.2.1 实验材料
9.2.2 仪器设备
9.3 实验部分
9.3.1 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
9.3.2 间接竞争FIA条件的优化
9.3.3 间接竞争FIA标准曲线的建立
9.3.4 抗体特异性的考察
9.3.5 灵敏度和精密度实验
9.3.6 试剂盒的初步研制
9.3.7 样品测定
9.4 结果与讨论
9.4.1 抗原与抗体最佳工作浓度的选择
9.4.2 FIA条件的优化
9.4.3 抗体的特异性考察
9.4.4 标准曲线
9.4.5 精密度实验
9.4.6 试剂盒的初步研究
9.4.7 样品测定
9.5 本章小结
第十章 总结与展望
参考文献
附录
攻读博士期间发表和待发表学术论文及申请专利
致谢
本文编号：3857300
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