食物过敏原胶体金免疫层析检测试纸条的研制

发布时间：2017-10-14 18:00

  本文关键词：食物过敏原胶体金免疫层析检测试纸条的研制

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【摘要】：本论文建立了单一检测卵转铁蛋白、杏仁过敏原蛋白、花生过敏原蛋白的胶体金免疫层析试纸条,并在此基础上建立了能够同时检测杏仁、花生两种坚果过敏原蛋白的胶体金免疫层析试纸条的检测方法。研制检测卵转铁蛋白胶体金免疫层析试纸条,胶体金颗粒的粒径为20 nm；金标抗体连接的最佳pH值为8.5、最适抗体量为25μg/mL;捕获抗体的包被浓度为1.3mg/mL,二抗、金标抗体稀释倍数为1：80和1：5；选择Millipore HF135s的硝酸纤维素膜作为固相载体；标品稀释液为pH 8.5的PBST缓冲溶液；对NC膜采用0.01%酪蛋白、PBS稀释作为封闭处理液,封闭1h；金标垫0.5%Tween-20处理,检测限为15ng/mL,与白蛋白有交叉反应,与其他过敏原蛋白无交叉反应,10 min得到检测结果。研制检测杏仁过敏原胶体金免疫层析试纸条,胶体金颗粒的粒径为20 nm；金标抗体连接的最佳pH值为9.0、最适抗体量为36μg/mL;捕获抗体的包被浓度为1.3mg/mL,二抗、金标抗体稀释倍数为1：200和1：6：对NC膜采用2%的BSA、PBS稀释作为封闭处理液,封闭1h；其他工作条件与卵转铁蛋白胶体金免疫层析试纸条方法相同,检测限为100 ng/mL,无交叉反应,具有良好的特异性,10 min得到检测结果。研制检测花生过敏原胶体金免疫层析试纸条,胶体金颗粒的粒径为20 nm；金标抗体连接的最佳pH值为9.0、最适抗体量为25μg/mL;捕获抗体的包被浓度为0.5mg/mL,二抗、金标抗体稀释倍数为1：100和1：5；其他工作条件与另外两种胶体金免疫层析试纸条方法相同,方法检测限为25 ng/mL,无交叉反应,具有良好的特异性,10 min得到检测结果。研制杏仁-花生过敏原同步检测胶体金免疫层析试纸条,其中金标抗体封闭物BSA含量为在杏仁兔抗中添加40μL、花生兔抗中添加30μL,其余工作条件与单一检测试纸条方法一致。方法对杏仁和花生过敏原的检测限分别为100 ng/mL、25 ng/mL,无交叉反应,10 min得到检测结果。本文建立的方法操作简便快速、结果判断容易,适用于大量样品的快速筛选。通过对实际样品的添加过敏原蛋白和过敏原阳性样品的检测,并与购买的Neogen商业化过敏原检测试剂盒对试纸条的检测结果的有效性进行对比验证,可以检测出过敏原标签指示不明的食品,有助于食物过敏原的排查。
【关键词】：卵转铁蛋白 杏仁过敏原 花生过敏原 胶体金免疫层析检测试纸条 同步检测
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：TS207.3
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-17
• 1.1 食物过敏原8-13
• 1.1.1 食物过敏概述8-10
• 1.1.2 鸡蛋过敏原概述10-11
• 1.1.3 杏仁过敏原概述11-12
• 1.1.4 花生过敏原概述12-13
• 1.1.5 食物过敏原检测方法13
• 1.2 胶体金免疫层析技术概述13-16
• 1.2.1 胶体金免疫层析试纸条的种类14-15
• 1.2.2 胶体金免疫层析试纸条的检测原理15-16
• 1.6 论文研究的目的及意义16
• 1.7 论文研究内容16-17
• 2 材料与方法17-31
• 2.1 实验材料17-20
• 2.1.1 实验动物17
• 2.1.2 主要药品与试剂17-18
• 2.1.3 主要仪器与设备18-19
• 2.1.4 主要溶液的配制19-20
• 2.1.5 待测样品20
• 2.2 实验方法20-31
• 2.2.1 杏仁过敏原蛋白AMP的提取20
• 2.2.2 花生过敏原蛋白的提取20
• 2.2.3 过敏原蛋白抗体的制备与纯化20-23
• 2.2.4 胶体金的制备及鉴定23-24
• 2.2.5 胶体金标记抗体的制备24-25
• 2.2.6 胶体金免疫层析试纸条检测方法的建立25-27
• 2.2.7 胶体金免疫层析试纸条的组装27
• 2.2.8 胶体金免疫层析试纸条检测限的确定27-29
• 2.2.9 胶体金免疫层析试纸条检测方法的特异性29
• 2.2.10 胶体金免疫层析试纸条样品检测实验29-31
• 3 结果与讨论31-58
• 3.1 卵转铁蛋白胶体金免疫层析检测试纸条31-37
• 3.1.1 胶体金的制备及质量鉴定31
• 3.1.2 金标抗体的制备31-32
• 3.1.3 卵转铁蛋白胶体金免疫层析检测试纸条工作条件的确定32-36
• 3.1.4 卵转铁蛋白胶体金免疫层析检测试纸条检测限的确定36-37
• 3.1.5 卵转铁蛋白胶体金免疫层析检测试纸条特异性的测定37
• 3.2 杏仁过敏原胶体金免疫层析检测试纸条37-44
• 3.2.1 金标抗体的制备37-38
• 3.2.2 杏仁过敏原胶体金免疫层析检测试纸条工作条件的确定38-40
• 3.2.3 杏仁过敏原胶体金免疫层析检测试纸条检测限的确定40-41
• 3.2.4 杏仁过敏原胶体金免疫层析检测试纸条特异性的测定41-42
• 3.2.5 杏仁过敏原胶体金免疫层析检测试纸条对实际样品的检测42-44
• 3.3 花生过敏原胶体金免疫层析检测试纸条44-51
• 3.3.1 金标抗体的制备44-45
• 3.3.2 花生过敏原胶体金免疫层析检测试纸条工作条件的确定45-47
• 3.3.3 花生过敏原胶体金免疫层析检测试纸条检测限的确定47-48
• 3.3.4 花生过敏原胶体金免疫层析检测试纸条特异性的测定48
• 3.3.5 花生过敏原胶体金免疫层析检测试纸条对实际样品的检测48-51
• 3.4 杏仁-花生过敏原同步检测胶体金免疫层析试纸条51-58
• 3.4.1 胶体金粒径的确定51-52
• 3.4.2 金标抗体混合物喷涂条件的确定52
• 3.4.3 金标抗体封闭条件的确定52-53
• 3.4.4 包被捕获抗体顺序及羊抗兔二抗稀释倍数的确定53
• 3.4.5 杏仁-花生过敏原同步检测胶体金免疫层析试纸条检测限的确定53-55
• 3.4.6 杏仁-花生过敏原同步检测胶体金免疫层析试纸条特异性的确定55
• 3.4.7 杏仁-花生过敏原同步检测胶体金免疫层析试纸条对实际样品检测55-58
• 4 结论58-59
• 5 展望59-60
• 6 参考文献60-66
• 7 攻读硕士学位期间发表论文情况66-67
• 8 致谢67

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1 刘悦;食物过敏原胶体金免疫层析检测试纸条的研制[D];天津科技大学;2015年

2 李志源;奶牛孕酮半定量检测胶体金试纸条的研制[D];天津农学院;2012年

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本文编号：1032366