碳点标记IgG的荧光免疫分析法检测蛋白A和蛋白G

发布时间：2018-01-08 02:19

  本文关键词：碳点标记IgG的荧光免疫分析法检测蛋白A和蛋白G　出处：《辽宁师范大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：碳点(CDs)是最近发现的一类强荧光且发射颜色可调的纳米粒子,具有毒性低,生物相容性好,光稳定性高等优点在分析和生物分析领域表现出巨大潜力,有希望成为理想的荧光标记物。金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)和链球菌蛋白G(SPG)分别作为致病菌金黄色葡萄球菌和G群链球菌的表面蛋白,均能够与免疫球蛋白G(IgG)的Fc片段结合。本论文以SPA和SPG作为检测对象,并对CDs的合成、表征、羧基化及进一步标记IgG展开了一系列研究,主要包括以下几个方面:1、CDs的合成与表征本文以柠檬酸和乙二胺为原料,水热法合成了量子产率高达75.3%的CDs,通过扫描傅里叶转换红外光谱和紫外-可见吸收光谱对CDs进行表征。结果表明所合成的CDs表面含氧基团丰富,表现出良好的水溶性,易于功能化及卓越的发光性能。此外,CDs的发射波长不随激发波长的改变而改变。因此,CDs作标记物为荧光免疫分析、生物成像及生物传感等方面的研究提供了新机遇。2、CDs标记人IgG检测金黄色葡萄球菌蛋白ACDs表面的羟基转化成羧基有助于抗体共轭,本文利用NaOH和ClCH2COONa超声法对CDs进行羧基化处理。加入EDC和NHS使羧基化的CDs与人IgG(hIgG)共价结合,得到CDs-hIgG共轭物。傅里叶转换红外光谱、紫外-可见吸收光谱和荧光偏振度均表明CDs成功标记在hIgG上,且体系的荧光强度随着SPA浓度的增大而增强。最优实验条件下测定SPA,在0.1-5.0μg/mL线性范围内得到了线性回归方程,检出限为0.04μg/mL,相对标准偏差为2.41%。可运用该方法对实际样品中的SPA进行检测。3、CDs标记羊抗人IgG检测链球菌蛋白G本文对CDs进行羧基化处理,并与羊抗人IgG(gIgG)共价结合,形成CDs-gIgG共轭物。多种表征结果证明CDs-gIgG共轭物的存在。向CDs-gIgG中加入不同浓度的SPG,体系的荧光增强,且程度较SPA更为显著。在最优实验条件下,体系的荧光强度变化率(F-F0)/F0与SPG浓度之间存在良好的线性关系,线性范围0.02-0.20μg/mL,检出限低至0.01μg/mL,相对标准偏差为2.16%。综上所述,CDs在荧光免疫分析范畴可以成为荧光标记物的绝佳选择。
[Abstract]:This paper presents a series of studies on the synthesis , characterization , carboxymethylation and fluorescence polarization of CDs by means of scanning Fourier transform infrared spectroscopy , UV - Vis absorption spectrum and fluorescence polarization .

【学位授予单位】：辽宁师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：O657.3;TQ937

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本文编号：1395235