海参中呋喃唑酮药残的胶体金免疫层析现场快速检测技术

发布时间：2017-03-29 23:03

  本文关键词：海参中呋喃唑酮药残的胶体金免疫层析现场快速检测技术，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：近年来,食品安全问题频繁发生,兽药残留尤其是海产品兽药残留问题更是引起了国内外的广泛关注。硝基呋喃类药物是一类人工合成的广谱类抗菌药物,因其具有杀菌效果好、价格便宜等优点,被广泛应用于动物养殖业中,但是硝基呋喃类抗生素的代谢物会在动物体内蓄积,进而对人体造成伤害,所以我国及世界大多数国家都已经将硝基呋喃类药物列为禁用药物。目前,胶体金免疫检测技术在兽药残留的检测中已经形成了自己独特的优势,这就使得与大型仪器分析方法相比,不同海产品的药残分析过程变得简单快速,这一检测方法已经被大范围推广使用。经过多年研究,目前市场上已经推出了对应药残的胶体金免疫检测试剂卡,然而关于这些试剂卡的效能以及如何优化胶体金免疫检测的前处理,做到在实际检测过程中避免有机试剂萃取、多次离心等复杂操作尚无明确的研究和报道。本研究以仿刺参为实验对象,采用高温加热和盐酸酸处理相结合的方法消除海参中蛋白和海参多糖的基质效应,从而省略药物衍生后用有机试剂萃取来消除基质效应这一繁琐的步骤,实现了衍生后直接检测,建立新的前处理方法,使整个检测过程减少对大型仪器的利用率,检测时间缩短到60min以内,并且使胶体金免疫检测的灵敏度达到国家相关标准的要求,从而进一步改善了现有商品化试剂卡普遍存在的前处理不合理的缺陷。主要的研究内容如下：1.探索实验前期的各种因素,包括检测卡的检测性能及在药物衍生后不经提取直接检测的情况下,海参基质对检测结果产生的影响。实验得出结论,当呋喃唑酮代谢物(AOZ)标准液的浓度≥0.25μg/L时,即可出现阳性的检测结果,且稳定性和特异性都良好；海参多糖及其与蛋白质的共同作用为干扰检测的最大基质。2.摸索消除海参基质干扰的最佳条件和方法,确定最佳的前处理方法是将海参样品在衍生前用80℃水浴加热5 min并结合终浓度为0.1 mol/L盐酸处理,可有效消除基质干扰；衍生化条件优化结果为60℃水浴衍生45min时,可以达到理想的检测效果,并使检测时间进一步缩短。最终建立的检测方法对海参中AOZ的检出限为0.5μg/kg,检测方法的重复性及特异性良好。3.把最终建立的前处理过程在实际海参样本中进行验证。同时采用本实验建立的方法和LC-MS/MS检测方法对同一实际海参样本进行检测。结果显示,建立的方法与LC-MS/MS的符合性良好,都呈现强阳性的结果；优化后的的样品前处理方法可以实现实际样本中AOZ的快速检测。
【关键词】：呋喃唑酮 高温加热 酸处理 胶体金免疫层析 前处理 快速检测
【学位授予单位】：中国海洋大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：TS254.7
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 0 前言12-25
• 0.1 硝基呋喃类抗生素的简介及其分析检测的研究现状12-17
• 0.1.1 硝基呋喃类药物的简介12
• 0.1.2 硝基呋喃类药物的药用性质及其使用情况12
• 0.1.3 硝基呋喃类药物的代谢作用及分布情况12-13
• 0.1.4 硝基呋喃类药物的残留状况及其危害13-14
• 0.1.5 硝基呋喃类药物的检测技术研究进展14-17
• 0.2 胶体金免疫分析技术的概况及开发研究进展17-21
• 0.2.1 胶体金免疫检测的机理及其开发历程18
• 0.2.2 胶体金免疫分析方法在快检方而的应用进展18-21
• 0.3 胶体金免疫层析分析技术检测AOZ残留的研究进展21-23
• 0.4 研究的目的及意义23
• 0.5 研究内容及技术路线23-25
• 0.5.1 研究内容23-24
• 0.5.2 研究的技术路线24-25
• 1 检测卡性能探究及海参基质对胶体金免疫检测的影响25-38
• 1.1 引言25
• 1.2 实验材料与仪器25-28
• 1.2.1 主要实验仪器25-26
• 1.2.2 材料与试剂26-27
• 1.2.3 溶液的配置27-28
• 1.3 实验方法28-31
• 1.3.1 AOZ检测卡性能的测定28-29
• 1.3.2 现有前处理方法对海参样本的适用性29
• 1.3.3 海参基质对胶体金免疫检测的影响29-31
• 1.4 实验结果与讨论31-37
• 1.4.1 AOZ检测卡性能的测定31-33
• 1.4.2 现有前处理方法对海参样本的适用性测定结果33-34
• 1.4.3 海参基质对胶体金免疫检测的影响34-37
• 1.5 本章小结37-38
• 2. 胶体金免疫层析检测前处理过程的优化38-51
• 2.1 引言38-39
• 2.2 实验材料与仪器39-41
• 2.2.1 主要实验仪器39-40
• 2.2.2 材料与试剂40
• 2.2.3 溶液的配置40-41
• 2.3 实验方法41-43
• 2.3.1 海参基质干扰的消除过程41-42
• 2.3.2 衍生化条件的优化42-43
• 2.3.3 pH的调节方法与样品终体积的确定43
• 2.4 实验结果与讨论43-50
• 2.4.1 海参基质干扰的消除过程43-48
• 2.4.2 衍生化条件的优化结果48-49
• 2.4.3 pH的调节方法49-50
• 2.5 本章小结50-51
• 3 该方法在实际海参样品中的验证51-59
• 3.1 前言51
• 3.2 实验材料与仪器51-53
• 3.2.1 主要的实验仪器51-52
• 3.2.2 材料与试剂52
• 3.2.3 溶液的配置52-53
• 3.3 实验方法53-54
• 3.3.1 最终建立的检测方法的灵敏度与稳定性53
• 3.3.2 检测方法的特异性53
• 3.3.3 最终建立的检测方法在实际海参样品中的验证53-54
• 3.4 实验结果与讨论54-58
• 3.4.1 最终建立的检测方法的灵敏度与稳定性54-55
• 3.4.2 检测方法的特异性55-56
• 3.4.3 最终建立的方法在实际样本中的验证56
• 3.4.4 便携式可视化检测装置的形成56-58
• 3.5 本章小结58-59
• 4 结论及本研究的创新点59-61
• 4.1 结论59-60
• 4.2 创新点60
• 4.3 论文不足之处及工作展望60-61
• 参考文献61-66
• 致谢66-67
• 个人简历67
• 在学期间发表的学术论文67

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：275611