真菌DT06抗生素的分离纯化及理化性质初步研究

发布时间：2020-10-18 19:04

　　 真菌DT06属于Simplicillium lanosoniveum的变种。前期研究发现DT06能够产生抑制革兰氏阳性细菌的抗生素,国内外均尚未见有关S.lanosoniveum的抗生素的研究和报告。本文首次把S.lanosoniveum的抑菌活性物质作为抗生素来进行研究和讨论,并对该抗生素进行了分离和理化性质研究,主要研究结果如下:在对大孔树脂CT-12吸附抗生素工艺条件优化的实验中,对DT06分生孢子生长状况进行了观察。然后,通过单因素实验确定了影响大孔树脂吸附效果的显著条件,并设计了L9(33)正交实验,确定最佳吸附条件组合为:pH=3;径高比D/H=1/5;流速=1.2 mL/min,且在此组合下,抗生素回收率最高,达到了95.11%。确定了最佳吸附组合后,通过浓度梯度洗脱,最终确定最佳解吸剂为95%乙醇溶液。50%乙醇溶液可以除去大量色素。为了对抗生素进一步纯化,对三种弱碱性阴离子交换树脂D392、D380、D301T进行筛选,结果发现用乙酸溶液酸化后的D301T树脂吸附了样品液中的色素,抗生素未被吸附,故可考虑把离子交换树脂D301T作为脱色剂。该色素对抗生素的纯化造成了很大的干扰,本文对分离出的色素进行了一个初步的研究,初步推断其为多肽类物质,为研究DT06与蓝藻之间的共生关系打下了基础。在对抗生素的理化性质进行初步研究的实验中,最终确定四氯化碳为抗生素最佳沉淀剂;HPLC分析结果显示,根据不同的保留时间可知抗生素与预期的头孢菌素C不同;双缩脲试剂显色结果得知抗生素不是肽类物质或者含有肽键的其它物质;茚三酮显色结果又进一步确定抗生素与头孢菌素C不同,且抗生素不含有α-氨基和α-羧基;乙醇硫酸溶液显色结果得知,抗生素很有可能属于萜类或甾类物质。紫外扫描结果发现抗生素在乙醇溶液中有两个吸收峰,其中在228nm处吸收较强,其次在277nm处有个较小的吸收峰,得出抗生素分子中可能含有芳香族侧链。最后与已知的抗生素进行了对比,得出DT06抑菌活性代谢产物是一种新抗生素,具有潜在的医药工业应用价值,其具体分子结构及药用价值有待进一步研究。本文实验结果可作为该抗生素工业分离纯化以及结晶工艺的研究基础。
【学位单位】：河北工业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：TQ465
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 天然产物在药物研发中的重要性
        1.1.1 天然产物概述
        1.1.2 天然产物在药物研发中的地位
        1.1.3 生物多样性
        1.1.4 天然产物在抗生素研发中所扮演的角色
        1.1.5 开发新抗生素的理由
        1.1.6 抗生素所扮演的多重角色
    1.2 Simplicillium属概述
        1.2.1 Simplicillium属简介
        1.2.2 与Simplicillium属有关的天然产物
        1.2.3 Simplicillium lanosoniveum的研究近况
    1.3 本论文创新点及主要研究内容
        1.3.1 本论文的创新点
        1.3.2 本论文的主要研究内容
第二章 大孔树脂吸附DT06抗生素的工艺优化
    2.1 前言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验使用的菌种
        2.2.2 实验仪器及设备
        2.2.3 实验试剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 培养基
        2.3.2 菌株培养
        2.3.3 抗生素活性检测
        2.3.4 大孔树脂CT-12
        2.3.5 发酵液预处理
        2.3.6 吸附条件的确定
        2.3.7 最佳解吸剂的确定
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 孢子萌发过程
        2.4.2 柱层析吸附DT06抗生素工艺优化结果
        2.4.3 正交实验结果分析
        2.4.4 最佳解吸剂浓度确定结果
    2.5 本章小结
第三章 离子交换树脂的筛选
    3.1 前言
    3.2 实验材料
        3.2.1 基本材料
        3.2.2 实验仪器及设备
        3.2.3 离子交换树脂
        3.2.4 实验试剂
    3.3 实验方法
        3.3.1 样品液的制备
        3.3.2 抗生素的检测
        3.3.3 三种离子交换树脂
        3.3.4 最佳树脂的筛选
        3.3.5 解吸剂的筛选
        3.3.6 色素的去除及初步研究
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 树脂筛选结果
        3.4.2 解吸剂筛选结果
        3.4.3 色素初步研究结果
    3.5 本章小结
第四章 真菌DT06抗生素理化性质初步研究
    4.1 前言
    4.2 实验材料
        4.2.1 基本材料
        4.2.2 实验仪器及设备
        4.2.3 实验试剂
    4.3 实验方法
        4.3.1 抗生素结晶
        4.3.2 抗生素液相检测
        4.3.3 抗生素性质分析
        4.3.4 抗生素紫外扫描检测
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 抗生素结晶结果
        4.4.2 抗生素液相检测结果
        4.4.3 肽键（酰胺键）检测结果
        4.4.4 α -氨基和α -羧基检测结果
        4.4.5 萜类或甾类物质检测结果
        4.4.6 抗生素紫外扫描检测结果
    4.5 本章小结
第五章 结论
参考文献
攻读硕士期间的科研情况和发表论文说明
致谢

【参考文献】

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本文编号：2846690