酶解制备猪肩胛骨降血压肽及其分离纯化的研究

发布时间：2020-12-03 09:26

　　本论文以猪肩胛骨为原料,通过酶解制备降血压肽,以血管紧张素转化酶（Angiot-ensin Ⅰ-Converting Enzyme, ACE）抑制率为主要指标,筛选出最适酶作为酶解用酶；通过单因素和响应面试验优化该种酶的酶解条件；在此基础上,对酶解底物进行超声波预处理,通过单因素和响应面试验优化超声条件；利用超滤、凝胶层析等分离纯化技术从酶解液中分离纯化降血压肽；探讨猪肩胛骨降血压肽耐消化特性及各种理化因素对其稳定性的影响。研究结果如下。筛选出的最适蛋白酶为风味蛋白酶,最佳酶解条件为：pH 7.0、底物浓度5%、酶解温度53℃、酶解时间4.5 h、酶底比6900 U/g。此条件下制备出猪肩胛骨降血压肽的ACE抑制率为65.31%,半数抑制浓度（Half-inhibitory concentration, IC50）为1.34 mg/mL。对底物的超声条件进行优化,获得的最佳超声条件为：超声时间25 min,超声功率717 W,超声温度40℃,酶解时间3 h。此条件下制备出ACE抑制率为75.58%的猪肩胛骨降血压肽。IC5o值为0.90 mg/mL。采用超滤离心管将酶解液分离为分子量大... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
    1.1 畜禽骨研究概况
        1.1.1 畜禽骨
        1.1.2 畜禽骨的营养价值
        1.1.3 畜禽骨胶原蛋白降血压肽研究进展
    1.2 高血压与血管紧张素转化酶
    1.3 食源性降血压肽
        1.3.1 酶解法制备降血压肽
        1.3.2 超声波辅助制备降血压肽
    1.4 降血压肽的分离纯化
    1.5 降血压肽活性的评价方法
        1.5.1 体外评价方法
        1.5.2 体内抑制率测定
    1.6 体外模拟胃肠道消化过程
    1.7 降血压肽功能性食品研究进展
        1.7.1 降血压肽对产品感官特性的影响
        1.7.2 食品加工对降血压肽的影响
    1.8 研究目的及意义
2 材料与方法
    2.1 材料与试剂
    2.2 主要试验仪器
    2.3 方法
        2.3.1 猪肩胛骨降血压肽酶解条件优化
        2.3.2 超声波辅助酶解制备降血压肽工艺优化
        2.3.3 降血压肽的分离纯化
        2.3.4 不同理化因素对降血压肽活性的影响测定
        2.3.5 降血压肽体外模拟胃肠道消化稳定性试验
        2.3.6 指标测定
        2.3.7 统计分析
3 结果与分析
    3.1 蛋白质含量的测定结果
    3.2 酶活的测定结果
    3.3 蛋白酶筛选结果
    3.4 风味蛋白酶酶解条件优化结果
        3.4.1 酶解温度对酶解液的水解度及ACE抑制率的影响
        3.4.2 酶解pH对酶解液的水解度及ACE抑制率的影响
        3.4.3 酶解时间对酶解液的水解度及ACE抑制率的影响
        3.4.4 酶底比对酶解液的水解度及ACE抑制率的影响
        3.4.5 底物浓度对酶解液的水解度及ACE抑制率的影响
        3.4.6 猪肩胛骨降血压肽制备工艺响应面法优化结果
    3.5 超声波辅助酶解制备降血压肽工艺优化结果
        3.5.1 超声功率对酶解液ACE抑制率的影响
        3.5.2 超声时间对酶解液ACE抑制率的影响
        3.5.3 超声温度对酶解液ACE抑制率的影响
        3.5.4 超声后酶解时间对酶解液ACE抑制率的影响
        3.5.5 超声波辅助酶解制备降血压肽的响应面优化结果
    3.6 猪肩胛骨降血压肽的分离纯化结果
        3.6.1 超滤对猪肩胛骨降血压肽的纯化结果
        3.6.2 凝胶层析对猪肩胛骨降血压肽的纯化结果
    3.7 不同理化因素对降血压肽活性影响的测定结果
        3.7.1 不同温度对降血压肽活性影响的测定结果
        3.7.2 不同pH对降血压肽活性影响的测定结果
        3.7.3 食品添加剂对降血压肽稳定性影响的测定结果
    3.8 降血压肽体外模拟胃肠道消化稳定性测定结果
        3.8.1 酶解液的胃肠道稳定性试验测定结果
        3.8.2 超滤液的胃肠道稳定性试验测定结果
4 讨论与结论
    4.1 讨论
        4.1.1 关于选择猪肩胛骨制备降血压肽
        4.1.2 关于猪肩胛骨前处理
        4.1.3 关于猪肩胛骨的酶解
        4.1.4 关于底物的超声波预处理
        4.1.5 关于分离纯化
        4.1.6 关于猪肩胛骨降血压肽的稳定性
    4.2 结论
5 问题与展望
参考文献
致谢
攻读硕士期间发表文章


【参考文献】：
期刊论文
[1]食源性活性肽制备与分离纯化的研究进展[J]. 葛平珍,周才琼.  食品工业科技. 2014(04)
[2]猪股骨头胶原蛋白降血压肽的分离纯化[J]. 刘小红,李诚,付刚,苏赵.  食品科学. 2014(06)
[3]超滤法浓缩富集牡蛎蛋白抗氧化活性肽[J]. 郝更新,曹文红,郝记明,章超桦.  食品工业科技. 2013(11)
[4]虾头自溶产物中ACE抑制肽的分离鉴定[J]. 朱国萍,章超桦,曹文红,吉宏武.  水产学报. 2013(04)
[5]超声波、微波对鲑鱼肽结构及抗氧化性的影响[J]. 康永锋,康俊霞,吴文惠,史华进.  食品工业科技. 2013(05)
[6]苋籽ACE抑制肽的大孔树脂分离纯化[J]. 陈飞平,周家华,曾凡坤,常虹.  食品工业科技. 2013(11)
[7]分步酶解法制备菜籽降血压肽[J]. 张艳,刘志伟.  食品科学. 2013(03)
[8]预处理对核桃肽抗氧化活性的影响[J]. 吕莹,杨柏崇,王莹,陈怡,陈文茜,韩涛.  食品工业科技. 2013(02)
[9]酶解山核桃蛋白制备降血压肽的工艺[J]. 包怡红,于阳阳,赵若诗.  食品科学. 2013(01)
[10]脉冲超声波对黄粉虫幼虫水溶性蛋白结构的影响[J]. 代春华,汤坚,顾小红,马海乐.  江苏大学学报(自然科学版). 2012(02)

硕士论文
[1]绿豆粉丝废水生物法制备降血压肽的研究[D]. 龚琴.湖北工业大学 2011
[2]牛骨酶解制备血管紧张素转换酶抑制肽的研究[D]. 蔡丽华.华中农业大学 2010
[3]猪髋骨胶原多肽的制备及其生物活性研究[D]. 李珂.湖南农业大学 2009



本文编号：2896263