肉鸡屠宰生产链沙门氏菌的污染情况、耐药性、耐药基因及PFGE分型研究

发布时间：2017-04-11 17:02

  本文关键词：肉鸡屠宰生产链沙门氏菌的污染情况、耐药性、耐药基因及PFGE分型研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：沙门氏菌是引起人类食物中毒最常见的食源性病原菌,主要引起发热、胃肠炎、腹泻和败血症。近年来沙门氏菌对抗生素的耐药性逐年增强,且其耐药性可通过食物链传递给人群。因此,研究沙门氏菌,特别是耐药沙门氏菌在食品链的分布和传播情况,对公共卫生安全具有重要意义。本试验从四川省某一重点肉鸡屠宰生产链分离鉴定出189株沙门氏菌的基础上,进行血清型、耐药性分析,1类整合子／基因盒、gyrA和parC基因突变、磺胺类耐药基因(sul1. sul2和sul3)、四环素类耐药基因(tet(A)、tet(B)、tet(C)和tet(G))、β-内酰胺类耐药基因(blaTEM、blaCTX-M和blaSHV)、氨基糖苷类耐药基因(aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅳ和ant(2')-Ⅰ)和氟苯尼考耐药基因floR的PCR检测及PFGE分型,主要结果如下。1肉鸡屠宰生产链沙门氏菌的分离鉴定 2012-2014年,从肉鸡屠宰生产链采集肉鸡盲肠样(代表屠宰前)、屠宰环节胴体表面、分割鸡肉和成品鸡肉样品共627份,按照GB 4789.4-2010的方法,并以沙门氏菌属特异性基因invA和hut基因准确鉴定沙门氏菌。结果显示,从样品中准确鉴定出189株沙门氏菌,其中肠炎沙门氏菌132株,鼠伤寒沙门氏菌29株,其他沙门氏菌28株,沙门氏菌总分离率为30.1%,其中,肠炎沙门氏菌占总分离株的69.8%。屠宰前粪样、屠宰环节胴体表面、分割鸡肉、成品鸡肉中沙门氏菌分离率分别为47.96%、18.78%、31.33%、14.00%。2肉鸡屠宰生产链沙门氏菌的耐药性分析采用纸片扩散法,测定了189株沙门氏菌对10种抗生素的敏感性,结果表明沙门氏菌对萘啶酸的耐药率最高,为99.5%,对氨苄西林(87.8%),四环素(51.9%),环丙沙星(48.7%),甲氧苄啶／磺胺甲嗯唑(48.1%),大观霉素(34.4%)耐药率较高,对氟苯尼考、庆大霉素、阿莫西林／克拉维酸、头孢曲松耐药率较低。189株沙门氏菌共产生了49种耐药谱,多重耐药率为60.8%。沙门氏菌多重耐药率沿屠宰生产链逐渐增加,从50.0%增加到78.6%。3耐药沙门氏菌耐药基因情况3.1多重耐药沙门氏菌1类整合子及基因盒 115株多重耐药沙门氏菌中1类整合子检出率为37.4%(43/1 1 5)。其中,肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌1类整合子阳性率分别为32.9%和72.4%：成品鸡肉、屠宰环节胴体表面、屠宰前粪样和分割鸡肉1类整合子检测率分别为72.7%、38.9%、34.5%和29.0%。43株1类整合子阳性菌株中,有21株扩增出不同片段大小的基因盒,测序结果表明1类整合子携带的基因盒为bla(OXA-30)-aadA1(β-内酰胺类和氨基糖苷类耐药耐药基因)和drfA1-orfC(季胺盐类耐药基因)。3.2 gyrA和parC基因突变情况对188株喹诺酮耐药的沙门氏菌gyrA基因Asp87、Ser83突变和parC基因Ser80、Glu84突变情况进行MAMAPCR检测,结果gyrA基因Asp87和Ser83突变检出率分别为80.5%和75.0%,parC基因Ser80和Glu84突变检出率分别为72.9%和76.6%。3.3 p-内酰胺类耐药基因 对166株对氨苄西林耐药的沙门氏菌进行blaTEM、blaSHV、blaCTX-M基因的PCR检测,结果blaTEM检出率最高为93.4%(155/166),其次blaCTX-M检出率为12.7%(21/166),未检测到blaSHV基因。3.4氨基糖苷类耐药基因 对79株氨基糖苷类耐药沙门氏菌进行aac(3)-Ⅱ、aac(3)-Ⅳ和ant(2')-Ⅰ基因的PCR检测。79株对氨基糖苷类抗生素耐药的沙门氏菌中,aac(3)-Ⅱ和aac(3)-Ⅳ基因检测率分别为35.4%和53.2%,未检测到ant(2')-Ⅰ基因。3.5磺胺类耐药基因对91株磺胺类耐药沙门氏菌进行sul1、sul2和sul3基因的PCR检测。91株对甲氧苄啶/磺胺甲VA唑耐药的沙门氏菌,sull、sul2和sul3基因检出率分别为50.5%、97.8%和50.5%。3.6四环素类耐药基因 对98株四环素耐药的沙门氏菌进行tet(A)、tet(B)、 tet(C)和tet(G)基因的PCR检测。98株对四环素耐药的沙门氏菌中,tet(A)、tet(B)和tet(C)基因检测率分别为25.5%、50.0%和71.4%,未检测到tet(G)基因。3.7氟苯尼考类耐药基因 对45株氟苯尼考耐药的沙门氏菌进行floR基因的PCR检测。45株对氟苯尼考耐药的沙门氏菌中,44株检测到floR基因,检出率为97.8%。3.8肉鸡屠宰生产链沙门氏菌的PFGE分型采用X-bal内切酶消化沙门氏菌DNA,利用PFGE分析189株肉鸡屠宰生产链分离沙门氏菌的遗传关系。通过PFGE电泳图聚类分析,189株沙门氏菌PFGE条带相似度在27.25%～100%,共产生了21种带型。同一血清型沙门氏菌基本聚在一起。谱型分析结果表明,在屠宰过程中沙门氏菌有可能沿着屠宰链从上游环节到成品鸡肉传播的趋势,且在屠宰过程存在环境和人员操作的交叉污染。本文分析了肉鸡屠宰生产链沙门氏菌污染和耐药性情况,为肉鸡屠宰生产链沙门氏菌污染和耐药性提供基础数据；对沙门氏菌耐药基因进行检测,为研究沙门氏菌耐药性产生机制提供参考；对肉鸡屠宰生产链沙门氏菌进行PFGE分型,为研究沙门氏菌在肉鸡屠宰生产链的传播提供现实和理论基础。
【关键词】：沙门氏菌 耐药性 耐药基因 PFGE 肉鸡屠宰生产链
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：TS251.1
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 缩略词表11-15
• 1 前言15-28
• 1.1 沙门氏菌污染情况15-18
• 1.1.1 国外动物源沙门氏菌污染情况15-16
• 1.1.2 国内动物源沙门氏菌污染情况16-18
• 1.2 沙门氏菌的检测方法18
• 1.3 沙门氏菌表型耐药现状18-21
• 1.4 沙门氏菌对常见抗菌药耐药机制21-25
• 1.4.1 β-内酰胺类抗生素耐药机制21-22
• 1.4.2 氨基糖苷类抗生素耐药机制22
• 1.4.3 磺胺类抗生素耐药机制22-23
• 1.4.4 四环素类耐药机制23
• 1.4.5 喹诺酮类耐药机制23-24
• 1.4.6 氯霉素耐药机制24
• 1.4.7 Ⅰ类整合子与多重耐药性24-25
• 1.5 沙门氏菌的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型25-26
• 1.6 研究的目的和意义26-27
• 1.7 研究的主要内容和技术路线27-28
• 1.7.1 研究内容27
• 1.7.2 技术路线27-28
• 2 材料与方法28-38
• 2.1 材料28-30
• 2.1.1 样品28-29
• 2.1.2 菌株29
• 2.1.3 培养基29
• 2.1.4 生化试剂29
• 2.1.5 抗生素29-30
• 2.1.6 主要仪器30
• 2.2 方法30-38
• 2.2.1 沙门氏菌的分离鉴定30-32
• 2.2.2 沙门氏菌的血清分型32
• 2.2.3 药敏试验32-33
• 2.2.4 沙门氏菌耐药基因检测33-36
• 2.2.5 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌的PFGE基因分型36-38
• 3 结果与分析38-56
• 3.1 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌污染情况38-39
• 3.2 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌耐药性情况39-42
• 3.3 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌多重耐药情况42-45
• 3.4 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌1类整合子与基因盒检测结果45-46
• 3.5 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌喹诺酮类gyrA和parC基因突变点检测结果46-47
• 3.6 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌耐药基因扩增结果47-51
• 3.6.1 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌β-内酰胺类耐药基因检测结果47-48
• 3.6.2 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌氨基糖苷类耐药基因检测结果48-49
• 3.6.3 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌磺胺类耐药基因检测结果49-50
• 3.6.4 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌四环素耐药基因检测结果50-51
• 3.6.5 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌氟苯尼考耐药基因检测结果51
• 3.7 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌PFGE分析结果51-56
• 3.7.1 肠炎沙门氏菌PFGE分型结果52-55
• 3.7.2 鼠伤寒沙门氏菌PFGE分型结果55-56
• 4 讨论56-63
• 4.1 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌污染情况分析56-57
• 4.2 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌的血清型分析57
• 4.3 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌耐药性情况分析57-58
• 4.4 沙门氏菌耐药基因分析58-62
• 4.4.1 1类整合子与多重耐药性相关性分析58
• 4.4.2 喹诺酮类gyrA和parC基因与表型耐药相关性分析58-59
• 4.4.3 β-内酰胺类耐药基因分析59-60
• 4.4.4 氨基糖苷类耐药基因分析60
• 4.4.5 磺胺类耐药基因分析60-61
• 4.4.6 四环素耐药基因分析61
• 4.4.7 氟苯尼考耐药基因分析61-62
• 4.5 肉鸡屠宰生产链沙门氏菌PFGE分析62-63
• 5 结论与展望63-66
• 5.1 结论63-64
• 5.2 创新点64
• 5.3 展望64-66
• 参考文献66-75
• 致谢75-76
• 攻读硕士期间发表的学术论文76

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本文编号：299527