亚硒酸化β-乳球蛋白抗衰老活性的研究

发布时间：2017-07-18 07:19

  本文关键词：亚硒酸化β-乳球蛋白抗衰老活性的研究

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【摘要】：本实验亚硒酸化β-乳球蛋白为研究对象,考察了其亚急性毒性和急性毒性,通过毒理学实验确定安全剂量后,建立D-半乳糖亚急性衰老模型,从衰老的自由基损伤学说和神经内分泌学说的角度出发,应用行为学检测、生化指标检测、脑组织病理学检测以及实时荧光定量PCR技术探讨了亚硒酸化p-乳球蛋白的抗衰老活性及其延缓衰老的作用机制。首先,进行亚硒酸化p-乳球蛋白的急性和亚急性毒理试验,通过改良寇氏法计算出亚硒酸化p-乳球蛋白对昆明种小鼠的半数致死量(LDso)为15.94mg Se/kg。其次,采用颈背部皮下注射D-半乳糖建立衰老小鼠模型,研究了亚硒酸化β-乳球蛋白的抗衰老活性。在行为学测试中,亚硒酸化β-乳球蛋白给药组均能缩短衰老小鼠的寻台潜伏期,增加穿越平台的次数,提高空间探索试验中小鼠穿越平台的次数,在一定程度上延缓衰老小鼠空间学习记忆能力的衰退。测定各组小鼠的生化指标,结果表明,亚硒酸化p-乳球蛋白能显著降低血清和脑组织中乙酰胆碱酯酶的活性,维持胆碱能系统的稳定,从而延缓衰老。不同剂量的亚硒酸化p-乳球蛋白可在不同程度上提高GSH-Px和SOD的活性,减少各组织中MDA的含量。HE染色观察大脑皮层发现,灌喂亚硒酸化β-乳球蛋白后,能在一定程度上减缓神经元细胞的减少和形变速度,保护大脑皮层的正常形态结构。最后,小鼠脑、肝脏组织的实时荧光定量PCR实验结果表明：与模型组相比,中剂量组小鼠脑、肝脏组织中的GPX1、GPX3、GPX4的表达量明显升高。以上结果说明,亚硒酸化p-乳球蛋白能明显的延缓D-gal致衰老小鼠的衰老进程,具有良好的抗衰老作用。
【关键词】：亚硒酸化β-乳球蛋白 毒性试验 抗氧化 基因表达
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：TS201.4;TS201.21
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 1 前言9-21
• 1.1 衰老9
• 1.2 衰老学说及其研究进展9-13
• 1.2.1 自由基损伤学说10-11
• 1.2.2 免疫功能下降学说11
• 1.2.3 神经内分泌学说11
• 1.2.4 端粒学说11-12
• 1.2.5 遗传基因学说12
• 1.2.6 衰老的其他学说12-13
• 1.3 硒的研究概况13-14
• 1.3.1 硒的来源和分布13
• 1.3.2 硒毒理学研究进展13-14
• 1.4 硒的补充14-15
• 1.5 硒的抗衰老生物学基础15-18
• 1.5.1 硒与抗氧化15-16
• 1.5.2 硒与机体免疫16-17
• 1.5.3 硒与脑功能17
• 1.5.4 硒与内分泌系统17-18
• 1.6 研究的目的与内容18-21
• 1.6.1 研究的目的及意义18-19
• 1.6.2 研究内容19-21
• 2 材料与方法21-33
• 2.1 实验材料仪器与设备21-23
• 2.1.1 实验动物21
• 2.1.2 受试材料21
• 2.1.3 实验试剂与药品21-22
• 2.1.4 实验仪器22-23
• 2.2 硒酸化β-乳球蛋白的制备及安全性分析23
• 2.2.1 硒酸化β-乳球蛋白的制备23
• 2.2.2 硒酸化β-乳球蛋白的毒性实验23
• 2.3 硒酸化β-乳球蛋白抗衰老活性实验模型的建立23-24
• 2.4 Morris水迷宫(Morris water maze,MWM)测试24-25
• 2.5 各组小鼠组织形态学检测及方法25-26
• 2.5.1 脏器指数的测定25
• 2.5.2 HE染色观察D-gal衰老小鼠大脑皮层组织形态学变化25-26
• 2.6 小鼠血清、脑、肝脏中硒含量的测定26-27
• 2.6.1 样品制备26-27
• 2.6.2 样品前处理27
• 2.6.3 样品测定27
• 2.7 小鼠乙酰胆碱酯酶及抗氧化指标的测定27-29
• 2.7.1 样品制备27
• 2.7.2 乙酰胆碱酯酶的测定27
• 2.7.3 抗氧化系统的测定27-29
• 2.8 小鼠脑、肝脏组织GSH-Px相关基因mRNA表达水平的检测及方法29-32
• 2.8.1 引物设计与合成29-30
• 2.8.2 小鼠肝脏和脑组织总RNA的提取30-31
• 2.8.3 小鼠肝脏和脑组织反转录cDNA第一链的合成31
• 2.8.4 小鼠肝脏和脑组织实时定量Real-Time PCR31-32
• 2.9 数据处理及统计分析32-33
• 3 结果与讨论33-48
• 3.1 亚硒酸化β-乳球蛋白的毒性试验33-34
• 3.1.1 亚硒酸化β-lg急性毒性剂量范围的确定33
• 3.1.2 受试物半数致死量(LD50)的确定33-34
• 3.2 小鼠模型的建立34-35
• 3.2.1 各组小鼠体征变化34
• 3.2.2 亚硒酸化β-乳球蛋白对衰老小鼠体重的影响34-35
• 3.3 水迷宫实验(Morris water maze,MWM)35-38
• 3.4 小鼠组织形态学38-40
• 3.4.1 亚硒酸化β-lg对小鼠脏器指数的影响38
• 3.4.2 脑组织HE染色结果38-40
• 3.5 亚硒酸化β-乳球蛋白对硒含量的影响40-41
• 3.6 亚硒酸化β-乳球蛋白对乙酰胆碱酯酶的影响41-43
• 3.7 亚硒酸化β-lg对D-gal小鼠抗氧化指标的影响43-47
• 3.7.1 亚硒酸化β-lg对脑蛋白含量的影响43
• 3.7.2 亚硒酸化β-lg对GSH-Px活性的影响43-44
• 3.7.3 亚硒酸化β-lg对SOD活性的影响44-45
• 3.7.4 亚硒酸化β-lg对丙二醛(MDA)含量的影响45-47
• 3.8 小鼠脑、肝组织中GSH-Px相关基因mRNA表达水平的测定47-48
• 4 结论48-50
• 5 展望50-51
• 6 参考文献51-58
• 7 攻读硕士学位期间发表论文及申请专利情况58-59
• 8 致谢59

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本文编号：556570