沙枣多糖纯化、结构表征及其生物活性研究

发布时间：2017-07-26 06:12

  本文关键词：沙枣多糖纯化、结构表征及其生物活性研究

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【摘要】：本研究主要以沙枣为原料,对沙枣多糖的分离纯化、结构鉴定、抗氧活性、抗肿瘤活性和降血脂活性进行了研究,主要研究成果如下：(1)采用热水浸提法提取沙枣多糖,浸提时间2h,浸提温度80℃,料液比1：35,提取次数2次,此条件下,沙枣多糖的得率为5.9%。(2)沙枣多糖粗品经DEAE-52阴离子交换柱层析分离得到不同组分EAP-1、 EAP-2和EAP-3,收集主要的EAP-1组分,并采用SephadexG-100凝胶柱层析进一步纯化得到沙枣多糖组分EAP-1a,通过高效液相色谱法(HPLC)、SephadexG-100凝胶柱层析法鉴定验证均为均一多糖组分。(3)通过气相色谱分析得到多糖组分EAP-la的单糖组成,主要由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成,且摩尔比为0.029：0.74：0.51：0.039：1.0：5.19,通过高效液相色谱分析得到多糖组分EAP-la的分子量为61421Da。(4)采用红外光谱、核磁共振、圆二色谱、刚果红试验、β-消去试验、原子力显微镜等方法确定多糖组分EPA-la具有α-吡哺环构型,可能含有较长的侧链和较多的分枝,在水溶液中可能以三股螺旋结构存在。(5)沙枣粗多糖的体外抗氧化活性的研究结果表明：沙枣多糖具有一定的还原能力,在所测定的浓度范围内,沙枣多糖羟基自由基(·OH)清除率最大可达59%；对超氧阴离子(O2-·)的清除率最大可达21%；对DPPH-自由基的清除作用随多糖浓度的增大而增大,最大可达到40%。(6)沙枣多糖的体外抗肿瘤活性研究表明：MTT试验结果表明,沙枣多糖在一定程度上能够抑制HepG2细胞的增殖,并计算出对细胞处理时间为48h,对HepG2细胞的半抑制浓度(IC50)为469μg/ml;通过HE染色及Hoechst33342染色等细胞形态学观察,发现在IC50 (469μg/ml)剂量下,细胞形态学发生了较为明显的改变。说明沙枣粗多糖对人体肝癌细胞HepG2有一定的抑制效果。(7)沙枣多糖的降血脂活性研究表明,沙枣粗多糖能够降低了试验小鼠血清中总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)的含量,并能升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平和动脉粥样硬化指数(AI),并能够有效防止动脉硬化的发生。
【关键词】：沙枣多糖 分离纯化 结构 生物活性
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：O629.12
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 1 前言9-19
• 1.1 多糖概述9
• 1.2 多糖的研究进展9-14
• 1.2.1 多糖的来源9
• 1.2.2 多糖的提取9-11
• 1.2.3 多糖的分离、纯化11-12
• 1.2.4 多糖的纯度鉴定12
• 1.2.5 多糖的结构分析12-14
• 1.3 多糖的生物活性研究14-17
• 1.3.1 多糖的降血糖活性研究14
• 1.3.2 多糖降血脂活性研究14-15
• 1.3.3 多糖的抗氧化活性研究15
• 1.3.4 多糖的抗肿瘤活性研究15-17
• 1.4 沙枣多糖的研究进展17
• 1.5 课题研究目的、意义和内容17-19
• 1.5.1 课题研究目的和意义17-18
• 1.5.2 研究内容18-19
• 2 材料与方法19-34
• 2.1 实验材料19-22
• 2.1.1 主要原材料19
• 2.1.2 主要药品试剂19-20
• 2.1.3 试验仪器与设备20-21
• 2.1.4 主要试剂溶液配制21-22
• 2.2 实验方法22-34
• 2.2.1 沙枣多糖的提取22
• 2.2.2 沙枣粗多糖的纯化22
• 2.2.3 糖含量的测定22-23
• 2.2.4 蛋白质含量的测定23
• 2.2.5 沙枣多糖纯度及相对分子质量的测定23-24
• 2.2.6 单糖组成分析24
• 2.2.7 紫外光谱分析24-25
• 2.2.8 红外光谱分析25
• 2.2.9 β-消去反应25
• 2.2.10 碘-碘化钾实验25
• 2.2.11 刚果红实验25
• 2.2.12 核磁共振分析25
• 2.2.13 圆二色谱分析25
• 2.2.14 原子力显微镜扫描25-26
• 2.2.15 沙枣多糖的抗氧化活性研究26-27
• 2.2.16 沙枣多糖对人肝癌细胞HepG2的体外抗肿瘤活性研究27-28
• 2.2.17 EAP抗肿瘤形态学观察28-29
• 2.2.18 沙枣多糖降血脂活性研究29
• 2.2.19 血脂指标的测定29-33
• 2.2.20 数据处理和统计分析33-34
• 3 结果与讨论34-56
• 3.1 沙枣多糖的提取和纯化34-35
• 3.1.1 沙枣多糖的提取34
• 3.1.2 DEAE-52离子交换柱分级纯化结果34
• 3.1.3 SephadexG-lOO凝胶柱层析纯化结果34-35
• 3.2 糖含量及蛋白质的测定35
• 3.3 多糖纯度鉴定及分子量的测定35-37
• 3.3.1 SephadexG-100凝胶柱层析35-36
• 3.3.2 高效液相色谱法(HPLC)纯度鉴定及分子量的测定36-37
• 3.4 单糖组成分析37-38
• 3.5 紫外光谱分析38-39
• 3.6 红外光谱分析39
• 3.7 多糖糖肽键的鉴定39-40
• 3.8 碘-碘化钾实验40
• 3.9 刚果红实验40-41
• 3.10 核磁共振图谱分析41-43
• 3.10.1 ~1H-NMR分析41-42
• 3.10.2 ~(13)C-NMR分析42-43
• 3.11 圆二色谱分析43-44
• 3.12 原子力显微镜44-45
• 3.13 沙枣多糖抗氧化活性的研究45-47
• 3.13.1 沙枣的多糖总还原能力的测定45
• 3.13.2 沙枣多糖清除羟基自由基的清除作用45-46
• 3.13.3 沙枣多糖对超氧阴离子的清除作用46-47
• 3.13.4 沙枣多糖对DPPH自由基的清除作用47
• 3.14 沙枣多糖对人肝癌细胞HEPG2的抗肿瘤活性研究47-50
• 3.14.1 MTT实验结果47-48
• 3.14.2 HE染色检测细胞凋亡48-49
• 3.14.3 Hoechst 33342染色激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡49-50
• 3.15 沙枣多糖降血脂活性分析50-56
• 3.15.1 高血脂症模型的建立50
• 3.15.2 沙枣多糖对小鼠体重变化的影响50-51
• 3.15.3 沙枣多糖对小鼠脏器指数变化的影响51
• 3.15.4 沙枣多糖对小鼠血清中总胆固醇(TC)含量的影响51-52
• 3.15.5 沙枣多糖对小鼠血清中甘油三酯(TG)含量的影响52-53
• 3.15.6 沙枣多糖对小鼠血清中高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量的影响53
• 3.15.7 沙枣多糖对小鼠血清中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量的影响53-54
• 3.15.8 沙枣多糖对小鼠动脉粥样硬化指数(AI)的影响54-56
• 4 结论56-58
• 5 展望58-59
• 6 参考文献59-65
• 7 攻读硕士学位期间发表论文情况65-66
• 8 致谢66

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本文编号：575023