壳寡糖诱导交链孢菌细胞凋亡及毒素抑制的研究

发布时间：2017-08-11 21:35

  本文关键词：壳寡糖诱导交链孢菌细胞凋亡及毒素抑制的研究

  更多相关文章： 壳寡糖 交链孢菌 细胞凋亡 毒素 品质

【摘要】：壳寡糖是一种水溶性低聚糖,具有良好的生物兼容性,可生物降解并对人畜无毒,其抑菌活性在植物病害防治、食品防腐以及医疗等方面具有广阔的应用前景。目前对壳寡糖作用机理的研究主要集中于其诱导植物产生抗病性方面,在壳寡糖抑制病原真菌机理方面还报道较少。交链孢菌是侵染范围很广的一种侵染性真菌,在造成危害的同时,产生多种真菌毒素,采后番茄果实可受其侵染而发生黑霉病。本论文首先研究不同浓度的壳寡糖对菌丝生长和孢子萌发的抑制现象,从而确定寡糖对交链孢菌的生物学影响。结果表明,500 μg/mL的壳寡糖抑菌效果最明显,对菌丝生长的抑制率达到55.56%,对孢子萌发的抑制率达到78%。扫描电镜观察不同浓度的壳寡糖对交链孢菌丝和孢子均有破坏作用,处理组菌丝体管状形态模糊,表面粗糙,甚至出现菌丝消融状态。同样处理组孢子破裂,完全变形,出现原生质溢出现象。其次通过对壳寡糖诱导交链孢菌的细胞凋亡过程进行研究,发现壳寡糖对交链孢菌原生质体有致死作用。荧光显微镜观察结果表明,壳寡糖处理组线粒体膜电位下降,ROS水平显著增高。在激光共聚焦显微镜下观察壳寡糖与交链孢菌丝和孢子的结合,发现菌丝体和孢子整体荧光染色较均匀,但是在菌丝隔膜处出现荧光断裂现象,隔膜未被染色,表明壳寡糖可能进入细胞内部与其DNA结合,凝胶阻滞作用验证结果进一步证实了该结论。以体外提取交链孢菌毒素的方法研究壳寡糖与致病毒素的相互作用表明,壳寡糖处理组细胞存活率基本不受影响,而毒素处理组大部分均出现质壁分离现象和死亡现象,且存活率5%。壳寡糖和毒素共同作用细胞时,细胞形态较饱满,细胞核无皱缩现象,存活率为90%,说明壳寡糖对毒素侵染番茄细胞有一定的抑制作用。最后本论文还研究了壳寡糖对采后番茄贮藏品质的影响,发现壳寡糖可显著降低果实发病率,抑制病斑扩展速度,延缓果实硬度的降低,推迟番茄果实的甜度变化时间,有效保持果实颜色和抗坏血酸的含量,提高了总酚含量,有利于果实口感的改善和良好风味的形成。
【关键词】：壳寡糖 交链孢菌 细胞凋亡 毒素 品质
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：TS201.2
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-9
• 1 前言9-20
• 1.1 交链孢菌概述9-10
• 1.2 壳寡糖简介10-13
• 1.2.1 壳寡糖的生物学活性和生物安全性10-11
• 1.2.2 壳寡糖的制备方法11
• 1.2.3 壳寡糖在农业上的应用11-13
• 1.3 壳寡糖抑菌机理研究进展13-15
• 1.3.1 壳寡糖对细菌的抑菌机理研究14-15
• 1.3.2 壳寡糖对真菌的抑菌机理研究15
• 1.4 细胞凋亡的研究进展15-18
• 1.4.1 细胞凋亡概述15-16
• 1.4.2 ROS、Ca~(2+)、线粒体在细胞凋亡中的作用16-17
• 1.4.3 丝状真菌细胞凋亡的研究进展17-18
• 1.5 真菌菌毒素的研究概况18
• 1.6 研究目的和主要研究内容18-20
• 1.6.1 研究目的18-19
• 1.6.2 主要研究内容19-20
• 2 材料与方法20-30
• 2.1 实验材料20-21
• 2.1.1 供试材料20
• 2.1.2 主要试剂20-21
• 2.1.3 主要仪器设备21
• 2.2 实验方法21-22
• 2.2.1 培养基的配制22
• 2.2.2 壳寡糖溶液的配制22
• 2.2.3 制备交链孢菌孢子22
• 2.3 壳寡糖对交链孢菌生物学性状的影响22-23
• 2.3.1 壳寡糖对菌落径向生长的影响22
• 2.3.2 壳寡糖对交链孢菌孢子萌发的影响22-23
• 2.3.3 壳寡糖对菌丝细胞膜渗透率的影响23
• 2.3.4 扫描电镜观察壳寡糖对交链孢菌丝和孢子的影响23
• 2.4 壳寡糖对交链孢菌细胞凋亡的影响23-25
• 2.4.1 壳寡糖对原生质体存活率的影响23-24
• 2.4.2 线粒体膜电位的测定24
• 2.4.3 活性氧的测定24-25
• 2.5 壳寡糖对交链孢菌上的作用位点研究25-27
• 2.5.1 荧光标记的壳寡糖的制备以及抑菌活性的测定25
• 2.5.2 荧光标记的壳寡糖和2-AMAC与菌丝的结合25
• 2.5.3 荧光标记的壳寡糖和2-AMAC与孢子的结合25-26
• 2.5.4 荧光标记的壳寡糖在交链孢菌胞内作用位点研究26-27
• 2.6 壳寡糖对毒素的抑制作用研究27-28
• 2.6.1 毒素的提取与纯化27
• 2.6.2 壳寡糖对毒素侵染番茄的抑制作用27-28
• 2.7 壳寡糖对采后番茄储藏品质影响的研究28-30
• 2.7.1 果实处理28
• 2.7.2 果实发病率与病斑严重度检测28
• 2.7.3 果实生理指标测定28-30
• 3 结果与讨论30-56
• 3.1 壳寡糖对交链孢菌生物学性状的影响30-36
• 3.1.1 不同浓度壳寡糖对菌丝生长的影响30-31
• 3.1.2 不同浓度壳寡糖对孢子萌发的影响31-32
• 3.1.3 壳寡糖对菌丝细胞膜渗透率的影响32-33
• 3.1.4 扫描电镜观察壳寡糖对交链孢菌丝和孢子的影响33-36
• 3.2 壳寡糖对交链孢菌细胞凋亡的研究36-40
• 3.2.1 壳寡糖对交链孢菌原生质体存活率的影响36-38
• 3.2.2 壳寡糖作用下交链孢菌线粒体膜电位的测定38-39
• 3.2.3 壳寡糖作用下交链孢菌活性氧的测定39-40
• 3.3 壳寡糖在交链孢菌上的作用位点研究40-44
• 3.3.1 荧光标记的壳寡糖的制备以及抑菌活性的测定40-41
• 3.3.2 荧光标记的壳寡糖与菌丝和孢子的结合41-43
• 3.3.3 交链孢菌DNA与壳寡糖的体外结合实验43-44
• 3.4 壳寡糖对毒素侵染番茄的抑制作用44-50
• 3.5. 壳寡糖对采后番茄贮藏品质的研究50-56
• 3.5.1 壳寡糖诱导果实对交链孢菌侵染抗性的变化50-52
• 3.5.2 壳寡糖诱导果实硬度的变化52
• 3.5.3 壳寡糖诱导后果实可溶性固形物含量的变化52-53
• 3.5.4 番茄果实颜色的变化53-54
• 3.5.5 抗坏血酸含量的测定54
• 3.5.6 可溶性酚含量的测定54-56
• 4 结论56-57
• 5 展望57-58
• 6 参考文献58-66
• 7 攻读硕士期间发表论文情况66-67
• 8 致谢67

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 胡志鹏;壳寡糖的研究进展[J];中国生化药物杂志;2003年04期

2 李明春,冯震,辛梅华,刘超;十二酰化壳寡糖的制备及其性质[J];化工进展;2005年09期

3 马镝;吴元华;赵秀香;;壳寡糖的制备、分离分析方法及在农业上的应用[J];现代农药;2007年02期

4 高晚霞;曾林涛;;壳寡糖变色及其适宜保存条件的研究[J];食品研究与开发;2009年05期

5 黄琬凌;曾凡骏;宋宝珍;郑宁;;增强免疫力壳寡糖保健胶囊的实验评价[J];食品科技;2010年06期

6 刘幸海;李正名;王宝雷;;壳寡糖的制备工艺最新研究进展[J];天津化工;2006年01期

7 唐强;钱小东;林乐新;武鹏;赵悦;叶建军;杨健;;用于壳寡糖提取的多元分流式集成反应分离装备研究[J];装备制造技术;2007年12期

8 黄琬凌;李仲雄;曾里;曾凡骏;;免疫调节功能壳寡糖胶囊的研制[J];食品研究与开发;2010年10期

9 王礼;邓卫利;林文业;;壳寡糖分析检测的研究进展[J];大众科技;2011年05期

10 朱振元;姚强;耿红冉;刘扬;;全乙酰化壳寡糖的制备方法比较及其结构表征[J];天津科技大学学报;2011年05期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 田金花;杨华;王立升;;壳寡糖锌(Ⅱ)配合物的合成与结构表征[A];中国化学会第27届学术年会第07分会场摘要集[C];2010年

2 杨自芳;何其庄;施阳;吴四华;瞿思一;;壳寡糖铜的合成表征及生物活性研究[A];上海市化学化工学会2009年度学术年会论文集[C];2009年

3 李曙光;白雪芳;杜昱光;;壳寡糖生物农药质量控制关键技术研究[A];新世纪（首届）全国绿色环保农药技术论坛暨产品展示会论文集[C];2002年

4 石磊;韩丽华;刘文祥;刘晓梅;谭岩;;壳寡糖的纯化及质谱表征[A];2005年全国有机质谱学术交流会论文集[C];2005年

5 朱加虹;陈建国;郑连英;;壳寡糖生物农药质量标准与评价方法探讨[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集（下）[C];2006年

6 黄海南;张翠;潘继红;;壳寡糖抑瘤实验研究[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年

7 黄海南;张翠;潘继红;;壳寡糖抑瘤和促凋亡实验报告[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年

8 乔莹;白雪芳;杜昱光;;从文献分析看壳寡糖研究的发展[A];2008年全国糖生物学学术会议论文摘要[C];2008年

9 赵小明;余伟婷;白雪芳;杜昱光;;壳寡糖激发子与草莓细胞结合位点的研究[A];第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会论文集[C];2004年

10 张文清;王琳玲;;壳寡糖的含量分析[A];上海市化学化工学会2006年度学术年会论文摘要集[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 林立欣;中国丹麦合作研发壳寡糖产品[N];中国化工报;2007年

2 中国科学院大连化学物理研究所天然产物与糖工程课题组（1805） 杜昱光;壳寡糖与人类健康[N];保健时报;2008年

3 记者 姚耀;我率先用现代生物技术生产壳寡糖[N];中国化工报;2005年

4 记者 于益江 通讯员 史学丰;我壳寡糖生物技术取得突破[N];中国知识产权报;2007年

5 金亮;壳寡糖与人类未来健康工程启动[N];中国医药报;2008年

6 中国科学院大连化学物理研究所格莱克壳寡研究中心专家委员会委员 陈耀华;人类健康的金钥匙——壳寡糖[N];保健时报;2008年

7 刘兴飞;壳寡糖杀菌诱导功能卓越[N];农资导报;2011年

8 ;科技和风险投资让壳寡糖先行[N];科技日报;2002年

9 于洁 副主任医师;壳寡糖让肠道变得健康[N];保健时报;2009年

10 记者 姚耀;中国率先用现代生物技术生产壳寡糖[N];农资导报;2006年

中国博士学位论文全文数据库 前7条

1 邹平;特定乙酰度壳寡糖诱导小麦抗盐作用及其机理研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2015年

2 蒋茂荣;壳寡糖促外周神经损伤修复及作用机制初探[D];苏州大学;2012年

3 刘晓丽;壳寡糖—曲酸衍生物的制备及其抗菌活性研究[D];江南大学;2015年

4 赵小明;壳寡糖诱导植物抗病性及其诱抗机理的初步研究[D];中国科学院研究生院（大连化学物理研究所）;2006年

5 刘冰;壳寡糖及其配合物对糖尿病的作用研究[D];中国海洋大学;2007年

6 李贤;壳寡糖细胞内的亚定位及其在NF-κB通路、抗肿瘤、成骨分化中的作用[D];暨南大学;2011年

7 孙继鹏;壳寡糖金属配合物对扇贝体内重金属镉的影响[D];中国海洋大学;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 刘立春;壳寡糖对团头鲂头肾巨噬细胞免疫功能的影响[D];华中农业大学;2015年

2 梁天姣;壳寡糖的制备及其在酵母多肽分离纯化上的应用研究[D];广东海洋大学;2015年

3 侯中英;壳寡糖减轻幽门螺杆菌对胃癌AGS细胞的诱导凋亡作用[D];青岛大学;2015年

4 王健;壳寡糖降低体内外非酒精性脂肪肝模型甘油三脂的作用及机制研究[D];青岛大学;2015年

5 闫飞;壳寡糖对脂多糖诱导的黄河鲤头肾巨噬细胞活性的影响[D];河南工业大学;2015年

6 闫冰雪;壳寡糖对肉仔鸡生产性能、屠宰性能、免疫指标及骨骼参数的影响[D];河南农业大学;2015年

7 董惠忠;聚合度6-8壳寡糖的制备关键技术研究[D];华东理工大学;2014年

8 苏鹏;壳寡糖对红鳍东方渶(Takifugu rubripes)生长、免疫酶及肠道菌群的影响[D];大连海洋大学;2016年

9 张贝贝;可注射aFGF/磺化壳寡糖温敏水凝胶的制备及药效学研究[D];暨南大学;2016年

10 崔杨;壳寡糖诱导交链孢菌细胞凋亡及毒素抑制的研究[D];天津科技大学;2015年

，

本文编号：658344