蛹虫草多肽制备分离及功能口服液加工工艺研究

发布时间：2017-08-29 22:12

  本文关键词：蛹虫草多肽制备分离及功能口服液加工工艺研究

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【摘要】：蛹虫草是一种和冬虫夏草同属异种的药食兼用真菌,研究表明蛹虫草含有与冬虫夏草相近的功能物质及药用功效。蛹虫草主要的活性成分主要是虫草多糖、腺苷、甘露醇、SOD酶和一些微量元素。当前报道较多的是关于虫草素和虫草多糖,而关于蛋白质制备多肽类的研究及其保健品的开发较少。本研究主要内容及结果如下：以蛹虫草子实体为原料,测定了蛹虫草子实体基本成分和主要功能成分,其含量为：蛋白质28.73%,虫草多糖21.85%,腺苷1.20%,虫草素1.08%,甘露醇3.824%。本文采用碱提酸沉法提取蛹虫草子实体中的蛋白质。分别通过单因素试验和正交试验对提取方法进行优化。最终得到碱法提取蛹虫草蛋白的最佳提取条件为：NaOH溶液浓度0.15mol/1,料液比1：17.5,提取时间120min。采用酸沉法沉降蛹虫草蛋白,分析得到pH4.6是蛋白质的等电点。选取蛋白酶复合酶解,以水解度DH为指标,通过单因素和响应面试验对水解条件进行优化,最终确定水解的最佳条件为反应时间为7.00h,pH为9.15,反应温度为52.59℃,此时水解度最大,将此条件下的酶解液冷冻干燥。利用Tricine-SDS-PAGE电泳和葡聚糖凝胶层析对蛹虫草多肽进行初步分离纯化,分析了蛹虫草多肽的分子量范围。电泳结果表明,酶解法制备的蛹虫草多肽分子量主要集中分布在4722-7547Da附近；凝胶层析结果表明,酶解法制备的蛹虫草多肽分子量主要分布在6674-28333Da和296-5343Da,多肽是小分子物质,可知酶解液中分离的多肽分子量主要集中在296-5343Da。选用体外化学模拟体系测定了蛹虫草多肽的超氧阴离子自由基(02-)清除能力,DPPH-自由基清除能力、羟自由基(-OH)清除能力和还原能力,当蛹虫草多肽浓度为1.0mg/ml时,超氧阴离子自由基(O2-)清除率,DPPH-自由基清除率、羟自由基(-OH)清除率分别为37.80%、46.34%和43.21%,说明复合蛋白酶酶解制备的蛹虫草多肽具有一定的清除自由基和抗氧化的能力。采用平板滤纸法考察蛹虫草多肽的抑菌活性。试验结果显示,蛹虫草多肽对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和沙门氏菌的抑菌结果均为阴性,表明酶法制备的蛹虫草多肽对上述四种菌没有抑菌活性。研究了多肽口服液的生产工艺流程。酶解法制备的多肽液采用活性炭、p-环状糊精和苹果酸进行脱苦处理,主要添加白砂糖、柠檬酸、蜂蜜和甘氨酸进行调配,以感官评定为指标确定最佳配方组合,这四种物质的添加量为：白砂糖10%,蜂蜜3%,柠檬酸0.2%,甘氨酸0.1%。
【关键词】：蛹虫草 酶解 多肽 抗氧化 口服液
【学位授予单位】：天津科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：TS218
【目录】：

• 摘要4-5
• abstract5-9
• 1 前言9-21
• 1.1 蛹虫草的研究概况9-12
• 1.1.1 蛹虫草简介9
• 1.1.2 蛹虫草子实体的营养成分9-11
• 1.1.3 蛹虫草的化学成分及分析11-12
• 1.1.4 蛹虫草产品的开发12
• 1.2 生物活性肽的研究概况12-18
• 1.2.1 生物活性肽的来源13
• 1.2.2 生物活性肽的功能13-14
• 1.2.3 蛋白质酶解法制备生物活性肽及其研究进展14-16
• 1.2.4 生物活性肽的分离16-18
• 1.3 虫草多肽的研究现状18
• 1.4 微波杀菌技术的应用18-19
• 1.4.1 微波杀菌技术的原理18
• 1.4.2 影响微波杀菌效果的因素18-19
• 1.4.3 微波杀菌技术及应用19
• 1.5 课题研究意义及内容19-21
• 1.5.1 研究的内容19-20
• 1.5.2 研究的意义20-21
• 2 材料与方法21-40
• 2.1 材料21-23
• 2.1.1 原料21
• 2.1.2 实验试剂21-22
• 2.1.3 实验仪器及设备22-23
• 2.2 实验方法23-40
• 2.2.1 蛹虫草基本成分分析23-26
• 2.2.2 蛹虫草功能成分测定26-28
• 2.2.3 蛹虫草子实体蛋白质提取工艺28-30
• 2.2.4 蛹虫草蛋白的酶解工艺30-32
• 2.2.5 蛹虫草子实体活性肽的分离纯化32-34
• 2.2.6 蛹虫草子实体多肽体外抗氧化活性研究34-37
• 2.2.7 蛹虫草多肽口服液加工工艺研究37-40
• 3 结果与讨论40-67
• 3.1 蛹虫草基本成分分析40-41
• 3.1.1 蛹虫草蛋白质含量结果40
• 3.1.2 蛹虫草还原糖含量结果40-41
• 3.2 蛹虫草功能成分分析41-44
• 3.2.1 蛹虫草多糖含量的测定41
• 3.2.2 蛹虫草虫草素和腺苷含量的测定41-42
• 3.2.3 蛹虫草甘露醇含量的测定42-43
• 3.2.4 蛹虫草基本成分含量结果43-44
• 3.3 蛹虫草蛋白质提取结果分析44-49
• 3.3.1 牛血清白蛋白标准曲线44
• 3.3.2 蛹虫草蛋白沉降点测定结果44-45
• 3.3.3 蛹虫草蛋白提取单因素试验结果45-47
• 3.3.4 蛹虫草蛋白提取正交试验结果47-49
• 3.4 蛹虫草蛋白酶解试验结果分析49-56
• 3.4.1 蛋白酶筛选试验结果49-50
• 3.4.2 单因素试验结果分析50-53
• 3.4.3 响应面试验结果分析53-56
• 3.5 蛹虫草多肽分离纯化结果56-61
• 3.5.1 电泳结果分析56-58
• 3.5.2 葡聚糖凝胶层析结果分析58-60
• 3.5.3 电泳法和葡聚糖层析法分离结果分析60-61
• 3.6 蛹虫草多肽抗氧化活性实验结果61-63
• 3.6.1 蛹虫草多肽还原力测定结果61
• 3.6.2 蛹虫草多肽DPPH-自由基清除能力测定结果61-62
• 3.6.3 蛹虫草多肽超氧阴离子抑制率测定结果62
• 3.6.4 蛹虫草多肽羟自由基抑制率测定结果62-63
• 3.6.5 蛹虫草多肽抑菌试验结果63
• 3.7 蛹虫草多肽口服液工艺结果63-67
• 3.7.1 蛹虫草多肽脱苦试验结果63-64
• 3.7.2 蛹虫草多肽口服液调配试验结果64-65
• 3.7.3 蛹虫草多肽口服液稳定性试验结果65
• 3.7.4 蛹虫草多肽口服液质量指标测定结果65-67
• 4 结论67-68
• 5 展望68-69
• 6 参考文献69-74
• 7 攻读硕士学位期间发表论文情况74-75
• 8 致谢75

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