苹果酸—乳酸发酵细菌的多样性及其耐酒精分析
发布时间：2021-11-05 15:26
苹果酸-乳酸发酵（MLF）是葡萄酒生产工艺中非常重要的发酵过程。MLF不仅改善了葡萄酒的口感、降低酸度,还有利于增强葡萄酒的稳定性并产生一些有利于改善葡萄酒质量的风味物质。然而到目前为止,人们对于MLF的认识还很不充分,许多问题有待解决。特别是苹果酸-乳酸发酵细菌（MLB）的一些研究方法尚未建立,使得有关MLF和MLB的研究相对滞后。本研究对具有潜在高酒精度的歌海娜葡萄原料进行了发酵分析,对自然MLF过程中细菌的多样性、分类鉴定、遗传多样性、细胞的快速计数方法、耐酒精能力等进行了研究,以期为更深入的认识和研究MLF及MLB奠定基础。（1）本研究首次建立了以Hind III和Mse I为内切酶的O.oeni扩增片段长度多态性分析技术（AFLP）体系,包括O.oeni AFLP分析的基因组DNA提取方法、Hind III和Mse I双酶切连接反应体系、预扩增和选择性扩增反应体系;分别研究了变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳两种AFLP扩增产物检测方法,比较了两种不同的毛细管电泳检测数据分析方法对分析结果的影响;对O.oeni AFLP分析的选择性扩增引物进行了筛选。研究结果表明:以Hind...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：104 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 MLF研究的历史
1.2 MLF对葡萄酒质量的影响
1.2.1 对葡萄酒质量的促进作用
1.2.2 可能对葡萄酒产生的危害
1.3 葡萄酒酿造过程中的乳酸菌
1.4 MLB生长的影响因素
1.4.1 葡萄酒p H对MLB生长的影响
1.4.2 葡萄酒中酒精含量对MLB生长的影响
1.4.3 葡萄酒中二氧化硫含量对MLB生长的影响
1.4.4 温度对葡萄酒中MLB生长的影响
1.4.5 葡萄酒中酵母对MLB生长的影响
1.5 其它乳酸菌MLF发酵剂的研究进展
1.6 葡萄酒中细菌的分类鉴定
1.6.1 葡萄酒中细菌种的鉴定
1.6.2 葡萄酒中细菌菌株水平的鉴定方法
1.6.3 葡萄酒微生态中细菌的鉴定
1.7 研究的目的、意义及研究的主要内容
1.7.1 研究的主要目的和意义
1.7.2 研究的主要内容
1.8 研究的技术路线
第二章 O. oeni AFLP分析方法的建立及中国葡萄酒产区O. oeni种质资源遗传多样性分析
2.1 前言
2.2 材料、试剂、仪器设备
2.2.1 供试菌株
2.2.2 培养基
2.2.3 试剂
2.2.4 仪器设备
2.3 试验方法
2.3.1 O. oeni的培养
2.3.2 O. oeni DNA的提取
2.3.3 双酶切反应体系的建立
2.3.4 酶切连接产物的预扩增
2.3.5 选择性扩增
2.3.6 PCR选择性扩增引物的筛选
2.3.7 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.3.8 数据分析
2.4 结果与分析
2.4.1 提取的O. oeni基因组DNA质量的检测
2.4.2 O. oeni基因组DNA酶切连接产物的预扩增
2.4.3 选择性扩增
2.4.4 O. oeni AFLP引物组合的筛选
2.4.5 中国葡萄酒产区分离的O. oeni的AFLP分析
2.5 讨论
第三章 澳大利亚南澳地区高潜在酒精度葡萄原料的发酵及自然MLF过程中细菌的分离鉴定
3.1 前言
3.2 材料、试剂、仪器设备
3.2.1 材料
3.2.2 酒样
3.2.3 试剂
3.2.4 设备
3.3 方法
3.3.1 歌海娜（Grenache）葡萄酒的发酵试验
3.3.2 苹果酸的测定
3.3.3 细菌的分离
3.3.4 细菌的初步筛选
3.3.5 细菌DNA的提取
3.3.6 细菌的 16S r RNA序列分析
3.3.7 细菌的种特异性PCR鉴定（Species-specific PCR）
3.4 结果与分析
3.4.1 歌海娜葡萄酒的发酵结果
3.4.2 细菌菌株的分离纯化
3.4.3 细菌的 16S r RNA序列分析
3.4.4 细菌的种特异性PCR鉴定（Species-specific PCR）
3.5 讨论
第四章 澳大利亚南澳地区歌海娜葡萄酒自然MLF过程中分离O. oeni菌株的AFLP分析
4.1 前言
4.2 材料
4.2.1 供试菌株
4.2.2 培养基
4.2.3 试剂
4.2.4 设备
4.3 方法
4.3.1 DNA提取
4.3.2 菌株基因组DNA的双酶切连接反应体系
4.3.3 酶切连接产物的预扩增
4.3.4 选择性扩增
4.3.5 扩增产物的毛细管电泳检测
4.3.6 数据分析
4.3.7 AFLP的重复性试验
4.3.8 O.oeni 选择性扩增引物组合的筛选
4.4 结果与分析
4.4.1 两种基因组DNA提取方法提取效果的比较
4.4.2 分离菌株基因组酶切连接产物的预扩增
4.4.3 选择性扩增
4.4.4 AFLP的重复性试验
4.4.5 选择性扩增引物的筛选
4.4.6 巴罗莎谷产区歌海娜葡萄酒中分离的104株O. oeni的AFLP分析
4.5 讨论
第五章 分离乳酸细菌的流式细胞仪快速计数方法的探讨和耐酒精分析
5.1 前言
5.2 材料、试剂、仪器设备
5.2.1 供试菌株
5.2.2 试剂
5.2.3 培养基
5.2.4 仪器设备
5.3 方法
5.3.1 细菌的培养和计数
5.3.2 分离细菌在MRS-AJ培养基中的生长曲线
5.3.3 分离细菌的FCM快速计数探讨
5.3.4 分离细菌的耐酒精分析
5.3.5 数据处理
5.4 结果与分析
5.4.1 细菌在MRS-AJ培养基中的生长曲线
5.4.2 O. oeni的两种细胞计数方法比较
5.4.3 L. hilgardii的两种细胞计数方法比较
5.4.4 O. oeni在含高酒精浓度的MRS-AJ培养基中的生长情况
5.4.5 L. hilgardii在含高酒精浓度的MRS-AJ培养基中的生长情况
5.5 讨论
第六章 结论、创新点和展望
6.1 结论
6.2 研究的创新点
6.3 展望
参考文献
缩略词
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]酒明串珠菌31DH酿酒特性的研究[J]. 张春晖,李华,夏霜梅. 微生物学通报. 1997(01)
[2]关于乳酸与乳酸菌（下）[J]. 周恒刚. 酿酒科技. 1995(06)
[3]关于乳酸与乳酸菌（上）[J]. 周恒刚. 酿酒科技. 1995(05)
[4]葡萄酒中苹果酸—乳酸发酵的研究概况和应用[J]. 安丹玫. 食品与发酵工业. 1988(04)
博士论文
[1]毛细管电泳激光诱导荧光检测方法及应用研究[D]. 余长柱.中国科学技术大学 2008
[2]中国优良酒类酒球菌（Oenococcus oeni）的分离筛选及苹果酸—乳酸发酵研究[D]. 张春晖.西北农林科技大学 2001
硕士论文
[1]中国葡萄酒主产区酒酒球菌的鉴定及SE-AFLP分析[D]. 金刚.西北农林科技大学 2010
本文编号：3478056
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：104 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
1.1 MLF研究的历史
1.2 MLF对葡萄酒质量的影响
1.2.1 对葡萄酒质量的促进作用
1.2.2 可能对葡萄酒产生的危害
1.3 葡萄酒酿造过程中的乳酸菌
1.4 MLB生长的影响因素
1.4.1 葡萄酒p H对MLB生长的影响
1.4.2 葡萄酒中酒精含量对MLB生长的影响
1.4.3 葡萄酒中二氧化硫含量对MLB生长的影响
1.4.4 温度对葡萄酒中MLB生长的影响
1.4.5 葡萄酒中酵母对MLB生长的影响
1.5 其它乳酸菌MLF发酵剂的研究进展
1.6 葡萄酒中细菌的分类鉴定
1.6.1 葡萄酒中细菌种的鉴定
1.6.2 葡萄酒中细菌菌株水平的鉴定方法
1.6.3 葡萄酒微生态中细菌的鉴定
1.7 研究的目的、意义及研究的主要内容
1.7.1 研究的主要目的和意义
1.7.2 研究的主要内容
1.8 研究的技术路线
第二章 O. oeni AFLP分析方法的建立及中国葡萄酒产区O. oeni种质资源遗传多样性分析
2.1 前言
2.2 材料、试剂、仪器设备
2.2.1 供试菌株
2.2.2 培养基
2.2.3 试剂
2.2.4 仪器设备
2.3 试验方法
2.3.1 O. oeni的培养
2.3.2 O. oeni DNA的提取
2.3.3 双酶切反应体系的建立
2.3.4 酶切连接产物的预扩增
2.3.5 选择性扩增
2.3.6 PCR选择性扩增引物的筛选
2.3.7 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.3.8 数据分析
2.4 结果与分析
2.4.1 提取的O. oeni基因组DNA质量的检测
2.4.2 O. oeni基因组DNA酶切连接产物的预扩增
2.4.3 选择性扩增
2.4.4 O. oeni AFLP引物组合的筛选
2.4.5 中国葡萄酒产区分离的O. oeni的AFLP分析
2.5 讨论
第三章 澳大利亚南澳地区高潜在酒精度葡萄原料的发酵及自然MLF过程中细菌的分离鉴定
3.1 前言
3.2 材料、试剂、仪器设备
3.2.1 材料
3.2.2 酒样
3.2.3 试剂
3.2.4 设备
3.3 方法
3.3.1 歌海娜（Grenache）葡萄酒的发酵试验
3.3.2 苹果酸的测定
3.3.3 细菌的分离
3.3.4 细菌的初步筛选
3.3.5 细菌DNA的提取
3.3.6 细菌的 16S r RNA序列分析
3.3.7 细菌的种特异性PCR鉴定（Species-specific PCR）
3.4 结果与分析
3.4.1 歌海娜葡萄酒的发酵结果
3.4.2 细菌菌株的分离纯化
3.4.3 细菌的 16S r RNA序列分析
3.4.4 细菌的种特异性PCR鉴定（Species-specific PCR）
3.5 讨论
第四章 澳大利亚南澳地区歌海娜葡萄酒自然MLF过程中分离O. oeni菌株的AFLP分析
4.1 前言
4.2 材料
4.2.1 供试菌株
4.2.2 培养基
4.2.3 试剂
4.2.4 设备
4.3 方法
4.3.1 DNA提取
4.3.2 菌株基因组DNA的双酶切连接反应体系
4.3.3 酶切连接产物的预扩增
4.3.4 选择性扩增
4.3.5 扩增产物的毛细管电泳检测
4.3.6 数据分析
4.3.7 AFLP的重复性试验
4.3.8 O.oeni 选择性扩增引物组合的筛选
4.4 结果与分析
4.4.1 两种基因组DNA提取方法提取效果的比较
4.4.2 分离菌株基因组酶切连接产物的预扩增
4.4.3 选择性扩增
4.4.4 AFLP的重复性试验
4.4.5 选择性扩增引物的筛选
4.4.6 巴罗莎谷产区歌海娜葡萄酒中分离的104株O. oeni的AFLP分析
4.5 讨论
第五章 分离乳酸细菌的流式细胞仪快速计数方法的探讨和耐酒精分析
5.1 前言
5.2 材料、试剂、仪器设备
5.2.1 供试菌株
5.2.2 试剂
5.2.3 培养基
5.2.4 仪器设备
5.3 方法
5.3.1 细菌的培养和计数
5.3.2 分离细菌在MRS-AJ培养基中的生长曲线
5.3.3 分离细菌的FCM快速计数探讨
5.3.4 分离细菌的耐酒精分析
5.3.5 数据处理
5.4 结果与分析
5.4.1 细菌在MRS-AJ培养基中的生长曲线
5.4.2 O. oeni的两种细胞计数方法比较
5.4.3 L. hilgardii的两种细胞计数方法比较
5.4.4 O. oeni在含高酒精浓度的MRS-AJ培养基中的生长情况
5.4.5 L. hilgardii在含高酒精浓度的MRS-AJ培养基中的生长情况
5.5 讨论
第六章 结论、创新点和展望
6.1 结论
6.2 研究的创新点
6.3 展望
参考文献
缩略词
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]酒明串珠菌31DH酿酒特性的研究[J]. 张春晖,李华,夏霜梅. 微生物学通报. 1997(01)
[2]关于乳酸与乳酸菌（下）[J]. 周恒刚. 酿酒科技. 1995(06)
[3]关于乳酸与乳酸菌（上）[J]. 周恒刚. 酿酒科技. 1995(05)
[4]葡萄酒中苹果酸—乳酸发酵的研究概况和应用[J]. 安丹玫. 食品与发酵工业. 1988(04)
博士论文
[1]毛细管电泳激光诱导荧光检测方法及应用研究[D]. 余长柱.中国科学技术大学 2008
[2]中国优良酒类酒球菌（Oenococcus oeni）的分离筛选及苹果酸—乳酸发酵研究[D]. 张春晖.西北农林科技大学 2001
硕士论文
[1]中国葡萄酒主产区酒酒球菌的鉴定及SE-AFLP分析[D]. 金刚.西北农林科技大学 2010
本文编号：3478056
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