植物细胞壁结构特征与生物质高效利用分子机理研究

发布时间：2017-10-10 08:05

  本文关键词：植物细胞壁结构特征与生物质高效利用分子机理研究

  更多相关文章： 芒草 水稻 细胞壁 生物质降解 抗倒伏 纤维素结晶度 纤维素聚合度 木聚糖 阿拉伯糖 半纤维素分支度 酸碱预处理 OsCESA9 OsGH9 OsXAT

【摘要】：植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素、木质素和壁蛋白等组成。细胞壁不仅决定植物细胞大小、形状和机械强度,而且对植物形态发生、细胞生长和分化、细胞信号传导、水分运输以及应对外界刺激反应皆起重要作用。基于细胞壁是地球上最丰富的可再生能源物质,全球已开始大力推动木质纤维乙醇的发展,并相继开展了植物细胞壁的基础和应用研究。木质纤维乙醇生产主要包括三个步骤:(1)预处理解离细胞壁聚合物;(2)纤维素酶解释放可溶性糖;(3)酵母发酵可溶性糖产乙醇。然而,由于植物细胞壁已进化出复杂的网络结构和化学机制用于抵抗微生物和动物的分解,故细胞壁的抗降解屏障从本质上决定了木质纤维乙醇成本高、效率低和第二次环境污染。初步研究表明,影响细胞壁高效降解及转化的主要因素包括:(1)细胞壁中半纤维素和木质素紧密包裹纤维素,使纤维素酶可及性低;(2)天然纤维素结晶度高,其酶解效率低;(3)细胞壁降解产生抑制物多,影响乙醇发酵等。因此,解析细胞壁结构,鉴定出提高生物质降解效率的关键细胞壁结构因子具有重要科学意义和实际应用价值。然而,遗传改良作物细胞壁结构不仅需要提高秸秆生物质产量和降解效率,同时还需保证粮食产量与品质。基于以上科学问题,本论文将从生物质降解转化、能源植物选育、生物质合成机理三个层面分别进行研究和讨论。其主要结果如下:第一章(生物质降解转化):利用已收集到的大群体芒草材料,通过系统生物学分析,鉴定了在各种物化预处理条件下,影响生物质酶解的细胞壁关键结构因子,即芒草半纤维素分支度(Ara/Xyl)显著降低纤维素结晶度(Cr I),提高生物质产糖效率。第二章(能源植物选育):利用系统生物学方法,分析36份水稻细胞壁突变体材料,揭示水稻半纤维素阿拉伯糖(Ara)含量负调控纤维素结晶度,从而正调控水稻秸秆生物质降解效率和植物抗倒伏能力,并从中鉴定出2份优质能源水稻材料,即植物生长发育正常、种子产量稳定、生物质降解效率大幅提高。第三章(生物质合成机理):利用正向遗传学方法,筛选并鉴定了一个表型正常、生物质降解效率显著提高的细胞壁突变体材料Osfc16。研究表明:该突变体次生纤维素合酶Os CESA9保守位点突变,降低了纤维素合酶复合体(CSC)稳定性,缩短CSC运行活性,并通过蛋白酶体途径使复合体蛋白快速降解,从而合成低聚合度(low-DP)纤维素,直接降低纤维素结晶度(Cr I),导致植物抗倒伏能力和生物质降解效率显著提高。全基因组表达芯片分析进一步表明:Os CESA9保守位点突变后,该突变体在全基因组内启动了自我调节机制,以维持突变体植物正常生长。
【关键词】：芒草 水稻 细胞壁 生物质降解 抗倒伏 纤维素结晶度 纤维素聚合度 木聚糖 阿拉伯糖 半纤维素分支度 酸碱预处理 OsCESA9 OsGH9 OsXAT
【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S216.2;Q942
【目录】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 缩略词表12-14
• 文献综述14-60
• 1.1 生物质能14-16
• 1.1.1 生物质能概念14
• 1.1.2 能源植物和能源作物14-15
• 1.1.3 纤维素乙醇的发展15-16
• 1.2 植物细胞壁结构16-28
• 1.2.1 纤维素结构17-20
• 1.2.2 半纤维素结构20-23
• 1.2.3 木质素结构23-24
• 1.2.4 植物细胞壁组分之间的互作24-28
• 1.3 植物细胞壁生物合成28-51
• 1.3.1 纤维素生物合成28-46
• 1.3.2 半纤维素生物合成46-50
• 1.3.3 木质素合成50-51
• 1.4 生物质降解51-55
• 1.4.1 生物质预处理51-52
• 1.4.2 纤维素与生物质降解52-53
• 1.4.3 半纤维素与生物质降解53-54
• 1.4.4 木质素与生物质降解54-55
• 1.5 细胞壁与植物抗倒伏55-59
• 1.5.1 水稻倒伏鉴定和评价56
• 1.5.2 植物茎秆生理形态与抗倒伏关系56-57
• 1.5.3 细胞壁结构与抗倒伏57-58
• 1.5.4 水稻细胞壁与抗倒伏研究展望58-59
• 1.6 本研究目的与意义59-60
• 第一章 芒草半纤维素结构与生物质酶解产糖60-78
• 摘要60-61
• Abstract61-63
• 2 实验材料和方法63-69
• 2.1 实验材料63
• 2.2 主要仪器与试剂63
• 2.3 试验方法63-69
• 2.3.1 细胞壁多糖成分提取和测定63-64
• 2.3.2 木质素含量测定64-65
• 2.3.3 比色法测定六碳糖和五碳糖65-66
• 2.3.4 GC-MS测定半纤维素单糖66
• 2.3.5 纤维素结晶度测定66
• 2.3.6 生物质稀酸预处理及酶解66-67
• 2.3.7 生物质稀碱预处理及酶解67
• 2.3.8 粗纤维素组分单酶酶解提取和测定67-68
• 2.3.9 扫描电镜观察68
• 2.3.10 数据统计分析68-69
• 3 结果分析69-76
• 3.1 芒草细胞壁组分及降解效率多样性69-70
• 3.2 芒草半纤维素与降解效率相关性70-73
• 3.3 木质纤维素酶解机理73-76
• 3.4 半纤维素组成与纤维素结晶度相关性76
• 4 讨论76-77
• 5 论文数据说明77-78
• 第二章 水稻细胞壁结构与植物抗倒伏特性及生物质酶解产糖效率78-104
• 摘要78-80
• Abstract80-82
• 2 实验材料与方法82-89
• 2.1 大田水稻材料82
• 2.2 主要仪器与试剂82
• 2.3 实验方法82-89
• 2.3.1 细胞壁多糖成分提取和测定82-83
• 2.3.2 木质素含量测定83
• 2.3.3 HPLC测定木质素单体83
• 2.3.4 比色法测定六碳糖和五碳糖83
• 2.3.5 GC-MS测定半纤维素单糖83-84
• 2.3.6 纤维素结晶度测定84
• 2.3.7 生物质稀酸稀碱预处理及酶解84
• 2.3.8 扫描电镜观察84
• 2.3.9 水稻生物学性状考察84-85
• 2.3.10 细胞壁相关基因表达分析85-89
• 2.3.11 数据统计分析89
• 3 结果分析89-100
• 3.1 水稻突变体细胞壁和降解效率及倒伏指数的变异性89-91
• 3.2 水稻突变体细胞壁组分与降解效率和倒伏指数关联分析91-92
• 3.3 细胞壁结构与降解效率和倒伏指数相关性92-94
• 3.4 细胞壁三大组分间关联分析94-95
• 3.5 突变体Osfc17和Osfc30鉴定95-97
• 3.6 茎秆组织降解原位（in situ）和体外（in vitro）扫描电镜观察97-99
• 3.7 突变体细胞壁相关基因表达分析99-100
• 4 讨论100-103
• 4.1 水稻细胞壁突变体大规模筛选100-101
• 4.2 水稻细胞壁关键结构因子作用机理模型101-102
• 4.3 细胞壁关键结构因子遗传改良102-103
• 4.4 快速检测水稻生物质降解效率新方法103
• 5.论文数据说明103-104
• 第三章 Osfc16特异突变体生物学特性与生物质酶解产糖104-150
• 摘要104-106
• Abstract106-109
• 2 实验材料、仪器与方法109-127
• 2.1 材料准备109
• 2.2 主要仪器及试剂109
• 2.3 实验方法109-127
• 2.3.1 水稻材料收集及测定109-110
• 2.3.2 植株机械强度测定110
• 2.3.3 Osfc16突变体基因图位克隆110-112
• 2.3.4 水稻细胞壁组分提取及测定112
• 2.3.5 细胞壁木质素总量及单体含量测定112
• 2.3.6 纤维素结晶度（Cr I）测定112-113
• 2.3.7 纤维素聚合度（DP）测定113-114
• 2.3.8 生物质稀酸稀碱预处理及酶解114
• 2.3.9 乙醇发酵及测定114
• 2.3.10 扫描电镜观察114-115
• 2.3.11 透射电镜观察115
• 2.3.12 荧光增白剂（Cacoflour）和除草剂CGA处理水稻幼苗115
• 2.3.13 水稻总膜蛋白的提取115-116
• 2.3.14 纤维素体外合成116-117
• 2.3.15 免疫共沉淀（Co-IP）117-118
• 2.3.16 SDS-PAGE胶制备118-119
• 2.3.17 Western Blot119-120
• 2.3.18 水稻芯片表达分析120-121
• 2.3.19 Osfc16转基因互补载体构建121-125
• 2.3.20 水稻成熟胚愈伤组织的诱导、分化、生根及移栽方法125-127
• 3 结果分析127-148
• 3.1 Osfc16和Osfc80突变体鉴定127-131
• 3.2 Osfc16和Osfc80表型观测131-133
• 3.3 Osfc16细胞壁结构分析133-135
• 3.4 Osfc16纤维素结晶度和聚合度测定135-136
• 3.5 Osfc16生物质降解效率及乙醇产率提高136-138
• 3.6 Osfc16纤维素合酶复合体检测138-141
• 3.7 Osfc16全基因组芯片表达分析141-148
• 4 讨论148-149
• 5.论文数据说明149-150
• 全文总结与展望150-152
• 参考文献152-184
• 附录184-201
• 附录1 常用试剂配方184-200
• 附录2 个人简介200-201
• 攻读博士期间发表的论文201-203
• 致谢203-205

【参考文献】

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本文编号：1005228