青蒿琥酯与双氢青蒿素试纸条的制备及油菜素内酯基因工程抗体的初步研究

发布时间：2016-12-17 07:11

  本文关键词：青蒿琥酯与双氢青蒿素试纸条的制备及油菜素内酯基因工程抗体的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

《中国农业大学》 2015年

青蒿琥酯与双氢青蒿素试纸条的制备及油菜素内酯基因工程抗体的初步研究

何丽珊  

【摘要】：青蒿素类药物综合疗法(Artemisinin-based combination therapy, ACT)是当今疟疾治疗的最有效手段。然而假冒、伪劣青蒿素类药物的泛滥却严重地影响着疟疾的治疗效果。目前,大多数对青蒿素类药物进行检测分析的方法均需要昂贵的检测仪器和复杂的操作流程。还没有一种基于免疫学技术、能够用于青蒿素类抗疟药物质量评价的现场快速诊断方法。油菜素内酯是一种重要的植物激素,可促进细胞伸长和分裂、增强植株的抗逆性和提高作物的产量。国外已有将基因工程抗体应用于植物激素生理活性及其作用机理研究的报道,主要通过将激素的抗体基因转入植物中,表达出该激素的抗体,实现激素的免疫调节,从而达到对该激素进行研究的目的。采用基因工程抗体技术研究植物激素的生理功能及其作用机理是一个重要的有效手段,但目前还没有关于油菜素内酯的基因工程抗体被报道。 本研究分别制备了青蒿琥酯和油菜素内酯的单克隆抗体,并以单克隆抗体为材料对免疫学技术(胶体金免疫检测试纸条和基因工程抗体技术)进行了研究。主要结果如下： (1)制备了青蒿琥酯单克隆抗体3D82G7,抗体效价为3.2x104,其对青蒿素、双氢青蒿素及蒿甲醚的交叉反应率分别为22%、70%和0.3%： (2)制备了油菜素内酯单克隆抗体4D81C11,抗体效价为2～4×103,抗体为IgG1类,与IAA、GAS、ABA、ZR、iPA等其他激素均无交叉反应。用其建立了油菜素内酯的icELISA, IC50为0.9ng/mL,检测范围在0.26ng/mL～3.83ng/mL。对所制备的油菜素内酯单抗进行了十字花科材料(小白菜和油菜)的添加回收实验,发现对提取样本进行5-10倍稀释可基本排除基质背景干扰,添加回收率均在90-120%范围内； (3)以筛选到的青蒿琥酯单克隆抗体为基础,制备了胶体金免疫检测试纸条,该试纸条对青蒿琥酯、青蒿素和双氢青蒿素的判别浓度分别为100-200ng/mL,2000-5000ng/mL和200-500ng/mLo用标准品奎宁、磷酸氯喹、磷酸伯氨喹、乙胺嘧啶、本芴醇、阿莫地喹、磷酸哌喹及磷酸咯萘啶分别制备的5000ng/mL检测液均不能使试纸条上的检测线抑制；不同温度条件下贮存的试纸条的检测灵敏度会随贮存时间的延长而下降； (4)应用试纸条对青蒿素类抗疟疾药物及其原料药的有效成分进行半定量检测,所得结果与高效液相色谱法(HPLC)的一致性好； (5)对油菜素内酯基因工程抗体进行了初步研究。从分泌油菜素内酯单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取了总RNA,反转录得到了cDNA。以cDNA为模板克隆了抗体的VH和VL基因。

【关键词】：
【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：Q946
【目录】：

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