埃博拉病毒新型反向遗传学系统的建立、分析及应用

发布时间：2021-02-07 23:06

　　埃博拉病毒（EBOV）是一种高致病性病原,可导致人类和其他灵长类高致死性的出血热。历史上最大的埃博拉暴发是2013到2016年发生在西非的流行,造成了将近30,000人感染,超过11,000人死亡。从2018年开始在刚果民主共和国（Democratic Republic of Congo、DRC）蔓延的疫情则导致了比西非暴发更高的病死率,尽管有超过30万人接种了疫苗,但感染人数仍已超过3,400人,死亡病例超过2,200例。面对大型暴发的接连出现以及特效药物的缺失,人们亟需对埃博拉病毒进行更多更深入的研究。然而,埃博拉病毒的研究必需在生物安全四级（Biosafety Level 4、BSL-4）实验室中进行,导致研究进度受到了严重限制。为了能在四级实验室之外进行研究,科学家建立了多种反向遗传学系统来模拟病毒生活周期的不同步骤,其中包括迷你基因组（Minigenome、MG）系统以及能够被转录和复制的病毒样颗粒（transcription-and replication-competent virus-like particle、trVLP）系统。但是,现有的反向遗传学系统都依赖于多种质... 

【文章来源】：中国科学院大学(中国科学院上海巴斯德研究所)上海市

【文章页数】：100 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．２?ＥＢＯＶ反向遗传学系统??病續全长ＲＮＡ以ｃＤＮＡ质粒形式提供（ｒｇＺ），本身没有感染性，可以在生物安全１级或??２级实验觀中操作

图２．１Ａ、Ｂ）

＞＼Ｈｕｈ７－４Ｒ?－??Ｂ?ｃ?丄??１３０ｋＤａ－？?ＮＰ?＾??３４ｋＤａＪ￣?ＶＰ３５?￣￣—??３４ｋＤａ－?ＶＰ３０?５００ｂｐ－?？??４３ｋＤａ－＿＾＾＾?Ａｃｔｉｎ??Ｄ?Ｅ??｝：｜?广?ｓ：：广＼??３????３－Ｕ￣．￣，￣，￣，￣，￣，￣ｎ－??２?４?６?８１０１２?２４?４８７２?９６?１?２?３?４?７?１１?１５?１９??Ｈｏｕｒｓ?ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ?Ｄａｙｓ?ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ??图２．２?Ｈｕｈ７－４Ｐ细胞可以髙效支持ＭＧ的复制和转录??ＣＡ）制备能表达ＮＰ、ＶＰ３５、ＶＰ３０以及Ｌ蛋白的Ｈｕｈ７－４Ｐ细胞的流程屈。ＣＢ）通过免疫印??迹裣测ＮＰ、ＶＰ３５以及ＶＰ３０蛋白的表逢；義ｙ?（Ｃ）通过戾转：录ＰＣＲ检测Ｌ蛋白．ｍＲＮＡ的奢达??水平ｓ?ＣＤ、Ｅ）转染了ＭＧｖＲＮＡ的Ｈｕｈ７－４Ｐ细胞橋参上辨中的ＧＬｕｃ活ｆ生，??Ｆｉｇｕｒｅ?２．２?Ｈｕｈ７－４Ｐ?ｃｅｌｌｓ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ?ｓｕｐｐｏｒｔ?ｍｉｎｉｇｅｎｏｍｅ?ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ａｎｄ?ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ??（Ａ）?Ｔｈｅ?ｐｒｏｔｏｃｏｌ?ｔｏ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ?Ｈｕｈ７－４Ｐ?ｃｅｌｌｓ?ｓｔａｂｌｙ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ?ＮＰ，?ＶＰ３５，?ＶＰ３０，?ａｎｄ?Ｌ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ．??（Ｂ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＮＰ，?ＶＰ３５，?ａｎｄ?ＶＰ３０?ｐｒｏｔｅｉｎｓ．?（Ｃ）?ＲＴ－ＰＣＲ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?Ｌ?ｇｅｎｅ??ｍＲＮＡ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．?（Ｄ?ａｎｄ?Ｅ）?ＧＬｕｃ?ａｃｔｉ


本文编号：3022964