p53及其异构体Δ113p53/Δ133p53的功能机制研究和体外染色体免疫共沉淀技术的构建

发布时间：2021-03-02 11:38

　　抑癌基因p53被誉为“基因组卫士”和“分子警察”,是人类癌细胞中突变频率最高的基因。p53可被多种胁迫信号激活,决定细胞的生与死,但p53蛋白到底如何精确调控纷繁复杂的下游信号通路,至今仍是一个未被完全解开的谜题。近年来发现p53存在众多异构体,对这些异构体蛋白功能的研究将有助于揭示p53信号途径调控的谜团。△113p53（斑马鱼）/△133p53（人）是N-端缺失的p53异构体,已有研究证明△113p53/△133p53具有拮抗p53介导的细胞凋亡功能,但其蛋白作用和分子机制并不清楚。本文第一部分工作将探讨△113p53/△133p53拮抗细胞凋亡的分子机制,挖掘△113p53/△133p53新的功能,具体结果如下：1)采用斑马鱼p53抗体Zfp53-N（只能识别全长p53）进行免疫共沉淀,利用另一个斑马鱼p53抗体Zfp53-A7C10（可识别全长p53和△113p53蛋白）检测沉淀蛋白,我们首次证实了内源性p53与△113p53可在DNA损伤条件下互作形成蛋白复合物。进一步构建△113p53蛋白寡聚结构域的单氨基酸突变体,我们找到两个丧失与p53蛋白结合能力的△113p53突变体... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：138 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．１人类全长ｐ５３的基因和蛋白结构??Ａ．５３基因结构简图：Ｂ．５３蛋白功能结构域注释图??

浙江大学博壬论文?第一章前言??迂有少量甲基化（ｍｅ化ｙｌａｔｉｏｎ）、糖基化（ｇｌｙｃｏ巧ｌａｔｉｏｎ）、核糖基化（ＡＤＰ－?ｒｉ－??ｂｏｓｙｌａｔｉｏｎ）、ＮＥＤＤ化（ｎｅｄｄｙｌａｔｉｏｎ）、ＳＭＭＯ化（ｓｆｉＭｏｙｌａｔｉｏｎ）等，进而激活或??者抑制下游不同信号途径基因的表达。??

伤、癌基因激活、有丝分裂器功能障碍、ＤＮＡ复制压力、ＤＮＡ双链损伤、遗??传毒性药物、发育压力、端粒侵蚀、营养缺乏、热激冷激等条件诱导下Ｐ９１，ｐ５３??蛋白会在各种修饰酶的作用下发生各种诸如图１所示的翻译后修饰，一方面解??除了?ＭＤＭ２的抑制，另一方面增强自身的稳定性和活性，蛋白因此被激活且表??达量大大增加，进而选择性的转录激活或抑制下游各个信号通路報基因的表达，??或者直接通过蛋白相互作用的方式调节信号通路的开关，最后通过控制一系列??生理生化过程来决定细胞的命运ＰＷ。其中研究最为清楚的一条信号途径，即ｐ５３??在受到ＤＮＡ损伤药物处理、ｙ射线照射或ＵＶ照射等条件导致ＤＮＡ发生损伤??时，会被ＡＴＭ／ＡＴＲ或者Ｃｈｋｌ／Ｃｈｋ２这两组激晦攝酸化激活，这时如果细胞损??伤程度较小，ｐ５３将会阻滞细胞周期，调节细胞代谢、弥补抗氧化缺陷、进行??ＤＮＡ损伤修复；而如果细胞损伤比较严重


本文编号：3059197