流感病毒NS1蛋白以及SARS冠状病毒N蛋白参与的免疫逃逸机制研究

发布时间：2021-06-22 20:03

　　A型流感病毒（influenza virus A）属于正粘病毒科,流感病毒属;基因组由大小不同的8个独立的单股负链RNA片段组成,其中非结构蛋白1（nonstructural proteinl,NSl）由NS基因编码,NS1蛋白主要有两个结构域,N-末端的RNA结合结构域（RNA binding domain,RBD）参与RNA结合;C-末端的效应结构域（Effect domain,ED）,能够同宿主细胞内多种重要蛋白发生相互作用,是重要的功能结构域。NS1是一种多功能蛋白质,其实现病毒逃逸天然免疫功能主要通过与宿主蛋白相互作用,抑制宿主相应的通路或抗病毒蛋白功能;NS1能同病毒复制中间体RNA结合,阻断宿主识别病原相关分子模式;NS1还具有抑制抗宿主蛋白转录翻译,调节细胞凋亡等诸多功能。病毒与宿主相互作用,共同决定了病毒感染的进程以及宿主的命运。2009年流感病毒是一株重组病毒,由于其发生抗原漂移使人类缺乏免疫力,从而导致病毒大范围传播。2009年大流行流感病毒在传染规律以及致病性和季节性流感以及以往的高致病性甲型流感存在差异,具体表现为感染重症人群主要为青壮年,人群整体致死率较低等... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：79 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
缩略词表
前言
第一部分 流感病毒NS1蛋白参与的免疫应答
    流感病毒
        1.1 A型流感病毒特性及致病机理
        1.2 流感病毒形态结构
        1.3 宿主细胞对流感病毒感染的免疫应答以及病毒参与的免疫逃逸
        1.4 本研究的立题依据以及拟解决的科学问题，研究思路以及研究方法
    材料与方法
        1 材料
            1.1 质粒、菌株、病毒和细胞
            1.2 分子生物学试剂
            1.3 抗体
            1.4 主要实验仪器设备
        2 实验方法
            2.1 重组质粒的构建
            2.2 细胞复苏、传代和冻存
            2.3 细胞的转染
            2.4 免疫沉淀以及免疫印迹
            2.5 免疫荧光
            2.6 荧光素酶活性测定
            2.7 Duo-Link实验
            2.8 新城疫病毒（NDV-GFP）感染实验
                2.8.1 NDV-GFP病毒培养
                2.8.2 NDV-GFP感染实验
                2.8.3 NDV-GFP生物学效应实验
            2.9 病毒增殖与纯化
                2.9.1 流感病毒增殖
                2.9.2 流感病毒细胞感染
            2.10 RNA的提取
            2.11 RT-PCR
                2.11.1 RT反应
                2.11.2 定量PCR扩增以及结果分析
                2.11.3 定量PCR使用引物
            2.12 定点突变
            2.13 siRNA
            2.14 细胞凋亡检测
            2.15 统计学分析
    实验结果
        1. 2009 年大流行流感病毒NS1蛋白分析
            1.1 2009 年流感病毒NS1蛋白进化分析
            1.2 2009 年流感病毒NS1蛋白序列分析
        2. NS1蛋白功能位点筛选
        3. NS1蛋白RIG-I信号通路
        4. NS1与蛋白酶体信号通路
        5. 反向遗传学拯救流感病毒
        6. 位点突变对流感病毒致病性的影响
    讨论
        NS1同源性分析
        NS1蛋白与病毒感染过程
        NS1蛋白与宿主蛋白之间的相互作用
    结论
第二部分 SARS-CoV病毒N蛋白抑制干扰素产生机制的研究
    SARS冠状病毒概述
    结果
        1. N蛋白抑制干扰素产生
        2. N蛋白抑制RIG-I泛素化
        3. N蛋白抑制干扰素下游信号通路的激活
        4. TRIM25对SARS-Co V病毒复制的影响
        5. MERS-Co V N蛋白与TRIM25相互作用
    讨论
    结论
参考文献
附录
个人简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]新甲型H1N1流感病毒的分子遗传进化分析[J]. 赵丽,刘永宏,刘月焕,王凤龙,林健,韩春华,马明,丁玉林,丁旭娜,王金玲,杨龙峰,潘洁,韩婧雯.  病毒学报. 2010(02)
[2]Molecular Advances in Severe Acute Respiratory Syndrome-associated Coronavirus （SARS-CoV）[J]. Raymond Kin Hi Hui,Raymond Tsz Yeung Wong,Chi Wai Yip,Frederick Chi Ching Leung.  Genomics Proteomics & Bioinformatics. 2003(04)



本文编号：3243453