ANP32家族蛋白在A型流感病毒复制及其跨物种传播中的作用机制研究

发布时间：2021-10-27 14:23

　　A型流感病毒可以感染禽类和哺乳动物等多种宿主,亚型多且感染谱广,其跨种间传播往往造成严重危害甚至大流行,因此其复制及跨种传播机制一直是本领域研究热点。流感病毒的RNA聚合酶是病毒在宿主细胞内进行转录与复制的物质基础,在跨物种传播中发挥重要作用,其需借助某些宿主蛋白来完成病毒的复制过程。目前关于流感病毒聚合酶对宿主的依赖机制及跨物种适应机制仍知之甚少。已有研究发现禽源酸性核磷蛋白32（ANP32）家族蛋白成员ANP32A与禽流感病毒聚合酶的种属特异性相关,但ANP32A及其家族其他蛋白与流感病毒聚合酶相互作用及功能并不清楚。本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了一系列聚合酶相关宿主蛋白的HEK293T敲除细胞系,转染H1N1亚型流感A/Sichuan/01/2009（H1N1SC09）聚合酶报告系统,检测发现人ANP32A（huANP32A）或ANP32B（huANP32B）单独敲除时均不影响聚合酶活性。由于ANP32A与ANP32B为结构类似的同一家族蛋白,因此推测二者可能功能类似,单独敲除一个蛋白,另一个蛋白仍会发挥作用,因此该团队构建了 ANP32A&B双敲除的细胞系（... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：79 页

【学位级别】：博士

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摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 A型流感病毒
        1.1.1 A型流感病毒复制周期
        1.1.2 A型流感病毒跨物种传播
    1.2 vRNP
        1.2.1 病毒基因组转录即vRNA→mRNA
        1.2.2 病毒基因组复制即vRNA→cRNA→vRNA
    1.3 ANP32蛋白研究进展
        1.3.1 ANP32蛋白概述
        1.3.2 ANP32蛋白与病毒复制研究进展
    1.4 本研究的目的与意义
第2章 ANP32家族蛋白在A型流感病毒复制及其跨物种传播中的作用机制
    2.1 材料与试剂
        2.1.1 细胞、病毒和质粒
        2.1.2 主要试剂
    2.2 研究方法
        2.2.1 重组质粒构建
        2.2.2 敲除细胞系构建
        2.2.3 双荧光报告系统检测流感病毒聚合酶活性
        2.2.4 qRT-PCR检测流感病毒RNA的合成
        2.2.5 A型流感病毒拯救及病毒感染实验
        2.2.6 免疫共沉淀实验
        2.2.7 双抗夹心ELISA检测病毒包装
    2.3 研究结果
        2.3.1 人源ANP32A&B是支持人源A型流感病毒聚合酶活性的决定性宿主因子
        2.3.2 ANP32A&B调控流感病毒的RNA合成、vRNP组装及病毒包装
        2.3.3 不同物种ANP32蛋白对不同物种流感病毒的支持作用
        2.3.4 ANP32蛋白对流感病毒发挥支持作用的关键氨基酸位点的确定
        2.3.5 哺乳动物ANP32A蛋白跨种支持禽源聚合酶的研究
    2.4 讨论
第3章 全文结论
致谢
参考文献
作者简介



本文编号：3461785