拟南芥和油菜磷脂酶基因pPLAIIIδ的功能分析

发布时间：2021-11-24 16:10

　　前人研究表明,编码磷脂酶A亚家族ⅠⅡ（pPLAⅢs）的基因影响生长素响应。但是,这些基因如何影响植物和细胞形态建成并不清楚。为探明pPLAⅢδ在细胞形态发生及器官大小形成中的作用,及其与生长素调节的关系,我们利用拟南芥pPLAⅢδT-DNA突变体以及拟南芥和油菜过表达植株,系统研究了pPLAIIl6基因表达变化对植物形态学、细胞学、代谢产物及其它内源基因表达的影响。主要研究结果如下：1、GUS染色结果和基因表达分析显示pPLAⅢδ在多器官中表达,但是,在根和幼嫩组织中表达水平相对较高。2、蛋白质的亚细胞定位分析发现pPLAⅢδ定位于细胞膜上。3.pPLAⅢδ过表达植株表现出矮小、节间缩短增粗、叶片缩小变厚等表型,表明超量表达pPLAⅢδ能够抑制植株器官的纵向生长、促进横向生长。4、与野生型相比,pPLAⅢδT-DNA插入突变体的下胚轴细胞显著增长,而pPLAⅢδ过表达植物的下胚轴细胞变宽,叶片表皮的细胞极性降低。表明pPLAⅢδ参与细胞的形态发生。5、pPLAⅢδT-DNA插入突变体的下胚轴表型相似于乙烯的“三重反应”。表达分析发现,在两个过表达株系中参与乙烯生物合成途径的关键基因AC... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：88 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩写词表
1 前言
    1.1 磷脂酶概述
        1.1.1 磷脂酶家族
        1.1.2 磷脂酶水解产物的功能
        1.1.3 磷脂酶的生理功能
    1.2 植物激素概述
        1.2.1 植物激素的种类
            1.2.1.1 生长素
            1.2.1.2 乙烯
            1.2.1.3 细胞分裂素
            1.2.1.4 脱落酸
            1.2.1.5 赤霉素
            1.2.1.6 其它激素
        1.2.2 植物激素的调节
        1.2.3 不同激素间的相互影响
    1.3 植物细胞形态建成概述
    1.4 磷脂酶和激素参与细胞的形态调控
    1.5 本研究的目的和意义
2 材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 生化试剂
    2.2 试验方法
        2.2.1 T-DNA纯合突变体的鉴定
        2.2.2 遗传表达载体的构建
        2.2.3 农杆菌介导的遗传转化与阳性植株的筛选
            2.2.3.1 农杆菌介导的拟南芥遗传转化
            2.2.3.2 转基因种子筛选
        2.2.4 植物材料的种植
        2.2.5 RNA的抽提和反转录
            2.2.5.1 RNA的抽提
            2.2.5.2 反转录
        2.2.6 表达分析
        2.2.7 植株和器官的形态测量
        2.2.8 细胞学的观察
            2.2.8.1 下胚轴和叶片的表皮细胞
            2.2.8.2 下胚轴和叶片横切
        2.2.9 引物与测序分析
        2.2.10 数据分析
3 结果与分析
    3.1 pPLAⅢδ的表达模式分析
    3.2 pPLAⅢδ的亚细胞定位
    3.3 pPLAⅢδ对植株生长和器官大小的影响
    3.4 pPLAⅢδ影响下胚轴和表皮毛的细胞形态
    3.5 pPLAⅢδ影响叶片表皮细胞的极性
    3.6 pPLAⅢδ影响乙烯生物合成相关基因的表达
    3.7 pPLAⅢδ影响植株内源生长素的分布
    3.8 pPLAⅢδ参与生长素的响应
    3.9 pPLAⅢδ突变体中参与生长素响应和细胞形态建成相关基因的表达变化
    3.10 pPLAⅢδ表达变化显著改变PA含量
    3.11 油菜pPLAⅢδ同源基因的克隆及序列比较
4 讨论
    4.1 pPLAⅢδ的表达改变导致不同的生长素响应表型
    4.2 pPLAⅢδ参与生长素依赖的极性细胞生长
    4.3 pPLAⅢδ参与植物生长素响应的调节
    4.4 pPLAⅢδ通过调节PA响应生长素刺激
参考文献
附录
    附录1
    附录2
    附录3 主要试剂的配制
    附录4 载体构建程序
    附录5 作者在读期间发表的论文
致谢



本文编号：3516321