OGT1催化的NSL3 Thr755位点的O-GlcNAc糖基化修饰对组蛋白乙酰基转移酶复合物MOF/NSL全酶活性的调

发布时间：2022-02-12 22:00

　　基于经典遗传学的概念而来,表观遗传学的含义随着研究者们对真核生物基因表达调控分子机制研究的深入不断地更新,目前的通行定义即研究在有丝分裂和减数分裂的过程中,非基因组DNA序列突变引起的生物体基因功能及表型上的可继承性的改变。表观遗传学调控的方式主要有染色质重塑,DNA甲基化,组蛋白修饰以及非编码RNA的作用。本文主要讨论组蛋白乙酰基转移酶MOF/NSL复合物全酶活性受到其中亚基NSL3 Thr755位点的O-GlcNAc糖基化修饰调控的分子机制。MOF（males absent on the first）/NSL组蛋白乙酰基转移酶复合物具有十分广泛的底物特异性,除了可以将组蛋白H4的K16位点乙酰化,还可以在体外重组染色质中乙酰化组蛋白H4的K5及K8位点,且非组蛋白p53也是它的底物之一。MOF/NSL复合物由9个亚基组成,其中包括O-连接的β-N-乙酰氨基葡萄糖（O-GlcNAc）转移酶（同种型1）（OGT1）和NSL3。OGT是自然界中唯一存在的O-GlcNAc糖基转移酶,催化对底物分子的丝氨酸或苏氨酸残基进行O-GlcNAc糖基化修饰的反应。OGT和催化从底物分子的丝氨酸或苏氨... 

【文章来源】：吉林大学吉林省211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：109 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩略词表
第一章 绪论
    1.1 表观遗传学概述
    1.2 表观遗传学的分子调控机制
        1.2.1 DNA的甲基化修饰
        1.2.2 组蛋白修饰
        1.2.3 染色质重塑
        1.2.4 非编码RNA的调控
    1.3 组蛋白乙酰化与MOF/NSL复合物
    1.4 OGT与 O-GlcNAc糖基化修饰
        1.4.1 OGT的结构与细胞内存在形式
        1.4.2 OGT与 OGA
        1.4.3 OGT对非组蛋白底物的修饰与生物学功能
        1.4.4 OGT对组蛋白底物的修饰与生物学功能
        1.4.5 OGT与疾病的关系
    1.5 泛素化修饰与蛋白酶体水解
    1.6 NSL3 研究进展
    1.7 研究背景与立题依据
第二章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验试剂
        2.1.2 实验仪器
        2.1.3 实验抗体
        2.1.4 质粒
        2.1.5 细胞株
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 瞬时转染
        2.2.3 构建稳定表达细胞株
        2.2.4 siRNA基因敲低
        2.2.5 昆虫细胞蛋白表达纯化
        2.2.6 in vitro O-GlcNAc糖基化实验
        2.2.7 细胞总RNA提取
        2.2.8 反转录(CDNA合成)
        2.2.9 PCR扩增目的片段
        2.2.10 免疫共沉淀
        2.2.11 免疫印迹(western blot)
        2.2.12 平板克隆形成
        2.2.13 免疫荧光染色
        2.2.14 蛋白质谱
        2.2.15 数据处理分析
第三章 实验结果与分析
    3.1 OGT1 通过对NSL3 进行O-GlcNAc糖基化修饰调控其泛素化降解
        3.1.1 引言
        3.1.2 OGT1 影响NSL3 的泛素化修饰水平
        3.1.3 NSL3 发生O-GlcNAc糖基化修饰的部位在C端
    3.2 泛素结合酶UBE2S直接与NSL3 发生相互作用
        3.2.1 引言
        3.2.2 泛素结合酶UBE2S与 NSL3 相互结合,而非UBE2N
        3.2.3 泛素结合酶UBE2S广泛地结合于NSL3上
    3.3 OGT1对NSL3的O-GlcNAc糖基化修饰调控UBE2S介导的NSL3 泛素化降解
        3.3.1 引言
        3.3.2 OGT1 通过抑制UBE2S与 NSL3 相互作用调控UBE2S介导的NSL3 泛素化降解
        3.3.3 OGA增强UBE2S与 NSL3 的结合促进UBE2S介导的NSL#3泛素化降解
        3.3.4 OGA抑制剂TMG抑制UBE2S介导的NSL3 泛素化降解
    3.4 OGT1 介导的NSL3 Thr755 位点O-GlcNAc糖基化修饰影响NSL3 泛素化降解
        3.4.1 引言
        3.4.2 NSL3 上的O-GlcNAc糖基化修饰主要位点为Thr
        3.4.3 NSL3 Thr755 位点的糖基化修饰影响其泛素化降解
    3.5 NSL3 Thr755位点O-GlcNAc糖基化修饰影响MOF/NSL复合物的全酶活性与稳定性
        3.5.1 引言
        3.5.2 NSL3上Thr755位点的O-GlcNAc糖基化修饰调控MOF/NSL复合物的全酶活性
        3.5.3 NSL3 Thr755位点O-GlcNAc糖基化修饰影响MOF/NSL复合物的全酶活性与稳定性
    3.6 OGT1 介导的NSL3 Thr755 位点糖基化修饰调控A549 细胞的增殖能力
        3.6.1 引言
        3.6.2 OGT1 介导的NSL3 Thr755 位点O-GlcNAc糖基化修饰调控A549 细胞的增殖
第四章 总结讨论与展望
    4.1 实验结果总结讨论
    4.2 后期展望
参考文献
作者简介及博士期间获得的科研成果
致谢



本文编号：3622458