平滑肌肌球蛋白的磷酸化调节机理

发布时间：2022-11-05 16:22

　　平滑肌肌球蛋白（smooth muscle myosin, SmM）是一种重要的分子马达,是平滑肌粗丝的主要成分。通过与肌动蛋白细丝的相互作用,SmM可以将ATP水解产生的化学能转化成构象变化,使粗丝-细丝间发生相互滑动,引起平滑肌收缩。 SmM由两条重链、两条必需轻链（Essential light chain, ELC）、以及两条调节轻链（Regulatory light chain, RLC）组成。SmM重链包括位于N端的马达头部（包含ATP水解酶活性中心和细丝结合位点）、轻链ELC和RLC结合位点、以及C端的卷曲螺旋（coiled-coil）。SmM的马达功能受磷酸化调节。在非磷酸化状态下,SmM的马达活性处于抑制状态,其ATP水解酶活力极低；当SmM的RLC轻链被磷酸化后,SmM的马达活性处于高活性状态,具有很高的ATP水解酶活力。大量的研究表明,非磷酸化状态下,SmM的双头之间以及头部与尾部之间存在相互作用,使SmM处于折叠抑制状态；RLC磷酸化后,上述相互作用消失,SmM处于伸展激活状态。由于磷酸化位点位于RLC轻链,与ATP水解酶活性中心相距甚远,一个重要问题是R... 

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
符号说明
图序
表序
目录
第一章 综述
    1.1 引言
    1.2 肌球蛋白超家族
    1.3 第Ⅱ类肌球蛋白
    1.4 平滑肌肌球蛋白(Smooth Muscle Myosin,SmM)
        1.4.1 平滑肌肌球蛋白的结构
        1.4.2 平滑肌肌球蛋白的磷酸化调节机制
        1.4.3 肌球蛋白轻链激酶(Myosin Light Chain Kinase,MLCK)
        1.4.4 肌球蛋白磷酸酶(MP)
    1.5 研究背景
    1.6 研究意义
第二章 平滑肌肌球蛋白的双头结构在磷酸化调节中的作用
    2.1 前言
    2.2 材料方法
        2.2.1 试剂
        2.2.2 仪器设备
        2.2.3 质粒与菌种
        2.2.4 基因克隆
        2.2.5 真核细胞蛋白表达与纯化
        2.2.6 ATP水解酶活力测定
        2.2.7 蛋白酶处理Sm849
        2.2.8 凝胶过滤层析
        2.2.9 蛋白梯度胶的配制
        2.2.10 电镜实验
        2.2.11 非变性胶电泳
        2.2.12 平滑肌肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的制备
    2.3 实验结果与分析
        2.3.1 平滑肌肌球蛋白不同截短蛋白的获得
        2.3.2 平滑肌肌球蛋白二聚化的鉴定
        2.3.3 维持平滑肌肌球蛋白稳定二聚化所需要的关键尾部区域
        2.3.4 双头结构对于平滑肌肌球蛋白的磷酸化依赖的激活是必须的
        2.3.5 酶解增加了S1的ATP水解酶活力
    2.4 本章小结
    2.5 讨论
第三章 平滑肌肌球蛋白头尾相互作用在磷酸化调节中的作用
    3.1 前言
    3.2 材料方法
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验方法
    3.3 实验结果与分析
        3.3.1 平滑肌肌球蛋白943之前的尾部参与头尾相互作用
        3.3.2 平滑肌肌球蛋白899之后的尾部参与头尾相互作用
        3.3.3 尾部的酸性氨基酸参与了头尾相互作用
        3.3.4 头部的碱性氨基酸参与了头尾相互作用
    3.4 讨论
参考文献
致谢
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果



本文编号：3702934