CRISPR/Cas9靶向编辑技术的优化及其在干细胞中的应用

发布时间：2024-05-18 14:00

　　CRISPR/Cas9系统基因编辑技术的发现发展,为人类疾病尤其是罕见遗传病的基因治疗提供了更有利的技术平台,为精准医疗提供了新策略。如何最大限度地降低和评估脱靶效应、提高其在干细胞中的基因编辑效率,是CRISPR/Cas9系统走向临床应用的前提和关键。本论文借助细胞中DNA双链断裂(DSBs)后自发进行的非同源末端连接(NHEJ)或同源介导的双链修复(HDR)两种机制,将带有目标基因序列向导RNA(guide RNA,gRNA)的一个或多个CRISPR/Cas9系统导入人的细胞系和干细胞中,诱发DNA双链断裂,进而诱发基因序列的插入、修饰和缺失,提高靶向编辑的效率和准确性;同时利用整合酶缺陷型慢病毒载体(Integration-Defective LentiviralVectors,IDLVs)能够优先识别DNA双链断裂的特点,对CRISPR/Cas9系统产生的脱靶位点进行了评估,并优化了干细胞中的基因编辑效率。第1章CRISPR/Cas9系统中gRNA脱靶效应评估新方法的建立近年来,CRISPR/Cas9系统广泛地应用于动植物的基础研究中,更有望在未来应用于临床疾病治疗。而脱靶效应...

【文章页数】：134 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
致谢
前言
摘要
Abstract
缩写、术语表
1 CRISPR/Cas9系统中gRNA脱靶效应评估新方法的建立
    1.1 引言
    1.2 材料和方法
    1.3 实验结果
    1.4 讨论
    1.5 小结
2 多能干细胞中CRISPR/Cas9介导的高效率的同源重组修饰
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
    2.3 实验结果
    2.4 讨论
    2.5 小结
3 造血干细胞中CRISPR/Cas9介导的靶向删除在β-globin疾病治疗中的应用
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
    3.3 实验结果
    3.4 讨论
    3.5 小结
4 总结
5 综述 基因编辑技术及其在人血液系统中的应用
    5.1 基因治疗的基本原理
    5.2 靶向核酸酶系统
    5.3 基因治疗中应用的载体工具
    5.4 基因编辑技术在血液系统中的应用
    5.5 小结和展望
参考文献
作者简历



本文编号：3977030