不同代次牛支原体蛋白研究及免疫效果评价
发布时间：2022-01-03 00:15
牛支原体是感染牛的一种致病性病原菌,由该病原引发的相关疾病给养牛业带来了巨大的经济损失。流行病学调查显示,牛支原体感染率逐年上升,而临床治疗中抗生素效果差,疫苗是预防及治疗M.bovis相关疾病有效方法,牛支原体疫苗的研制迫在眉睫。研究中发现,通过体外连续传代,可以使牛支原体单位体积培养液所含活菌数发生数量级的改变。此过程中,牛支原体蛋白表达水平发生着怎样的变化,如果一些重要的保护性抗原丢失,将导致免疫保护力下降。本研究采用iTRAQ、Western blot和荧光定量PCR方法,对牛支原体不同代次菌株总蛋白表达水平进行了分析,在保证重要的免疫保护性抗原稳定表达的前提下,筛选出单位体积内活菌数量最多的代次,制备灭活疫苗,进行初步临床试验。主要的研究结果如下:1.本研究针对呼和浩特市周边地区规模化养牛场进行了3年的牛支原体感染情况调查,发现近几年牛支原体血清阳性率逐年上升,感染率高达90%。通过对多株菌16S rDNA序列进行进化分析,发现本实验室分离株NM-28,NM-40,NM-42与数据库中收录的其他地区代表株进化距离近,即我国牛支原体流行株相对保守。2.测定了牛支原体NM-28分...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：129 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
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【参考文献】：
期刊论文
[1]四种分子伴侣促进牛支原体膜蛋白在大肠杆菌中可溶性表达研究[J]. 王艳芳,周雅坪,张新竹,李松建,麻昌姣,黄海碧,郝永清. 中国农业大学学报. 2018(12)
[2]蛋白质组学及其研究技术概述[J]. 刘伟,刘书广,韩留福. 生物学教学. 2018(05)
[3]牛支原体疫苗的研究进展[J]. 季文恒,吴娅琴,翟肖辉,储岳峰. 中国畜牧兽医. 2018(03)
[4]牛支原体宁夏分离株的中西药药敏试验与初步筛选[J]. 马烨,何生虎,雷元元,郭亚男,曹思婷,白晓南. 黑龙江畜牧兽医. 2016(05)
[5]牛支原体蛋白-蛋白相互作用网络的构建[J]. 刘威,袁芳艳,周丹娜,刘泽文,杨克礼,段正赢,郭锐,肖少波,田永祥. 动物医学进展. 2015(11)
[6]牛呼吸道疾病综合征病例的病原分析[J]. 马春霞,李军,覃勇,钟舒红,陶立,彭昊,兰美益,杨威,陈泽祥,胡帅,李常挺,赵小红. 中国畜牧兽医. 2015(09)
[7]牛支原体致病机制研究进展[J]. 高铎,孔令聪,贾博岩,王梓,徐凤宇,刘树明,马红霞. 动物医学进展. 2015(07)
[8]奶犊牛支原体肺炎的流行特点及其防治[J]. 许英民. 兽医导刊. 2015(07)
[9]牛支原体病的病因分析及防治措施[J]. 梁文能. 中国畜牧兽医文摘. 2015(04)
[10]牛支原体肺炎防控技术[J]. 陈凤梅,胡士林,柳美玲,徐会梅. 山东畜牧兽医. 2015(03)
博士论文
[1]基于时间点的转录组学分析比较Mo和Mmc的代谢特点及Mo培养基的优化[D]. 王晓晖.内蒙古农业大学 2017
[2]斯氏副柔线虫转录组学和蛋白质组学研究及免疫相关基因鉴定[D]. 冯陈晨.内蒙古农业大学 2017
[3]宁夏地区永宁县牛支原体病流行病学调查及防治技术研究[D]. 邵倩.甘肃农业大学 2017
硕士论文
[1]奶牛犊牛主要呼吸道疾病流行病学调查及牛支体肺炎防治的研究[D]. 张晓宇.内蒙古农业大学 2018
[2]牛支原体强弱菌株分泌蛋白的分离和初步鉴定研究[D]. 胡古月.华中农业大学 2018
[3]牛支原体流行病学调查及灭活疫苗研制[D]. 张建华.内蒙古农业大学 2017
[4]牛支原体病的中西药治疗初步研究[D]. 马烨.宁夏大学 2016
[5]牛支原体的分离鉴定及其全基因组序列测定与分析[D]. 王艳杰.内蒙古农业大学 2014
[6]牛支原体硫辛酰胺脱氢酶的蛋白质组学筛选及其功能鉴定[D]. 孙文静.东北农业大学 2012
[7]双向电泳与免疫印迹相结合筛选牛支原体免疫相关蛋白[D]. 陈维.东北农业大学 2011
本文编号：3565169
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：129 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２?４标ｉＴＲＡＱ试剂结构示例（来自公司结题报告）??Ｆｉｇ．２?Ｔｈｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｉＴＲＡＱ?４?ｓｔａｎｄａｒｄ?ｒｅａｇｅｎｔ?（Ｔｈｅ?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｆｒｏｍ?ｃｏｍｐａｎｙ?ｃｏｍｐｌｅｔｉｏｎ?ｒｅｐｏｒｔ）??１．２．１．３
ｐｆｅｔＪｅ?Ｐｏｏｌ?２??ａ?＊?３??ｒａｔｉｏ?一ｉ?ＣＩＤ??ＥＺＤ－ＣＨＤ?ｐｅｐｔｉｄｅ?Ｐｏｏｌ?３?＠３?ｌＰｅｐｂｄｅＰｏｏｌ３??０?Ｉ?Ｏ??３?＊?２??ＥＨＨＨｌ＾ｅｐｔｔｄｅＰｏｄ－ｌ?ｍｉ?时４??Ｒ＊ｆ？ｏｔｔ？ｒ?ａｎｄ??ｒｅｍａｉｎ?ｉｎｔａｃｔ?Ｉｎ?ＭＳ?一??：：??ｚ?’?％?ＤＩＦＦＥＲＥＮＴ?Ｒ？ｐｏｒｔ＾??Ｅｑｕａｌ?Ｐ＾Ｆｒａｇｍ＾ｔｓ??ｊ■Ｆｉｌｌｉｐ?＾?．ｆ?２?Ｉｇｌｉ．?１?Ｌ??图３?ｉＴＲＡＱ试剂标记定量肽段示例（来自公司结题报告）??Ｆｉｇ．３?ｉＴＲＡＱ?Ｒｅａｇｅｎｔ?Ｌａｂｅｌｅｄ?（Ｔｈｅ?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｆｒｏｍ?ｃｏｍｐａｎｙ?ｃｏｍｐｌｅｔｉｏｎ?ｒｅｐｏｒｔ）??１．２．２?蛋白组学在动物医学上的应用??蛋白质组学被用来研究不同环境中细菌蛋白表达的变化、鉴定与致病??和耐药相关的蛋白、筛选细菌亚单位疫苗的候选蛋白。２０１８年，Ｈｅ等通??过蛋白组学研宄了医院与社区金黄色葡萄球菌分离株的差异，同时构建了??蛋白互作网络，为研宄毒力因子与疾病关系提供实验数据［８７］。２０１０年，??Ｊｏｓｅｐｈ等为了开发安全且有效的疫苗，利用蛋白质组学鉴定来自流产布鲁??氏菌细胞膜的新候选蛋白［８８］。２０１７年，Ｐａｗｅ通过蛋白质组学分析发现，??幽门螺杆菌和链球菌之间的相互作用可能会增强细菌的存活并减少致癌作??用［州。??蛋白质组学在研宄病毒致病机制方面也做出了巨大贡献。２０１１年，??Ｗａｎｇ等用三种狂大病毒感染小鼠Ｎ２ａ细胞，进而做了蛋白质组学分析，??鉴定到的差异蛋白涉及细胞骨架，信号转导，应激反应和代
?内蒙古农业大学博士学位论文?２２＿??ｂｐ?Ｍｌ?２?３?４?５?６?７?８?９?１０?１１?１２?１３?１４??图５?／！／．?６ｏｉ／／ｓ特异性ＰＣＲ扩增??Ｆｉｇ．５?Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ?ｂｏｖｉｓ??注：Ｍ：?ＤＬ?２?０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１：阴性对照；２－４：气管特异性扩增产物：５－７：肺脏特异性扩??增产物；８－１０：鼻拭子特异性扩增产物；１１－１４：乳样特异性扩增产物；??表５?ＰＣＲ检测结果??Ｔａｂｌｅ?５?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｂｙ?ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ?ｃｈａｉｎ?ｒｅａｃｔｉｏｎ??检测样本阳性样本??牧场?取样种类?阳性率（％）?主要症状??数（份）?数（份）??１号牧场?气管、肺脏?２０?１７?８５．０?肺炎??２号牧场?气管、肺脏?９?７?７７．８?肺炎??６号牧场?气管、肺脏?７?６?８５．７?肺炎??１号牧场?鼻拭子?１２８?９６?７５．０?肺炎??４号牧场?鼻拭子?８９?４３?４８．３?肺炎??５号牧场?鼻拭子?６３?３５?５５．６?肺炎??６号牧场?鼻拭子?１０５?７７?７３．３?肺炎??７号牧场?鼻拭子?４１?１５?３６．６?肺炎??８号牧场?鼻拭子?３?１?１０?３２．３?肺炎??１号牧场?乳样?１３８?８５?６１．６?乳房炎??２号牧场?乳样?６３?３４?５４．０?乳房炎??３号牧场?乳样?５９?２９?４９．２?乳房炎??４号牧场?乳样?７４?２５?３３．８?乳房炎??５号牧场?乳样?１?１０?６
【参考文献】：
期刊论文
[1]四种分子伴侣促进牛支原体膜蛋白在大肠杆菌中可溶性表达研究[J]. 王艳芳,周雅坪,张新竹,李松建,麻昌姣,黄海碧,郝永清. 中国农业大学学报. 2018(12)
[2]蛋白质组学及其研究技术概述[J]. 刘伟,刘书广,韩留福. 生物学教学. 2018(05)
[3]牛支原体疫苗的研究进展[J]. 季文恒,吴娅琴,翟肖辉,储岳峰. 中国畜牧兽医. 2018(03)
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[5]牛支原体蛋白-蛋白相互作用网络的构建[J]. 刘威,袁芳艳,周丹娜,刘泽文,杨克礼,段正赢,郭锐,肖少波,田永祥. 动物医学进展. 2015(11)
[6]牛呼吸道疾病综合征病例的病原分析[J]. 马春霞,李军,覃勇,钟舒红,陶立,彭昊,兰美益,杨威,陈泽祥,胡帅,李常挺,赵小红. 中国畜牧兽医. 2015(09)
[7]牛支原体致病机制研究进展[J]. 高铎,孔令聪,贾博岩,王梓,徐凤宇,刘树明,马红霞. 动物医学进展. 2015(07)
[8]奶犊牛支原体肺炎的流行特点及其防治[J]. 许英民. 兽医导刊. 2015(07)
[9]牛支原体病的病因分析及防治措施[J]. 梁文能. 中国畜牧兽医文摘. 2015(04)
[10]牛支原体肺炎防控技术[J]. 陈凤梅,胡士林,柳美玲,徐会梅. 山东畜牧兽医. 2015(03)
博士论文
[1]基于时间点的转录组学分析比较Mo和Mmc的代谢特点及Mo培养基的优化[D]. 王晓晖.内蒙古农业大学 2017
[2]斯氏副柔线虫转录组学和蛋白质组学研究及免疫相关基因鉴定[D]. 冯陈晨.内蒙古农业大学 2017
[3]宁夏地区永宁县牛支原体病流行病学调查及防治技术研究[D]. 邵倩.甘肃农业大学 2017
硕士论文
[1]奶牛犊牛主要呼吸道疾病流行病学调查及牛支体肺炎防治的研究[D]. 张晓宇.内蒙古农业大学 2018
[2]牛支原体强弱菌株分泌蛋白的分离和初步鉴定研究[D]. 胡古月.华中农业大学 2018
[3]牛支原体流行病学调查及灭活疫苗研制[D]. 张建华.内蒙古农业大学 2017
[4]牛支原体病的中西药治疗初步研究[D]. 马烨.宁夏大学 2016
[5]牛支原体的分离鉴定及其全基因组序列测定与分析[D]. 王艳杰.内蒙古农业大学 2014
[6]牛支原体硫辛酰胺脱氢酶的蛋白质组学筛选及其功能鉴定[D]. 孙文静.东北农业大学 2012
[7]双向电泳与免疫印迹相结合筛选牛支原体免疫相关蛋白[D]. 陈维.东北农业大学 2011
本文编号：3565169
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