奶牛乳房炎性金葡菌毒力基因和耐药性及其与SCVs致病力差异

发布时间：2022-02-18 12:46

　　奶牛乳房炎是奶牛常见的一种疾病,在世界范围内给奶牛养殖业带来了巨大的经济损失。金黄色葡萄球菌作为一种重要的人类致病菌,也是引起奶牛乳房炎的主要病原之一,目前尚无有效的疫苗预防,抗生素仍然是治疗该病的重要手段。掌握金黄色葡萄球菌的毒力因子模式特征和耐药特性对防控该菌具有重要的意义。近年来,金黄色葡萄球菌小菌落突变株（SCV）在人类临床感染、食品微生物和动物疾病中的报道屡见不鲜,常与复发性慢性感染相关。然而,其与母株致病差异机制尚无报道。因此,本研究旨在对我国牛场临床型奶牛乳房炎中分离的金黄色葡萄球菌进行毒力因子、基因分型、耐药表型进行分析,并研究其与金葡菌小菌落突变株对奶牛乳腺上皮细胞感染的致病差异机制。本研究从全国9个省市的19个牧场中采集1021份奶牛临床型乳房炎奶样,经病原菌分离鉴定获得103株金黄色葡萄球菌。通过常规PCR方法对17个毒力基因进行检测,确定毒力基因模式;根据α-溶血素基因序列的差异对其分型;同时,采用SPA和MLST方法对菌株分型,研究三者之间的相关性。结果发现,17个毒力因子的检出率各不相同,从2%～100%不等,形成38种不同的毒力基因模式,且与MLST分型高... 

【文章来源】：中国农业大学北京市211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：97 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略表
第一章 引言
    1.1 奶牛乳房炎概述
        1.1.1 中国奶牛乳房炎现状
        1.1.2 奶牛乳房炎的诊断
        1.1.3 奶牛乳房炎与抗生素耐药性
    1.2 金黄色葡萄球菌
        1.2.1 病原学
        1.2.2 毒力因子
        1.2.3 耐药性
        1.2.4 分型方法
        1.2.5 小菌落突变株
    1.3 金黄色葡萄球菌与奶牛乳房炎
    1.4 微生物感染与细胞防御
        1.4.1 先天性免疫反应
        1.4.2 乳腺上皮细胞的防御功能
    1.5 转录组测序
    1.6 本研究的目的和意义
第二章 金黄色葡萄球菌毒力基因检测与分型
    2.1 引言
    2.2 材料与试剂
        2.2.1 细菌来源
        2.2.2 主要试剂和耗材
        2.2.3 细菌培养基的配制
        2.2.4 仪器设备
        2.2.5 生物信息学分析软件
    2.3 实验方法
        2.3.1 金葡菌基因组DNA的提取
        2.3.2 毒力基因检测
        2.3.3 hla基因分型及进化树分析
        2.3.4 SPA分型和MLST分型
    2.4 结果
        2.4.1 金葡菌毒力基因的检测
        2.4.2 金葡菌SPA分型和MLST分型
        2.4.3 hla基因分型
        2.4.4 hla基因和MLST序列的进化树分析
        2.4.5 毒力基因谱、hla基因分型和菌株分子分型的相关性
    2.5 讨论
    2.6 小结
第三章 金黄色葡萄球菌耐药性和1型整合子检测
    3.1 引言
    3.2 试剂与材料
        3.2.1 主要试剂和耗材
        3.2.2 菌株来源
        3.2.3 抗生素的配制
        3.2.4 耐药基因引物序列
    3.3 试验方法
        3.3.1 抗生素耐药性检测
        3.3.2 抗生素耐药基因的检测和整合子序列的检测
        3.3.3 基因盒可变区序列分析
        3.3.4 相关性分析
    3.4 结果
        3.4.1 药物敏感实验
        3.4.2 耐药基因检测结果
        3.4.3 1型整合子检测结果
        3.4.4 耐药表型、基因型和1型整合子相关性分析
    3.5 讨论
    3.6 小结
第四章 金黄色葡萄球菌及其小菌落突变株致细胞凋亡的研究
    4.1 引言
    4.2 试剂与耗材
        4.2.1 菌株
        4.2.2 细胞
        4.2.3 试剂和耗材
    4.3 试验方法
        4.3.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养
        4.3.2 菌液的准备
        4.3.3 黏附和侵袭特性
        4.3.4 细菌胞内生存和细胞活力
        4.3.5 致奶牛乳腺上皮细胞凋亡的研究
        4.3.6 数据统计分析
    4.4 结果
        4.4.1 黏附和侵袭特性
        4.4.2 细菌胞内生存和细胞活力
        4.4.3 LDH释放检测
        4.4.4 凋亡特性研究
    4.5 讨论
    4.6 小结
第五章 金黄色葡萄球菌及其小菌落突变株诱导细胞免疫反应的研究
    5.1 引言
    5.2 试剂与耗材
        5.2.1 菌株和细胞
        5.2.2 试剂和耗材
    5.3 试验方法
        5.3.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养
        5.3.2 菌液的准备
        5.3.3 细菌感染
        5.3.4 吉姆萨染色
        5.3.5 荧光定量PCR检测免疫相关指标
    5.4 结果
        5.4.1 吉姆萨染色结果
        5.4.2 qRT-PCR结果
    5.5 讨论
    5.6 小结
第六章 金黄色葡萄球菌及其小菌落突变株转录组差异的分析
    6.1 引言
    6.2 试剂与耗材
        6.2.1 材料
        6.2.2 菌株
    6.3 试验方法
        6.3.1 实验分组
        6.3.2 原核有参转录组信息分析流程
        6.3.3 细菌总RNA提取
        6.3.4 RNA样品检测
        6.3.5 构建测序文库
        6.3.6 测序数据的处理与分析
    6.4 结果
        6.4.1 总RNA鉴定
        6.4.2 测序评估和比对统计
        6.4.3 表达水平对比
        6.4.4 差异基因GO富集分析
        6.4.5 差异表达基因KEGG富集分析
    6.5 讨论
    6.6 小结
第七章 结论与创新点
    7.1 结论
    7.2 创新点
参考文献
致谢
附录
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
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[3]奶牛隐性乳房炎研究进展[J]. 居自远,徐小洪,黄炳旭,付守鹏,钱晶.  安徽农业科学. 2017(32)
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博士论文
[1]奶牛乳房炎性诺卡氏菌Nocardia cyriacigeorgica分离鉴定和致病机制研究[D]. 陈微.中国农业大学 2017
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[4]LPS刺激的奶牛乳腺上皮细胞转录组和miRNA表达谱变化规律的研究[D]. 陈玲.西北农林科技大学 2016
[5]奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌与化脓隐秘杆菌的生存策略：耐药性、生物膜以及小菌落突变株[D]. Rashad Alkasir.中国农业大学 2015

硕士论文
[1]硒通过microRNA 155调控金黄色葡萄球菌性乳腺炎发生的作用机制研究[D]. 张振彪.华中农业大学 2017
[2]宁夏地区奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及金葡菌毒力基因分析[D]. 刘溪源.宁夏大学 2015



本文编号：3630865