MiR-223/Mt2介导褪黑素对小鼠精原细胞GC-1spg的促增殖作用

发布时间：2023-05-07 05:45

　　精子发生是一个有着严格时空特异性调控的生物学过程。该过程主要分为三个时期,有丝分裂期(精原细胞增殖和分化)、减数分裂期(精母细胞染色体减半)和精子形成期(精细胞变形)。从原始生殖细胞分化为成熟的精子,主要受到下丘脑-垂体-睾丸轴分泌的激素及生长因子的调控,与此同时,松果腺对雄性动物的生殖也起着重要的调控作用。褪黑素的分泌主要来自松果体细胞,通过特异性膜受体和非受体介导,影响神经激素以及睾酮的分泌,从而参与了睾丸的发育调控。mi RNAs是一类非编码小RNA,通过与非编码区(以3’UTR为主)结合,在转录后水平及翻译水平实现对基因表达的调控。一系列的条件性敲除试验证实,mi RNAs对睾丸功能以及精子发生起着重要的调控作用。高通量测序结果也表明,不同发育阶段的生殖细胞以及初情期前不同阶段的睾丸中,mi RNAs的表达图谱呈现出显著差异。因此,mi RNAs被认为参与了生殖细胞和睾丸的发育调控。本课题组前期的研究结果表明,褪黑素改变了小鼠睾丸中mi RNAs的表达图谱,mi RNAs生成过程中相关基因的表达显著上调。但褪黑素是否通过调控mi RNAs参与了精子发生及其相关作用机制,目前仍没...

【文章页数】：120 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
abstract
前言
第一篇 文献综述
    第1章 褪黑素及其生理学功能研究进展
        1.1 褪黑素的生物合成及其受体
            1.1.1 褪黑素的生物合成
            1.1.2 褪黑素的受体
        1.2 褪黑素与生殖调控
            1.2.1 褪黑素与雄性生殖
            1.2.2 褪黑素与雌性生殖
        1.3 褪黑素的其他生物学功能
            1.3.1 褪黑素在延缓衰老、抗氧化方面发挥的作用
            1.3.2 褪黑素在抗肿瘤方面发挥的作用
            1.3.3 褪黑素在免疫调节方面发挥的作用
            1.3.4 褪黑素在缓解糖尿病症状方面发挥的作用
    第2章 MicroRNA的生成、作用机制及其在哺乳动物生殖中的生物学功能研究进展
        2.1 miRNA简介
        2.2 miRNA的生成和靶向作用机制
        2.3 miRNA在睾丸中的作用
            2.3.1 睾丸中miRNA表达谱
            2.3.2 miRNA和精原干细胞自我更新
            2.3.3 miRNA和精子发生
            2.3.4 支持细胞中miRNA的作用
        2.4 miRNA在卵巢中的作用
            2.4.1 miRNA在卵母细胞中的作用
            2.4.2 miRNA在颗粒细胞中的作用
    第3章 金属硫蛋白及其生物学功能研究进展
        3.1 MT特性
        3.2 MT的生物学功能
            3.2.1 MT在机体抗氧化方面发挥的作用
            3.2.2 MT在调控金属离子稳态及修复氧化损伤方面发挥的作用
            3.2.3 MT在促进维生素吸收方面发挥的作用
            3.2.4 MT在生殖方面发挥的作用
第二篇 研究内容
    第1章 褪黑素通过改变GC-1spg细胞中miRNAs表达图谱促进细胞增殖
        1.1 材料
            1.1.1 试验材料
            1.1.2 主要仪器设备
            1.1.3 主要试剂
        1.2 方法
            1.2.1 细胞培养
            1.2.2 细胞活力检测
            1.2.3 Trizol法提取细胞总RNA
            1.2.4 总RNA纯化
            1.2.5 microRNA测序
            1.2.6 qRT-PCR对测序结果的验证
            1.2.7 数据统计
        1.3 结果
            1.3.1 褪黑素提高了GC-1spg细胞活力
            1.3.2 miRNAs文氏图
            1.3.3 差异表达miRNAs靶基因预测
            1.3.4 差异表达miRNAs靶基因GO功能富集分析
            1.3.5 差异表达miRNAsKEGG通路分析
            1.3.6 差异表达miRNAsqRT-PCR验证
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第2章 褪黑素通过改变mRNAs表达图谱促进GC-1spg的增殖
        2.1 材料
            2.1.1 试验材料
            2.1.2 主要仪器设备
            2.1.3 主要试剂
        2.2 方法
            2.2.1 mRNA测序建库实验流程
            2.2.2 cDNA合成(荧光定量用)
            2.2.3 引物设计与合成
            2.2.4 荧光定量PCR
            2.2.5 细胞转染
            2.2.6 荧光素酶报告基因活性检测
            2.2.7 数据统计
        2.3 结果
            2.3.1 差异表达基因
            2.3.2 差异表达基因GO功能富集分析
            2.3.3 差异表达基因KEGG富集分析
            2.3.4 差异表达基因qRT-PCR验证
            2.3.5 miR-223与Mt2之间的靶标关系
        2.4 讨论
        2.5 小结
    第3章 miR-223/Mt2介导的调控通路对GC-1spg增殖和凋亡的影响
        3.1 材料
            3.1.1 试验材料
            3.1.2 主要仪器设备
            3.1.3 主要试剂
            3.1.4 主要试剂配制
        3.2 方法
            3.2.1 GC-1spg细胞转染
            3.2.2 细胞周期检测
            3.2.3 细胞凋亡检测
            3.2.4 线粒体膜电位检测
            3.2.5 引物设计与合成
            3.2.6 荧光定量PCR
            3.2.7 Westernblot相关
            3.2.8 过表达载体质粒转化及细菌扩大培养
            3.2.9 过表达载体质粒提取
        3.3 结果
            3.3.1 Mt2对GC-1spg细胞增殖和凋亡的影响
            3.3.2 miR-223对GC-1spg细胞增殖和凋亡的影响
            3.3.3 褪黑素激活ERK1/2信号通路提高了Mt2的表达,促进GC-1spg增殖
        3.4 讨论
        3.5 小结
结论
参考文献
导师简介
作者简介
攻读博士期间取得的科研成果
致谢



本文编号：3810397