磷酸化修饰增强淫羊藿苷缓解DHAV-1诱导的鸭胚肝细胞损伤作用及其机制研究

发布时间：2023-09-17 09:06

　　淫羊藿(Epimedium davidii Franch)为我国传统的补益中草药,具有“益精气,坚筋骨,补腰膝,强心力”之功效。随着近年来对其药理学功能研究的日益深入,人们发现淫羊藿苷(Icariin,ICA)为淫羊藿的主要药理有效成分。诸多临床和实验药理研究表明,ICA具有抗病毒、抗氧化、免疫增强等效果。然而,由于黄酮类成分水溶性较差,在实际临床应用时经常会造成一定的不便。为了提高ICA的生物利用率,更好地发挥其抗病毒效果,便于在临床推广应用,通过混合磷酸盐法成功的对ICA进行了磷酸化修饰,得到磷酸化淫羊藿苷(phosphated Icariin,pICA)。在本项目组前期的试验中,我们发现感染1型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV-1)可以导致雏鸭发生严重的肝损伤,且这种肝损伤与其体内严重的氧化应激存在显著的相关性,这说明DHAV-1感染雏鸭引起的炎症损伤与氧化应激损伤有着密切联系,当引入ICA与pICA治疗之后,雏鸭体内炎症因子水平显著下降、抗氧化酶活性明显提升,最终存活率得到显著提升,表现出良好的治疗效果,这种疗效可能与ICA与pICA的抗炎症作...

【文章页数】：126 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号及缩略语
绪论
文献综述
    第一章 1型鸭肝炎病毒研究进展
        1 DHAV的分类及其导致的鸭病毒性肝炎流行病学和临床症状
            1.1 DHAV的分类
            1.2 流行病学
            1.3 临床症状
            1.4 致病机理
        2 诊断方法
            2.1 中和实验
            2.2 电镜检测
            2.3 酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)
            2.4 分子生物学诊断
            2.5 其他诊断方法
        3 防治措施
            3.1 预防手段
            3.2 治疗措施
        参考文献
    第二章 淫羊藿苷和化学修饰的研究进展及其抗DHAV-1的前期研究
        1 淫羊藿苷的研究进展
            1.1 淫羊藿的分布及主要活性成分
            1.2 ICA的药理作用
            1.3 ICA在兽医方面的应用
        2 化学修饰的研究进展
        3 ICA与其化学修饰产物抗DHAV-1的前期研究
            3.1 ICA的磷酸化修饰
            3.2 ICA与pICA抗DHAV-1所致雏鸭肝损伤研究
            3.3 ICA和pICA抗DHAV-1造成的雏鸭氧化应激作用
            3.4 ICA和pICA抗DHAV-1感染鸭胚肝细胞及增殖的作用
            3.5 ICA和pICA免疫增强作用研究
            3.6 ICA与pICA抗DHAV-1感染雏鸭的前期研究总结
        4 本试验研究目的
        参考文献
试验研究
    第三章 ICA与pICA缓解DHAV-1诱导DEHs炎症反应作用的研究
        1 材料与方法
            1.1 试验药物
            1.2 主要试剂及材料
            1.3 主要仪器
            1.4 鸭胚肝细胞(Duck embryonic hepatocytes,DEHs)的制备
            1.5 ICA与pICA对DEHs分泌炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α的影响
            1.6 ICA与pICA对炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α基因mRNA表达的影响
            1.7 ICA与pICA对TLR家族相关因子基因mRNA表达的影响
            1.8 ICA与pICA对TLR家族及NF-κB相关蛋白表达的影响
            1.9 统计方法
        2 结果
            2.1 ICA与pICA对DEHs分泌炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α的影响
            2.2 ICA与pICA对炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α基因mRNA表达的影响
            2.3 ICA与pICA对TLR家族相关因子基因mRNA表达的影响
            2.4 ICA与pICA对TLR家族及NF-κB相关蛋白表达的影响
        3 讨论
        4 小结
        参考文献
    第四章 ICA与pICA缓解DHAV-1诱导DEHs氧化应激作用的研究
        1 材料与方法
            1.1 试验药物
            1.2 主要试剂及材料
            1.3 主要仪器
            1.4 DEHs的制备
            1.5 ICA与pICA对DHAV-1感染鸭胚肝细胞氧化应激相关指标的影响
            1.6 H₂O₂致DEHs氧化损伤的有效浓度筛选
            1.7 ICA与pICA对H₂O₂诱导的氧化损伤DEHs抗DHAV-1感染的能力的影响
            1.8 H₂O₂诱导的氧化损伤对DHAV-1感染鸭胚肝细胞毒力的影响
            1.9 统计方法
        2 结果
            2.1 ICA与pICA对DHAV-1感染鸭胚肝细胞氧化应激相关指标的影响
            2.2 H₂O₂诱导DEHs氧化损伤有效浓度筛选结果
            2.3 ICA与pICA对H₂O₂诱导的氧化损伤DEHs抗DHAV-1感染的能力的影响
            2.4 H₂O₂诱导的氧化损伤对DHAV-1感染鸭胚肝细胞毒力的影响
        3 讨论
        4 小结
        参考文献
    第五章 ICA与pICA对DHAV-1诱导的DEHs氧化应激的调控机制
        1 材料与方法
            1.1 试验药物
            1.2 主要试剂及材料
            1.3 主要仪器
            1.4 DEHs的制备
            1.5 ICA与pICA对DEHs中SOD、GSH-Px蛋白表达的影响
            1.6 ICA与pICA对抗氧化相关基因mRNA表达的影响
            1.7 ICA与pICA对MAPKs信号通路相关蛋白表达的影响
            1.8 统计方法
        2 结果
            2.1 ICA与pICA对DEHs中SOD和GSH-Px蛋白表达的影响
            2.2 ICA与pICA对抗氧化相关基因mRNA表达的影响
            2.3 ICA与pICA对MAPKs信号通路相关蛋白表达的影响
        3 讨论
        4 小结
        参考文献
    第六章 ICA与pICA缓解DHAV-1诱导的DEHs线粒体损伤作用的研究
        1 材料与方法
            1.1 试验药物
            1.2 主要试剂及材料
            1.3 主要仪器
            1.4 DEHs的制备
            1.5 ICA与pICA对鸭胚肝细胞线粒体膜电位的影响
            1.6 ICA与pICA对鸭胚肝细胞线粒体内ROS的影响
            1.7 ICA与pICA对鸭胚肝细胞细胞色素C氧化酶(COX)活性的影响
            1.8 ICA与pICA对鸭胚肝细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的影响
            1.9 ICA与pICA对鸭胚肝细胞内ATP含量的影响
            1.10 ICA与pICA对鸭胚肝细胞内Ca²⁺浓度的影响
            1.11 统计方法
        2 结果
            2.1 ICA与pICA对鸭胚肝细胞线粒体膜电位的影响
            2.2 ICA与pICA对鸭胚肝细胞线粒体内ROS水平的影响
            2.3 ICA与pICA对鸭胚肝细胞细胞色素C氧化酶(COX)活性的影响
            2.4 ICA与pICA对鸭胚肝细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的影响
            2.5 ICA与pICA对鸭胚肝细胞内ATP含量的影响
            2.6 ICA与pICA对鸭胚肝细胞内Ca²⁺浓度的影响
        3 讨论
        4 小结
        参考文献
    第七章 ICA与pICA缓解DHAV-1诱导DEHs细胞凋亡作用的研究
        1 材料与方法
            1.1 试验药物
            1.2 主要试剂及材料
            1.3 主要仪器
            1.4 DEHs的制备
            1.5 ICA与pICA对DHAV-1诱导的鸭胚肝细胞凋亡的影响
            1.6 ICA与pICA对鸭胚肝细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响
            1.7 ICA与pICA对鸭胚肝细胞凋亡相关蛋白表达的影响
            1.8 统计方法
        2 结果
            2.1 ICA与pICA对DHAV-1诱导的鸭胚肝细胞凋亡的影响
            2.2 ICA与pICA对鸭胚肝细胞凋亡相关基因表达的影响
            2.3 ICA与pICA对鸭胚肝细胞凋亡相关蛋白表达的影响
        3 讨论
        4 小结
        参考文献
    第八章 ICA与pICA缓解DHAV-1抑制DEHs细胞增殖作用的研究
        1 材料与方法
            1.1 试验药物
            1.2 主要试剂及材料
            1.3 主要仪器
            1.4 DEHs的制备
            1.5 ICA与pICA对鸭胚肝细胞细胞周期的影响
            1.6 ICA与pICA对鸭胚肝细胞增殖相关基因表达的影响
            1.7 ICA与pICA对鸭胚肝细胞PCNA蛋白表达的影响
            1.8 ICA与pICA对鸭胚肝细胞细胞增殖相关通路蛋白表达的影响
            1.9 炎症损伤、氧化应激损伤、线粒体损伤、细胞凋亡及细胞增殖评价指标间相关性分析
            1.10 统计方法
        2 结果
            2.1 ICA与pICA对鸭胚肝细胞细胞周期的影响
            2.2 ICA与pICA对鸭胚肝细胞增殖相关基因mRNA表达的影响
            2.3 ICA与pICA对鸭胚肝细胞PCNA蛋白表达的影响
            2.4 ICA与pICA对鸭胚肝细胞细胞增殖相关通路蛋白表达的影响
            2.5 炎症损伤、氧化应激损伤、线粒体损伤、细胞凋亡及细胞增殖评价指标间相关性分析
        3 讨论
        4 小结
        参考文献
结论
论文创新点
攻读学位期间发表的论文
致谢



本文编号：3847423