广西地方特色小型猪的体细胞克隆与基因修饰

发布时间：2024-05-09 19:00

　　巴马小香猪与环江小香猪是分别原产于广西巴马瑶族自治县和环江毛南族自治县的地方小型猪品种,具有很高的农业开发和的生物医学研究利用价值。本研究将就体细胞克隆(Somatic Cell Cloning)及其介导的基因修饰(Genetic Modification)在巴马小香猪和环江小香猪的应用展开研究,以期为广西地方特色小型猪的种质资源保存、良种快繁、遗传选育以及培育具有农业和生物医学实际用途的体细胞克隆和基因修饰广西地方特色小型猪奠定基础。本研究主要开展的工作和结果简述如下:(1)体细胞克隆巴马小香猪的生产和转基因克隆胚胎的制备本章旨在建立巴马小香猪体细胞克隆和转基因克隆胚胎制备的技术体系。首先制备新生雄性巴马小香猪肾脏成纤维细胞,验证其不仅具有优异的细胞增殖活性,还能支持克隆胚胎完全的体外和体内发育潜能,并最终获得0.66%(11/1658)的体细胞克隆猪生产效率,表明新生猪肾脏成纤维细胞是一种适于生产体细胞克隆巴马小香猪的细胞资源。然后利用Xfect转染试剂和红色荧光蛋白DsRed转基因质粒来检验新生巴马小香猪肾脏成纤维细胞是否适于基因修饰操作。结果表明在经优化的转染条件(DNA剂量与...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１．１巴马小香猪（Ａ）与环江小香猪（Ｂ）??

香猪、贵州白香猪、久仰香猪和巴马香猪等７种，其中巴马香猪和环江香猪是原产于广??西壮族自治区境内的小型猪品种。??巴马香猪，也称巴马小香猪（图１．１Ａ），原产于广西巴马瑶族自治县，肤色特征为“两??头乌”（即头部和臀部的皮肤和被毛为黑色，其它身体部位为白色）。巴马小香猪皮薄肉??....

图１．２转基因体细胞克隆猪生产流程??Ｆｉｇｕｒｅ?１．２?Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ?ｆｏｒ?ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ－ｃｌｏｎｅｄ?ｐｉｇｓ??１．４核移植技术在猪基因修饰中的应用??

也被称为“体细胞克隆”（Ｓｏｍａｔｉｃ?Ｃｅｌｌ?Ｃｌｏｎｉｎｇ）。??核移植法介导的转基因技术就是先对核移植供体细胞进行基因修饰，然后在经??ＳＣＮＴ制备出转基因克隆后代。如图１．２所示，利用ＳＣＮＴ构建转基因猪的主要程序可??分为：（１）基因修饰供体细胞的制备；（２）卵母细胞....

图２．１体细胞核移植操作程序图解??Ｆｉｇｕｒｅ?２．１?Ｐｒｏｃｅｄｕｒａｌ?ｄｉａｇｒａｍｓ?ｏｆ?ｓｏｍａｔｉｃ?ｃｅｌｌ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｔｒａｎｓｆｅｒ?（ＳＣＮＴ）??

ｒｐｍ离心５?ｍｉｎ，用核移植操作液（洗卵液＋１０％ＦＢＳ）重悬备用。在６０?ｍｍ细胞培养皿上制??作操作液滴并用矿物油覆盖，向操作液滴中移入挑选好的ＭＩＩ期卵母细胞和供体细胞悬??液，然后在显微操作仪上进行ＳＣＮＴ操作。如图２．１所示，ＳＣＮＴ操作程序简述如下：??ｓｓｓｓｇｓ....

图２．２猪胚胎移植操作图示??

ｒｐｍ离心５?ｍｉｎ，用核移植操作液（洗卵液＋１０％ＦＢＳ）重悬备用。在６０?ｍｍ细胞培养皿上制??作操作液滴并用矿物油覆盖，向操作液滴中移入挑选好的ＭＩＩ期卵母细胞和供体细胞悬??液，然后在显微操作仪上进行ＳＣＮＴ操作。如图２．１所示，ＳＣＮＴ操作程序简述如下：??ｓｓｓｓｇｓ....

本文编号：3968499