基于生物传感器的金黄色葡萄球菌快速检测系统的构建及应用的初步研究

发布时间：2017-12-21 01:29

  本文关键词：基于生物传感器的金黄色葡萄球菌快速检测系统的构建及应用的初步研究　出处：《中国人民解放军医学院》2016年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的金黄色葡萄球菌是医院临床感染的常见致病菌,其产生的毒素与侵袭性酶可引起中毒症状及严重的感染,传统检测手段过程繁琐、需时长、需设备复杂,不适合即时检测。因此需要一种适用现场分析、实时监测,且耗时低的方法,能实现金葡菌的即时检测,且灵敏度、特异性高。方法本实验使用集成的全光纤结构免疫荧光生物传感器,以金黄色葡萄球菌为检测对象,采用抗体-抗原-荧光物质标记抗体的免疫夹心原理,在经过生物基团修饰的光纤探针上偶联抗金黄色葡萄球菌特异性抗体,探针捕获金黄色葡萄球菌后,依次加入一抗、生物素化的二抗和标记有链霉亲和素的量子点,然后光纤探针接入生物传感器进行检测,最终荧光强度的变化反映细菌浓度的高低,针对该生物传感器应用于金黄色葡萄球菌标准菌株检测的敏感性、特异性进行评价。并评价其对临床分离的金黄色葡萄球菌菌株的检出能力。结果1.经过一系列羟基化、氨基化和醛基化等生物基团修饰的光纤探针能够实现对抗体的偶联,随着抗体浓度的增加,偶联抗体的数量呈增长趋势。偶联有特异性抗体的光纤能够特异性结合目标物质,而非非特异性吸附。2.显微镜下直接细菌计数较平板计数法方便、简捷,且两者结果处于一个数量级,能代替平板计数法。偶联有金黄色葡萄球菌特异性抗体的光纤能特异性捕获细菌,且捕获率稳定,最高达18.9%。3.采用全光纤结构生物传感器,利用免疫荧光的检测方法,选用光稳定性好的量子点作为荧光物质,能实现对金黄色葡萄球菌标准菌株的检测,最低检出范围为104cfu/ml,具有很高的灵敏性,且对104-108cfu/ml的金葡菌表现出较好的定量检测能力。另外选用临床常见的表皮葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯杆菌等进行特异性检测,结果均与阴性对照组无明显差异,表明具有很好的特异性。4.采用上述仪器及方法对临床分离的金黄色葡萄球菌菌株进行检测,最低检测范围为103/104cfu/ml,提示很高的灵敏性。结论1.光纤探针经过生物基团的修饰能很好地实现与抗体的偶联；2.偶联有特异性抗体的光纤探针对细菌具有很高的捕获率；3.全光纤免疫荧光生物传感器对金黄色葡萄球菌标准菌株检测的最低敏感度为104cfu/ml,且与其它临床常见菌无明显交叉反应,具有很好的特异性,能同时实现对临床分离的金黄色葡萄球菌菌株的检测,最低检测范围为103/104cfu/ ml。
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R378.11;TP212.3

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本文编号：1314186