植物乳杆菌D1501发酵黄浆水的抑菌活性及其中细菌素的分离与鉴定

发布时间：2024-02-25 23:30

　　将植物乳杆菌D1501(Lactobacillus plantarum D1501)接种于黄浆水中,37 ℃静置培养24h后制成酸浆。抑菌活性测定表明,该方法制备的酸浆对供试的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌具有明显的抗菌活性,对假丝酵母有弱的抑菌活性,但对酿酒酵母和2株霉菌没有抑制作用。经中和及酶解实验推测酸浆中的抑菌物质为细菌素。将经过30、10、3 kDa超滤分离得到的无细胞超滤液旋蒸浓缩定容后,采用RESOURCE-Q阴离子交换柱和300SB-C18反相层析柱依次纯化,得到色谱纯度细菌素物质,命名为Lp100。该细菌素经液相色谱-串联质谱法分析,确定分子质量约为1 434.90 Da,氨基酸序列为MCCKVLLLLSRR。最终细菌素比活力为7 247.00 IU/mg,纯化倍数为79.94 倍,回收率为1%。

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【部分图文】：

图1未发酵黄浆水及D1501酸浆对指示菌的的抑制作用

将菌株D1501发酵黄浆水制备的酸浆中和离心，并用0.22?μm微孔滤膜过滤除菌，得到无细胞上清液（D1501酸浆），对其进行抑菌活性检测。图1表明，D1501酸浆对指示菌大肠杆菌K-12和金黄色葡萄球菌ATCC6538有明显抑菌活性，而未发酵黄浆水没有检测到明显的抑菌作用，表明....

图2RESOURCE-Q离子交换层析洗脱曲线

图2为组分A(<3?kDa）经RESOURCE-Q阴离子交换层析的洗脱曲线，组分1为穿透峰，组分2、3、4为各洗脱峰。将各组分冻干浓缩至10?mL分别测定蛋白含量和抑菌活性。结果显示穿透峰无抑菌活性，洗脱峰表现出不同的抑菌活性（表5），而组分2抑菌活性最高，因此挑选组分2进行....

图3组分2的高效液相色谱图

图3为组分2经C18柱反相层析的高效液相色谱分离图，将各峰对应的管8、9、10、11、14分开收集，分别命名为组分a～e，将各组分浓缩至5?mL分别测定各组分的蛋白含量和抑菌活性。由表6可知，除组分e外均具有抑菌活性，而组分c抑菌活性最大，因此挑选组分c进行下一步分离纯化。2.....

图4组分c的高效液相色谱图

图4为组分c经C18柱二次反相层析的高效液相色谱分离图，管6、7为组分I，管8为组分II，管9为组分III，管10为组分IV，管11～13为组分V，将各组分浓缩至1?mL，分别测定蛋白含量和抑菌活性。如表7所示，组分II、III、IV均具有抑菌活性，而组分II的抑菌活性最大，因....

本文编号：3911002