转录调控因子AbrB对生防短短芽胞杆菌X23中抗生素edeines生物合成的影响

发布时间：2021-11-02 06:54

　　非核糖体类抗生素edeines是短短芽胞杆菌Brevibacillus brevis X23产生的主要抑菌物质,提高其产量有助于增加生防效果。通过全基因组测序及生物信息学分析挖掘短短芽胞杆菌X23的全局性调控因子,基于Red/ET同源重组技术构建温敏型敲除载体,通过双交换同源重组技术获得短短芽胞杆菌X23全局性转录负调控因子缺失的突变株,然后采用平板抑菌、液相色谱-质谱联用（HPLC-MS）和实时荧光定量PCR研究了全局性转录负调控因子敲除对短短芽胞杆菌X23不同生长时期发酵液的抑菌活性、edeines产量、ede操纵子转录水平的影响。从短短芽胞杆菌X23基因组中挖掘到了1个全局性转录负调控因子AbrB,敲除abrB基因后edeines生物合成基因簇操纵子的转录水平在生长前期显著提高,在发酵48 h后abrB突变株中edeine A和edeine B总产量比出发菌株提高了1.1倍。结果显示短短芽胞杆菌X23中AbrB是edeines生物合成过程中的负调控因子,敲除abrB提高了edeines的产量。 

【文章来源】：中国生物防治学报. 2020,36(04)北大核心CSCD

【文章页数】：11 页

【部分图文】：

野生型X23菌株中abrB基因敲除流程以及转化子菌落PCR鉴定

从野生型X23基因组（NCBI登录号：NZ＿CP023474.1）中找到了一个注释为abr B的基因，长度249 bp，编码的AbrB蛋白编号（登录号：WP＿007719913.1）。与土壤短芽胞杆菌Br.agri（登录号：ELK42020.1）的AbrB蛋白序列相似性高达100%，与短芽胞杆菌属Brevibacillus spp.内的其他多个种的AbrB蛋白序列相似性在95%以上。与其他属的相似性分析表明，野生型X23菌株的AbrB与类芽胞杆菌属（Paenibacillus spp.，登录号：AEI46109.1）的AbrB蛋白氨基酸相似性最高，在83%～89%，与芽胞杆菌属（Bacillus spp.）的AbrB蛋白序列相似性也在70%以上，其中与模式菌枯草芽胞杆菌168的AbrB蛋白序列（登录号：NC＿000964.3）相似性达70.7%，其中N端的序列高度保守（图2A），并在染色体中abrB基因上下游的基因也与枯草芽胞杆菌168一致（图2B）。与解淀粉芽胞杆菌SQR9的abrB基因序列（登录号：NZ＿CP006890.1）的相似性达72.6%（图2A）。基于上述分析，初步确定该蛋白就是野生型X23菌株中全局调控因子AbrB。2.2 ΔabrB X23菌株的构建

转化子菌落PCR目的条带大小与理论一致。PCR产物测序结果显示无突变，表明野生型X23中的abrB基因已经被成功敲除（图3）。2.3 abrB敲除对X23菌株生长的影响

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3471551