霜霉菌侵染后葡萄叶片酵母双杂交cDNA文库构建

发布时间：2022-11-06 11:19

　　【目的】构建霜霉菌侵染后葡萄叶片的酵母双杂交cDNA文库,筛选致病因子在寄主葡萄体内的互作靶标,为葡萄霜霉病菌致病的分子机理研究提供材料基础。【方法】以一年生欧亚种葡萄西拉盆栽苗为试验材料,提取并等量混合霜霉菌侵染后0、12、18、24和36 h的葡萄叶片总RNA,利用基于Gateway技术的CloneMiner Ⅱ cDNA文库构建试剂盒:首先将cDNA与pDONR222载体进行BP重组反应连接,连接产物转化大肠杆菌DH10B感受态细胞构建初级文库;然后初级文库质粒与pGADT7-DEST载体通过LR重组反应,重组反应产物转化大肠杆菌DH10B感受态细胞构建次级文库;再随机挑取次级文库转化Y187酵母菌株构建酵母双杂交cDNA文库;最后利用ImageJ软件和PCR反应分别统计库容量和鉴定重组率。【结果】构建的初级文库库容量为4.6×10~7CFU,次级文库库容量为2.7×10~7CFU,均达到构建cDNA文库的标准。酵母双杂交cDNA文库的插入片段主要集中在1000～2000 bp,且具有很好的多态性,文库质量较高。【结论】构建的霜霉菌诱导葡萄叶片酵母双杂交cDNA文库符合酵母双杂交... 

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 试验方法
        1.2.1 霜霉菌侵染
        1.2.2 RNA提取、反转录
        1.2.3 初级文库（Uncut型）构建及保存
        1.2.4次级文库构建及保存
        1.2.5 酵母双杂交cDNA文库质量鉴定
        1.2.6 菌落计数方法
2 结果与分析
    2.1 总RNA提取及mRNA分离纯化
    2.2 初级文库的构建及鉴定
    2.3 次级文库的构建及质量鉴定
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]PK-15细胞酵母双杂交三框cDNA文库构建及鉴定[J]. 李珣,陈思宇,胡传活,王晓晔.  南方农业学报. 2016(05)
[2]华东葡萄白河-35-1株系抗霜霉病基因cDNA文库构建及EST分析[J]. 王沛雅,王跃进,张建文,朱自果,张朝红.  农业生物技术学报. 2009(02)
[3]副溶血弧菌感染的九孔鲍血细胞均一化全长cDNA文库的构建[J]. 王淑红,邹志华,张子平,施永春,王艺磊.  台湾海峡. 2008(03)

硕士论文
[1]我国主要葡萄产区霜霉菌对烯酰吗啉和嘧菌酯的抗药性分析[D]. 王喜娜.中国农业科学院 2017
[2]葡萄霜霉菌诱导华东葡萄抗霜霉病基因cDNA文库构建及EST分析[D]. 王沛雅.西北农林科技大学 2008



本文编号：3703410