防御假单胞菌双突变体H78ΔrsmA/E中hmgA基因对藤黄绿菌素生物合成的抑制

发布时间：2022-12-08 02:38

　　【背景】防御假单胞菌（Pseudomonas protegens） H78是分离于油菜根际的一株生防菌,其能合成藤黄绿菌素（pyoluteorin,Plt）等多种广谱抗生素,H78的rsmA/E双突变体中Plt合成被完全抑制。【目的】通过转座子诱变技术,筛选H78ΔrsmA/E双突变体中重新激活Plt合成的下游调控因子。【方法】通过同源重组的方法在pltL基因下游插入红色荧光蛋白（redfluorescentprotein,RFP）基因来指示Plt操纵子表达的激活情况;利用转座子随机插入突变、半随机PCR技术筛选并定位目标基因;通过基因回补等方法进一步验证基因功能。【结果】从约2万株H78ΔrsmA/E的转座子突变体中筛选到一株高产Plt和某种黑色素的菌株,并确定其插入位点为hmgA基因,hmgA基因回补能重新抑制H78ΔrsmA/E的Plt合成。【结论】假单胞菌双突变体H78ΔrsmA/E中hmgA基因对Plt的合成存在强烈抑制作用,是潜在的RsmA/E下游调控基因。本研究为进一步阐明Plt合成的调控机制与网络及通过基因工程提高Plt产量奠定了基础。 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和质粒及引物
        1.1.2 菌株培养基及培养条件
        1.1.3 主要试剂和仪器
    1.2 构建指示菌株
    1.3 转座子插入突变筛选
    1.4 确定转座子插入突变位点
    1.5 hmgA基因过表达质粒的构建
2 结果与分析
    2.1 指示菌株H78ΔrsmA/E-RFP的构建及验证
    2.2 在H78ΔrsmA/E中进行转座子诱变筛选并确定转座子插入位点
    2.3 hmgA基因的过表达对H78ΔrsmA/E-TM1中Plt生物合成的影响
3 讨论与结论



本文编号：3713374