毛果杨丝氨酸蛋白酶抑制剂基因PtrSPI的克隆及真核表达

发布时间：2024-04-21 12:38

　　利用PCR技术从毛果杨(Populus trichocarpa)中分离得到1条丝氨酸蛋白酶抑制剂基因PtrSPI,该基因cDNA编码区全长为1 176 bp,可编码391个氨基酸。BlastP预测结果显示,该丝氨酸蛋白酶抑制剂属于SERPIN超家族。多序列比对结果表明,毛果杨PtrSPI基因的氨基酸序列与已报道的胡杨(P.euphratica)丝氨酸蛋白酶抑制剂氨基酸序列XP₀11030699同源性最高,相似性为92%,且蛋白的C端氨基酸序列都含有高度保守的反应中心环(RCL)。在此基础上,成功构建了PtrSPI基因的重组真核表达载体pPICK-PtrSPI并获得了重组毕赤酵母菌株GS115-PtrSPI。利用终质量分数为0.5%甲醇诱导重组真核蛋白表达,SDS-PAGE电泳结果显示,在42648.45处出现了重组蛋白,与预期值一致。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 毛果杨PtrSPI基因的克隆与序列分析
    1.3 毛果杨PtrSPI基因真核表达载体构建
    1.4 重组表达载体pPIC9K-PtrSPI转化毕赤酵母及其转化子筛选
    1.5 真核重组蛋白的诱导表达
2 结果与分析
    2.1 毛果杨PtrSPI基因全长cDNA获得与生物信息学
    2.2 毛果杨PtrSPI多序列比对及进化树分析
    2.3 毛果杨PtrSPI基因真核表达载体的构建
    2.4 毕赤酵母转化子的筛选与鉴定
    2.5 重组蛋白的诱导表达
3 结论与讨论



本文编号：3960879