解淀粉芽孢杆菌ASR-12抗菌蛋白的分离纯化及其编码基因克隆

发布时间：2024-12-21 02:53

　　 为了从菌株ASR-12发酵液中分离纯化获得抗菌蛋白。将菌株ASR-12发酵液经硫酸铵沉淀、透析除盐后获得粗蛋白,粗蛋白进行热处理和Q Sepharose Fast Flow柱层析,纯化后的蛋白进一步进行LC-MS鉴定,并克隆其编码基因进行测序。粗蛋白经热处理和柱层析后得到5个吸收峰,活性检测结果显示峰Ⅳ具有较高抑菌活性,经SDS-PAGE检测显示为单一条带,分子量约为50k Da。LC-MS鉴定结果显示抗菌蛋白与M42家族肽酶同源性最高,覆盖度达到80%;并能从菌株ASR-12基因组中克隆到M42家族肽酶编码基因,测序结果经BLAST比对与解淀粉芽孢杆菌B9601-Y2的M42家族肽酶编码基因同源性达100%。菌株ASR-12产生的抗菌蛋白中,M42家族肽酶为主要活性成分。

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【部分图文】：

图1 粗蛋白对软腐病原菌的抑制作用

生防菌ASR-12的发酵液经硫酸铵沉淀、溶解、透析除盐、过滤后，蛋白粗提液呈黄褐色透明状。蛋白粗提液活性检测结果表明（图1）：解淀粉芽孢杆菌ASR-12抗菌蛋白粗提液对大白菜软腐病原菌具有较强的抑制作用，抑菌圈直径为23mm。2.2抗菌蛋白的纯化及活性检测

图2 粗蛋白热处理后抑菌活性检测

对蛋白粗提液100℃水浴处理20min后，其上清经活性检测对靶标病原菌仍有抑制作用，抑菌圈直径为20mm，略低于对照的23mm（图2）。将热处理后的粗蛋白上清液上强阴离子交换QSapheroseFastFlow柱，在280nm波长处检测，共得到5个主要吸收峰（图3）....

图3 抗菌粗蛋白热处理后的Q Sepharose Fast Flow柱层析图谱

图2粗蛋白热处理后抑菌活性检测图4各吸收峰组分抑菌活性检测

图4 各吸收峰组分抑菌活性检测

图3抗菌粗蛋白热处理后的QSepharoseFastFlow柱层析图谱2.3活性峰SDS-PAGE检测

本文编号：4018281