干姜不同有效部位对理中丸调节脾阳虚模型消化功能及能量代谢的影响

  本文关键词：能量代谢，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】： 理中丸是张仲景治疗脾阳虚证的传统名方,由干姜、人参、白术、炙甘草四味药组成,功能温中散寒,补气健脾。干姜作为理中丸的君药,在全方的配伍结构中处于核心地位,在对脾胃虚寒证的治疗中发挥着关键性作用。为了从实验的角度对君药在方剂中核心配伍地位的内涵进行揭示,本实验以理中丸中的君药干姜作为研究切入点,借助中医脾阳虚证候模型,对干姜及其不同有效部位对理中丸调节消化吸收及能量代谢功能的影响进行了比较研究,从药味和化学成分群两个层次的药效物质基础的角度,对君药干姜决定理中丸主要功效的核心地位进行了揭示。 全文共分为脾阳虚模型的制备和干姜及其成分对理中丸药效学影响的比较两大部分。 1“石膏-知母”复合法脾阳虚模型的制备 1.1目的 以清热泻火药石膏-知母代替常用的大黄、番泻叶类苦寒泻下药,并结合饥饱失常、劳倦过度的方法进行造模,以期建立更符合中医“寒凉伤阳、饥饱伤气和劳倦伤脾”致病思路的中医脾阳虚证候模型。 1.2方法 模型动物隔日足量喂食,每日在25℃水中游泳,直至大鼠连续三次吐泡下沉,或沉入水底,3秒内不能自行浮出水面,并以三种不同给药频率灌胃给予石膏一知母煎液,比较石膏-知母不同给药方法对制备脾阳虚模型的影响。方法1:造模1-6日隔日灌胃4℃的石膏-知母煎液(浓度为4:1,下同),剂量为10ml/kg(下同);造模7-12日,每同灌胃石膏-知母煎液,自然恢复15天。方法2:隔日灌胃给予4℃的石膏-知母煎液,剂量为10ml/kg,连续20天,自然恢复12天。方法3:每R灌胃给予4℃的石膏一知母煎液,2ml/只,连续12天,自然恢复9天。观察造模动物的一般生物学特征改变,检测体温、体重、食量的变化,以及血中D-木糖、6AS、MLT含量和肠组织中N0水平等与消化吸收功能及能量代谢相关指标。 1.3结果 三种造模方法均能引起造模动物一般生物学特征的改变,出现腹泻、倦怠、体温下降、体重减轻等表现。其中方法2的影响最小,模型动物恢复较快;方法1和方法3都能造成模型动物一般生物学特征的明显改变,且以方法3引起的模型症状变化更加明显且稳定。在消化吸收及能量代谢的相关指标方面,造模方法3能使血中GAS、MLT、D-木糖含量降至正常水平以下,使肠运动抑制性神经递质NO的水平降低,体温减低明显、食量减低、体重增长减慢。造模方法1对消化吸收相关药理指标的改变与造模方法3的影响相似,但对模型动物的体重和食量的影响不明显;造模方法2除能使模型动物的体重减轻外,对其他各指标均无显著影响。 1.4结论 对比实验采用的三种石膏-知母的给药方法,方法3的造模效果最为显著和稳定,即以每日灌胃给药,连续12天,恢复9天,是本实验证实的最有效的脾阳虚证候模型制备方法。 2干姜及其不同有效部位对理中丸消化吸收功能及代谢的影响 2.1目的 通过对理中丸中君药干姜,以及干姜中挥发性成分和水溶性成分对理中丸主要功效影响的研究,从药味和化学成分群两个层次,证实君药干姜及干姜中的主要活性成分群对理中丸整体功效的决定性影响,以初步揭示理中丸中君药核心地位的药理学和化学内涵。 2.2方法 采用石膏-知母复合造模法制备大鼠脾阳虚证候模型,造模期为14天1;治疗期间各给药组分别给予治疗药物,连续给药8天。供试药物分别为理中丸、四君子汤供试液,干姜水溶性成分和不同剂量挥发性成分(大、中、小剂量比为2:1:0.5)分别代替干姜原药材配伍入理中丸,组成的干姜水溶性成分理中配方和大、中、小剂量干姜挥发性成分理中配方供试液,其中挥发性成分的中剂量相当于干姜的常规剂量。造模及治疗过程中,对各组大鼠的体温、体重、食量进行测定;治疗结束时,测定下列两组指标。与消化吸收有关的指标有:胃的排空率和肠推进率;血中D-木糖(D-xylose)、胃泌素(GAS)、胃动素(MLT)含量,胆碱酯酶(CHE)活性,胃组织中H~+-K~+-ATP酶活性,空肠组织中NO含量;肠中血管活性肠肽(VIP)和肠间质细胞(ICC)含量(免疫组化法);测定肠肌间神经丛中胆碱能神经(AchE阳性神经)和氮能神经(NOS阳性神经)的分布(组织化学法)及累计光密度;观察胃、肠的病理改变,以及干姜挥发性成分理中配方中、大剂量组大鼠肝的病理改变。与能量代谢相关的指标有:空腹血糖值,血中肌酸激酶(CK)活性、乳酸(LD)水平;胃、空肠、骨骼肌线粒体ATP酶活性;肌糖元的含量;下丘脑中5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)含量。 2.3结果 为了对不同层次的研究问题分别进行说明,研究结果分为三个层次进行表述。 2.3.1理中丸与四君子汤对脾阳虚证消化吸收功能和能量代谢的影响差异 在胃的运动和消化功能方面,四君子汤可提高血中MLT、GAS水平,增加胃的排空率,但作用明显弱于理中丸。四君子汤对正常的胃H~+-K~+-ATP酶活性有明显抑制作用,但理中丸作用不明显。在肠的消化吸收功能方面,四君子汤和理中丸均可降低肠推进率,且无明显差异。四君子汤主要是通过降低血中CHE活性水平引起的,对NO无明显影响。虽然四君子汤对提高模型大鼠D-木糖吸收率和增加食量方面的作用优于理中丸,但两方在增加模型动物体重方面的作用无显著差异。并且对胃肠病理形态的观察显示,四君子汤对胃、肠粘膜的保护作用较理中丸弱。 在对能量代谢的影响方面,理中丸能改善造模引起的CK活性降低、LD和肌糖元含量升高;降低下丘脑中5-HIAA含量,升高体温。理中丸对造模引起的代偿性血糖升高、骨骼肌线粒体中Na~+-K~+-ATP酶和Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性增强均有明显的抑制作用。理中丸除了对胃组织线粒体中的Na~+-K~+-ATP酶的活性有所降低外,对胃肠线粒体中的其他ATP酶活性均无明显影响。 而四君子汤不能纠正造模引起的大鼠体温降低,对下丘脑中5-HIAA的含量没有明显影响;除了对血中CK的活性降低和对胃线粒体中ATP酶的抑制作用强于理中丸外,对其他指标的影响均弱于理中丸。 2.3.2干姜挥发性成分和水溶性成分对理中丸调节脾阳虚模型消化吸收功能和能量代谢作用的影响 在对消化吸收功能的影响方面,干姜挥发性成分理中配方和干姜水溶性成分理中配方均能提高脾阳虚模型血中GAS和MLT水平,干姜挥发性成分理中配方的作用优于干姜水溶性成分理中配方,也优于理中丸原方;但两者在增加胃排空率方面的作用无明显差异。干姜水溶性成分理中配方对血中CHE的抑制作用较强,同时能升高模型大鼠肠组织中降低的NO水平,降低模型大鼠肠中ICC数量,但对肠中VIP的含量无明显影响。干姜挥发性成分理中配方对血中CHE活性的抑制作用弱于干姜水溶性成分理中配方,也不能提高空肠中抑制性神经递质NO的释放,且对肠组织VIP的含量也无明显影响,仅在抑制肠中ICC的数量方面作用显著。然而比较干姜挥发性成分理中配方、干姜水溶性成分理中配方和理中丸原方对大鼠小肠推进率的抑制作用,三者并未显示出明显差异。此外,干姜挥发性成分理中配方对模型大鼠D-木糖的吸收率的增加和促进体重增长方面的作用,优于干姜水溶性成分理中配方和理中丸。在对胃肠组织形态的保护方面,干姜挥发性成分理中配方的作用更优。 在对能量代谢的影响方面,干姜挥发性成分理中配方能有效降低下丘脑5-HIAA水平,体温明显升高;同时能有效降低血中CK的活性和LD的含量,并能抑制造模引起的骨骼肌ATP酶活性及血糖的代偿性增高,使之恢复正常水平。干姜水溶性成分理中配方对下丘脑中5-HIAA不但没有降低作用,反而使其含量升高,对造模引起的体温降低无明显影响。除了对骨骼肌中ATP酶的抑制作用较为强烈外,干姜水溶性成分理中配方对其他各指标的改善作用均弱于干姜挥发性成分理中配方。 2.3.3不同剂量干姜挥发性成分对理中丸调节脾阳虚模型消化吸收功能和能量代谢的影响 干姜挥发性成分中剂量配伍能显著提高血中GAS和MLT水平,使之达到正常值以上,并能显著提高胃排空率。干姜挥发性成分大、小剂量理中配方虽也具有相似的作用,但作用较干姜挥发性成分中剂量配方弱。各干姜挥发性成分理中配方主要通过影响胆碱能神经功能和空肠ICC数量来抑制肠的运动功能。干姜挥发性成分中剂量配方对ICC数量的减少作用最强,大剂量配方对抑制血中CHE活性的作用最突出。对肠中NO含量的影响中,除干姜挥发性成分小剂量能使其含量上升外,姜醚中、大剂量表现为降低的作用,但中剂量配方能使肌间神经丛中氮能神经的累积光密度值(IOD)增高。从对改善肠推进率的作用来看,大、中、小剂量的干姜挥发性成分理中配方间没有明显差异。但对胃肠组织形态的保护方面,中剂量配方的作用更为显著。 对能量代谢功能的影响方面,中剂量和大剂量干姜挥发性成分理中配方可有效降低下丘脑5-HIAA水平,并使模型大鼠体温上升至正常水平;小剂量干姜挥发性成分理中配方虽然对下丘脑5-HIAA水平也有降低作用,但对造模后大鼠的体温降低未显示出明显改善作用。三剂量理中配方均能有效降低血中CK活性和LD水平,以及肌糖元含量,其中中剂量和大剂量干姜挥发性成分理中配方的作用更加明显。对于造模引起的血糖及骨骼肌线粒体中Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶活性代偿性增高,三剂量理中配方均有降低作用,中剂量配方对血糖的降低作用最突出,而小剂量配方对ATP酶的影响较明显。 实验中发现,大剂量干姜挥发性成分理中配方能导致血中GOT活性有所升高,使肝小叶中央静脉周围肝组织出现少量的细胞坏死,提示干姜挥发性成分配伍剂量过大时,有可能引起肝脏的损害。而小剂量和中剂量干姜挥发性成分配伍对肝脏的功能未见损害作用。 2.4结论 在对脾阳虚证模型的治疗中,理中丸所代表的温阳健脾法是针对脾阳虚证进行治疗的基本立法,干姜是理中丸实现温阳散寒作用的核心药物;而在干姜所含的挥发性成分和水溶性成分中,干姜的挥发性成分成分对理中丸功效的影响最为突出,对理中丸调节脾阳虚证模型消化吸收功能和能量代谢具有决定性作用。随着干姜挥发性成分在理中配方中配伍剂量的增加,理中配方的功效的作用强度发生改变,以挥发性成分中、大剂量配伍时,其疗效显著提高,但大剂量干姜挥发性成分理中配方时,存在对模型动物的肝脏产生损害倾向,因此从本实验的结果判断,干姜挥发性成分以中剂量配伍时,其疗效最佳。 通过上述的研究可以证明,君药干姜在理中丸配伍结构中的核心地位和功效上的决定性作用并不是方剂学理论中纯粹理论层面上的假设,而是具有重要的事实基础的。对方剂药效物质基础的揭示,又会对方剂配伍理论的认识产生至关重要的影响。

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