矢车菊素‐3‐葡萄糖苷对重金属镉、铅致大鼠损伤的的保护机制研究

发布时间：2016-08-23 07:10

第 1 章  绪论

卵子排出过程镉中毒会造成其外排作用终止并引起短暂性不育，目前认为镉通过对雌性动物雌激素合成、子宫、卵巢和卵母细胞的毒性作用诸如导致卵巢血管壁增厚，卵巢体积缩小、变性，卵泡不完全发育或畸形生长；子宫壁增厚，卵子生长障碍，降低输卵管内卵子数等影响雌性动物生殖。镉不容易透过生物体胎盘屏障，这在一定程度上减少镉通过母体接触胎儿的几率、降低了镉对胎儿的影响。透过胎盘屏障的镉对胚胎体的生长和发育会造成十分大的危害。Zhang 等[37]研究镉对 wistar 大鼠生殖系统的影响，在连续 6 周对 Wistar 大鼠注射不同剂量镉发现 1.0 mg/L  镉能引起大鼠雌性生殖器孕酮和雌二醇含量下降，同时影响相关雌激素基因的表达。Zhang 等[38]利用氯化镉探讨了镉对雌性生殖器激素黄体素的毒性作用机理，结果显示污染物胁迫可抑制合成类固醇的多种调控蛋白相关的酶活性和调控因子的表达，影响大鼠卵巢孕酮激素的合成，随着镉暴露剂量的增加晕酮含量明显下降。

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第 2 章  材料与方法 

2.1 实验材料

健康清洁级 6-8 周龄雄性 SD 大鼠 35 只，重量 230±10g。实验大鼠购自辽宁长生生物技术有限公司（SCXK(辽)2010-0001）。实验在专用动物饲养条件下饲养，，室温 25℃左右，相对湿度 60%-70%，光照 12-12h 明暗交替，实验期间动物均自由进食饮水。 

2.2 研究方法

市售上海杨百利公司杨梅汁按照 2：1（重量体积比）加入 0.5%三氟乙酸（TFA）的甲醇溶液低温浸提 24h。离心收集甲醇溶液。重复上述步骤三次。38℃下旋转蒸发除掉甲醇获得花色苷粗提浓缩液。该浓缩液用乙酸乙酯 1:1（体积比）液液萃取三次获得花色苷粗品。花色苷粗品过大孔树脂 D101 柱去除糖类、脂类物质。用 20 倍柱体积 0.5%TFA 溶液淋洗过滤糖、酸等干扰物质，然后采用 0.5%TFA 的甲醇溶液洗脱，得到纯度较高的花色苷混合物。 

第 2 章  材料与方法................ 20 

2.1 实验材料 ...................... 20
2.2  研究方法 ....... 22
2.3  观测指标及测定方法 ............. 24
第 3 章  结果与分析 ........................... 30 
3.1Cy-3-glu 对 Cd、Pb 染毒大鼠生长的影响 ........... 30
3.2 Cy-3-glu 对 Cd、Pb 染毒肝脏损伤的影响 ............. 33
3.3 Cy-3-glu 对 Cd、Pb 染毒大鼠肾脏的保护作用 .... 42
第 4 章  讨论与结论 ................ 52 
4.1 Cy-3-glu 对 Cd、Pb 染毒大鼠生长的影响 .. 52 
4.2 Cy-3-glu 对 Cd、Pb 染毒大鼠肝脏损伤的保护及机制..... 53
4.3 Cy-3-glu 对 Cd、Pb 染毒大鼠肾脏损伤的保护及机制 ....... 56 
4.4 Cy-3-glu 对 Cd、Pb 染毒大鼠睾丸损伤的保护及机制 .............. 57 
4.5  结论 ............... 59

第 3 章 结果与分析 

3.1Cy-3-glu 对 Cd、Pb 染毒大鼠生长的影响

由表 3.1 所示：初始体重，所有大鼠无显著差异 P>0.05。连续处理 5 天，各处理中组大鼠体重均呈现不同程度的降低。其中，镉处理组大鼠较对照组极显著降低 P<0.01，低剂量保护组大鼠较镉处理组显著降低 P<0.05，高剂量保护组大鼠体重较镉处理组无统计学差异但较正常组极显著降低 P<0.01。铅处理保护组体重较铅处理组体重呈上升趋势，体现部分剂量效应关系。体重从侧面反映机体损伤情况，高级剂量保护组大鼠体重变化均显示很好的剂量效应关系，变现为剂量升高，体重增重明显。

3.2 Cy-3-glu 对 Cd、Pb 染毒肝脏损伤的影响

由图 3.3：正常对照组，显微镜下肝细胞排列有序，肝细胞无肿胀、无脂肪样变性。镉、铅单独处理组大鼠肝脏组织结构异常，部分肝细胞肿胀，并可见显著的大面积脂肪坏死，细胞内存在大量脂滴，胞浆疏松，膨胀变性，出现核固缩，局部出现片状坏死灶；细胞质解离，炎细胞浸润明显。大鼠在肝脏组织中还有大量红细胞浸润。分散的肝细胞呈团状聚集，肝细胞轮廓不清晰，甚至有的肝脏细胞轮廓消失，肝细胞局灶性坏死，细胞核也部分溶解消失，细胞核间有异物夹杂和细胞碎片。低剂量保护组细胞仍可见部分空泡化坏死，其程度和范围均较污染物处理组有所缓解。肝细胞仍清晰可见少量小脂滴出现，未出现大面积气球样变。

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第 4 章  讨论与结论 

4.1 Cy-3-glu 对 Cd、Pb 染毒大鼠生长的影响

整个实验过程中对照组食欲、饮水正常，生长迅速，体重上升明显。铅、镉处理各组大鼠被毛失去光泽、暗黄，目光呆滞、嗜睡，体重变化未显现统计学差异。镉处理组大鼠终末体重较正常对照组下降，低剂量保护组轻微下降，高剂量保护组体重较镉处理呈上升趋势。铅处理及其保护组大鼠体重并未显现统计学意义的变化，铅处理组肝脏指数、肾脏指数、睾丸指数均随 cy-3-glu 剂量增加显示上升趋势。胸腺、脾脏、胰脏指数随 cy-3-glu 剂量增加并未体现很好的量效关系，低剂量保护组各脏器系数不同程度的上升，高剂量保护组指数呈下降趋势。

4.2 Cy-3-glu 对 Cd、Pb 染毒大鼠肝脏损伤的保护及机制

镉、铅胁迫及 cy-3-glu 保护各组 ROS、MDA 测定结果显示，各组 ROS、MDA含量均不同程度上升，表明镉、铅两种污染物可能通过氧化应激通路影响细胞、脏器代谢从而造成机体损伤。镉胁迫及高、低保护组大鼠肝脏的 ROS 测定结果显示镉处理组较正常对照组肝脏 ROS 升高（较正常对照组升高 0.67 倍），cy-3-glu保护组 ROS 均表现不同程度的降低。这与 MDA 测定结果镉胁迫高、低 cy-3-glu保护组 MDA 含量随着保护剂量的增加，MDA 含量下降是一致。镉胁迫高剂量保护组显示 MDA 含量基本恢复到正常水平（较对照组高 0.31 倍）。铅处理及低剂量保护组、高剂量保护组 ROS 变化不显著但 MDA 含量随 cy-3-glu 剂量升高呈明显下降趋势（P<0.05）。推测镉、铅进入肝脏，导致肝脏代谢紊乱而生成过多的自由基，脂质过氧化程度增加，表现为镉、铅处理均使肝脏 ROS、MDA 较对照组升高。Cy-3-glu 报道具有较强的清除自由基、抑制脂质过氧化产物的作用，实验结果也表明保护组均使 ROS、MDA 呈下降趋势，其中铅处理组 MDA 含量显著下降P<0.05。其清除过程涉及众多细胞反应，其抗氧化机制仍需要进一步氧化应激反应相关酶的测定结果。

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参考文献（略）

本文编号：100720