颌骨骨化纤维瘤的临床病理学分析和致病机制初探

第 1 章 骨化纤维瘤的临床病理学分析

1.1 材料与方法

1.1.1 实验标本
收集北京大学口腔医院病理科 1985～2013 年间在口腔颌面外科住院部手术的骨化纤维瘤患者的所有临床病理学资料。所有患者的标本均为福尔马林固定、石蜡包埋组织，行切片后 HE 染色。患者的临床资料、影像学、手术记录均来自于住院病例。所有的 OF 病例由病理科及放射科的三位专家从组织学，影像学和临床表现进行重新评估并重新确诊。若患者的临床影像和组织病理学资料不充分，则不被纳入分析。

1.1.2 实验方法
1）收集 1985～2013 年北京大学口腔医学院病理科诊断为骨化纤维瘤病人的临床资料；查阅和评价这些病例的临床、影像学及病理学资料进行重新评估，按照2005 年 WHO 头颈部肿瘤分类的标准纳入骨化纤维瘤的确诊病例2）对确诊病例进行三种类型的分类，详细辨别三种类型各自组织学特点3）对三种类型的骨化纤维瘤患者的性别、年龄、影像学等临床资料进行分析4）对手术方式进行统计分析5）对患者进行随访，并对随访资料进行分析。
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1.2 结果
通过三位病理学和放射科专家重新评估这些骨化纤维瘤患者的临床资料，并重新诊断之后，共 102 例 OF 患者纳入分析。

1.2.1 临床表现
所有患者的临床症状一般均为无痛性面部膨隆，多为发现颌骨膨隆畸形或感觉不适来就诊；仅有两例生长伴疼痛，一例生长伴破溃一年。发生在上颌者，有的可造成鼻塞，眼球突出，，视力障碍，头痛，有时可伴有感染；发生在下颌者，有时可出现下唇麻木，本组病人有 4 例出现生长伴下唇麻木；所有患者的术前病程 1 个月至 12 年不等。

1.2.2 三种类型骨化纤维瘤的年龄、性别分布
102 例 OF 患者中，经典传统型 OF82 例（82/102，80.4%），JPOF14 例（14/102，13.7%），JTOF6 例（6/102，5.9%）（图 1，表 1，表 2）。所有 OF 患者首次就诊年龄在 1~68 岁之间，平均年龄 28.4 岁，以 20～40 岁的女性多见；经典传统型 OF 患者年龄在 1~68 岁之间，平均年龄 29.6 岁；JPOF 患者年龄在 5~61岁之间，平均年龄 28.6 岁，第一个发病高峰期为 20～29 岁女性，在 40～49 年龄段有女性第二个发病高峰期；JTOF 患者发病年龄最小，在 6~17 岁之间，平均年龄 12.5 岁。与其他两种类型不同，它明显男性多发（5/6 例）。三种类型的骨化纤维瘤在 0～19 岁的年龄段，发病男性均多于女性，且男女发病比较 P＜0.05 具有统计学差异。
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第 2 章 散发性骨化纤维瘤的致病机制初探散发性骨化纤维瘤中 HRPT2 的基因突变分析

2.1 材料与方法
2.1.1 主要设备
BX40 显微镜（Olympus, 日本）
Mili-Q 去离子水纯化系统（Milipore, 美国）
恒温水浴箱 SHH-W21（长安仪器仪表公司, 北京）
SANYO biomedical freezer -80℃低温冰箱 MDF-U52V（SANYO, 日本）
5415D 小型高速离心机（Eppendorf, 德国）
5415R 小型高速离心机（冷冻型）（Eppendorf, 德国）
Eppendorf 微量加样器（Eppendorf，德国）
NanoDrop 8000 超微量分光光度计（Thermo，美国）
280-9823 电子天平（Switzerland）
稳压稳流水平电泳仪 DYY-III （六一仪器厂，北京）
Biovision1000/26M 凝胶成像系统（Vilber Lourmat, 法国）
Neus gradient 梯度 PCR 仪（Eppendorf，德国）

2.1.2 主要试剂
Dneasy Tissue Kit 组织 DNA 提取试剂盒（Qiagen，美国）
Go Taq DNA Polymerase Mix（Promega，美国）
DNA maker DL2000 （Takara，大连）
引物合成：上海英骏生物技术公司
测序完成：上海英骏生物技术公司
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2.2 主要的实验方法和步骤
OF 的病变组织和血液的基因组 DNA 提取采用硅胶膜吸附过滤方法，提取采用试剂盒 QIAamp DNA Mini Kit（Qiagen, 德国，图 6），按照操作说明进行。提取的基因组 DNA 进行 1~1.5%琼脂糖凝胶电泳，扫描成像（图 8A）。并且使用核酸定量分析仪检测 DNA 浓度，分装后一部分用于 PCR，一部分-20℃低温保存。测序反应由上海英骏生物技术有限公司（ABI 3700 测序仪）完成。对测序发现异常的样本，进行反向测序及 3 次以上独立 PCR 产物测序予以验证。测序反应所用的引物同 PCR 反应引物，测序方向见表 7。核苷酸及氨基酸变异的命名依据已发表的命名指南[35]。胚系突变（Germ-linemutation）也称遗传性突变（hereditary mutation），是指要发育成精子或卵子的生殖细胞或未分裂的受精卵发生的基因改变。当突变传递给子代时，子代个体每个细胞都携带这些改变。（Definition from: Office of RareDiseases at the National Institutes of Health）。在遗传性疾病和如视网膜母细胞瘤，维尔姆斯瘤(肾胚胎性恶性混合瘤)等特殊的肿瘤中，胚系突变扮演了重要的角色。本研究在散发性 OF 中发现 HRPT2 在 1 号外显子前内含子处发生生殖细胞水平的突变 c.1-11dupG，见图 9，其具体的作用有待进一步实验分析。
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第 2 章 散发性骨化纤维瘤的致病机制初探.....15
散发性骨化纤维瘤中 HRPT2 的基因突变分析...........15
2.1 材料与方法.........15
2.2 主要的实验方法和步骤....16
2.2.1 DNA 提取..........16
2.2.2 聚合酶链反应（PCR）..........16
2.2.3 PCR 产物检测...........16
2.2.4 PCR 产物直接测序.......... 20
2.3 测序结果.....20
2.3.1 胚系突变...........20
2.3.2 多态性.......20
2.4 讨论......21
2.5 结论......22
第 3 章 综 述....... 26
颅颌面骨的良性纤维骨病损..........26

第 3 章 综 述

颅颌面骨的良性纤维骨病损
颅颌面骨的良性纤维骨病损（Benign Fibro-Osseous Lesions，BFOL）包括反应性骨病损、骨发育异常、肿瘤，疾病的治疗方式也不尽相同。有些病损只发生于颅颌面骨，而有些病损还合并身体其他部位的骨病损[1, 2]。这一类病损都有骨和纤维组织成分，很多都有不规则的骨小梁以及球形的牙骨质钙化团块形成，它们是相同的组织学模式的变形[3]。诊断 BFOL 病变时，绝大部分都需要同时结合临床，组织学和影像学表现。FD 是一种发育性疾病，可以发生在全身任何骨。2005 年的 WHO 头颈部肿瘤分类中将 FD 分为三类，即单骨性 FD、多骨性 FD 和颅颌面 FD[5]。发生在单个骨的 FD 称为单骨性骨纤维异常增殖症（Monostotic Fibrous Dysplasia,MFD），发生在两个或者两个以上骨的 FD 称多骨性骨纤维异常增殖症（Polyostotic FibrousDysplasia,PFD）[4, 6]，此外，当多骨性 FD 合并皮肤的色素沉着及多种内分泌系统异常（最常见的内分泌的异常表现是性腺功能亢进引起的周围性性早熟[8]）时，被称为 McCune-Albright syndrome。

总结

颅颌面纤维骨病损不能按照组织学特点分型。所有这些病损中，组织学表现都有或多或少的重叠和类似，很多时候，同一病损可能还会伴有有其他纤维骨病损的组织学表现。纤维骨病损应该由影像学表现和生长模式进行分类。边界不清涉及大部分颅面骨的为 FD,除非有相当大的破坏或动脉瘤样骨囊肿形成，FD 在普通情况下都应该行保守治疗。OF，边界清楚，膨胀性生长，X 线中低密度影中可有高密度钙化影，需要手术切除。骨异常增殖症，一般与牙根关系密切，应尽可能的保守治疗。
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参考文献（略）