山东连翘药物资源评价及活性成分提取技术研究

发布时间：2016-06-08 22:25

第一章 绪论

现代研究和临床实践证明连翘具有显著的抗菌、抗炎、抗氧化、抗病毒以及保护肝损伤、抗肿瘤等、降血脂作用。连翘对多种革兰阳性菌、阴性菌如金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎双球菌有较强的抑制作用，对柯萨奇 B5 病毒、埃柯病毒、亚洲甲型流感病毒、鼻病毒等也有较强的抑制作用。连翘还具有抗氧化应激、保护神经等作用。因此连翘在临床应用和药物开发等发面具有重要价值和广阔前景。连翘药材来源以野生为主，生长环境、品种、气候等的差异，是连翘药材产量和质量存在巨大差异的重要因素；另外近年来连翘的市场需求日益增长，产区产生抢收现象，采集随意性强，也是导致药材质量千差万别的重要原因。连翘资源已成为限制连翘产业发展的主要因素。因此对连翘资源进行系统性研究和评价已成为连翘药材可持续发展的基础性工作，开展对连翘资源的研究有利于筛选高产、优质品种，规范采收期，提高药材的产量和质量，有利于药材质量的分级，保证临床和生产用药的安全和有效，同时也为连翘的规范化栽培、管理和标准化生产奠定基础。
........

第二章 连翘多成分高效提取方法研究

1 引言

多成分的质量控制模式对中药的提取分离提出了更高要求。提取是中药质量分析和中药制药的关键环节，直接影响到质量标准的制定和最终药物制剂的质量和生产成本。传统提取方法不同程度地存在提取周期长、损失多、提取收率低、提取物中杂质含量高、高耗能高污染等问题，不利于中药质量控制水平的提高和中药制药的现代化发展。随着现代科技和社会的发展，提取技术正向着高效、节能、环保方向发展，同时应充分体现中药多成分、多靶点的作用特点。微波辅助提取（MAE）和超声波辅助提取(UAE)是近年来发展起来的新技术，具有高效、节能、环保等特点，符合绿色化学的发展方向。然而关于 MAE 和 UAE 在中药成分提取中的许多问题和机制还需深入研究，如提取过程中成分的溶出机制，提取过程中的关键工艺参数，成分性质和结构对与提取工艺参数的关系，提取过程中成分的稳定性及变化等都是需要深入研究和解决的问题。本研究首先探讨连翘中多种化学成分的 MAE 和 UAE 提取方法和机制，优化提取工艺，为分析连翘中多种活性成分奠定基础，也为 MAE 和 UAE 在中药质量控制和药物生产中的应用提供科学依据。

2 材料与方法

重点考察了影响 MAE 的一些关键参数，包括溶剂种类、微波功率、温度、溶剂量、提取时间等对提取效率的影响，以多种成分的提取率为指标，分析这些参数对不同成分的影响，并通过响应面试验设计研究参数对不同成分提取的相互作用和影响，优化提取工艺。响应面试验设计采用 Box–Behnken design 方法，重点考察溶剂量，微波功率和提取时间三个参数。试验设计的因素水平表见表 2-1。

第三章 连翘果实和叶中多成分代谢研究................35

1 引言..............35

2 材料与方法.......35

3 结果与讨论....................37

第四章 连翘花、叶、果化学成分研究及药物资源评价................41

1 引言.....................41

2 材料和方法..................41

3 结果与讨论.................44

第五章 山东连翘种质资源分类评价..................67

1 引言..............67

2 材料与方法.................67

3 结果与讨论...............67

第五章 山东连翘种质资源分类评价

1 引言

不同领域的研究者对于种质资源鉴定以及评价方法的差异性，正如农学家最关心“农艺性状”，药用植物学家更关心的是“化学成分”的变异，并以“有效成分”含量和比例的多少作为评价药材质量和筛选核心种质的主要依据。因此对于药用植物的分类应该注重于其药用价值，而体现药用价值的就是其所含的化学成分。植物次生代谢产物是植物生长发育和适应环境需要而产生的化学成分，具有明显的种质特性地和一定的地域特性。应用植物次生代谢来进行植物分类愈益接近其自然演化的实际情况。本章对连翘花、叶、果的主要性状进行观测，结合第四章的化学成分对连翘种质资源进行分类评价，，探讨山东连翘种质资源的多样性和差异性，研究结果将为筛选基于药用价值的优质资源提供直接的和最有价值的证据。

2 材料与方法

叶和果的采集同第三章，从老枝枝条中部选取无损害的生长完全的叶十片，用直尺测量叶的形态特征数据，记录叶的其他形态特征。果实的采集选取生长完全无损害的果实十个，用卡尺测量果实的形态特征数据，记录果实的其他形态特征。在盛花期于每个植株采集 5 朵鲜花，用镊子将花药取出，放入 1.5 mL EP 管中，常温下干燥 48 h 后用于观察花粉形态。取花粉均匀散布在贴有双面胶带的样品台上，用离子溅射仪使花粉表面覆盖一层金膜。镀膜后在 JSM-6380LV 型扫描电镜下观察，选择形状、大小有代表性的花粉进行拍照。放大 1000 倍观察花粉个体形态，5000 倍观察花粉表面纹饰，并分别进行显微拍摄。每份材料随机取 20 粒花粉进行大小的测量和统计，取平均值和变异系数表示变化幅度。花粉粒大小以极轴长和赤道轴长来表示，其形状以极轴长和赤道轴长的比值来表示。叶和果的化学成分分类评价采用第三章的测定结果。分类评价采用聚类分析方法和主成分分析，分析方法同第三章。

.......

讨论与总结

1 连翘花叶果化学成分和药物资源分类研究

本研究通过测定山东不同区域连翘花叶果中多种化学成分发现，花叶果中成分种类相似性大，但不同成分的含量差异巨大，所含成分各有特点和优势，在利用中应加以区分。连翘花中富含芦丁、松脂醇 β-D-葡萄糖苷和松脂酚，叶中富含芦丁、连翘酯苷 A 和连翘苷，果实中富含连翘酯苷 A 和异连翘酯苷 A。不同资源间化学成分巨大的差异会影响临床应用和药品生产中疗效和质量的稳定，甚至存在安全隐患，根据物质基础进行资源分类是保证中药质量均一稳定的有效方法，也是中药质量研究的发展趋势。本研究分布对花叶果作为药物资源进行了分类分级。将花分为富含芦丁型、富含松脂醇葡萄糖苷型、低活性成分型、富含连翘酯苷 A 型以及多木脂素型；将叶分为高木脂素型、富含苯乙醇苷型、一般含量型和高活性成分型；将果实分为低活性成分含量型、中等活性成分含量型和高活性成分含量型。基于化学成分，以药用价值为核心对连翘花、叶、果的分类分级为连翘新药物资源的开发和合理应用奠定了重要基础，在药物应用中可以根据临床和生产需要选择连翘不同的部位和不同的化学类型。

2 连翘种质资源分类评价

对种质资源的分类有多种方法，目前的研究深入到分析水平。化学分类及时在分子水平上的一种方法。化学分类学是以研究生物类群的特性、起源、亲缘关系及其系统发育规律的分类学分支，即从分子水平来分析生物进化的一门学科。化学分类应用的化合物，通常分为三类，即初生代谢物、次生代谢物及带信息分子。其中初生代谢物是重要的代谢途径部分，它们中的大多数普遍分布于植物中，如乌头酸、柠檬酸，以及氨基酸和糖类等，在化学分类上的应用价值不大。次生代谢产物，在植物中的分布具有种属的特性，也正是由于它们有限地在植物中分布，因而成为有价值的分类学资料。尽管对于次生代谢物的功能问题，尚存在很大争论，但就分类学而言，其价值在于它们的分布，以及它们与其他性状的相关性。应用植物次生代谢的分布来进行植物分类愈益接近其自然演化的实际情况。

.........

参考文献（略）

本文编号：55018